s******y
发帖数: 28562 | 1 In principle, matrigel tube formation has something to do with cell invasion
, including the secretion of MMP and the formation of invapodia.
However the transwell migration reflect the overall chemotaxix property that
has very little relevence to invapodia.
These two assays measure very different aspect of cell motility. Therefore,
tube formation has nothing to do with transwell asssay, in principle.
Thise people who claimed they have a relationship are simply saying whatever
that is convenient |
|
g***e
发帖数: 4 | 2 最近出现怪现象,做了个siRNA,对tube formation促进,对transwell的migration却抑制
,那到底算促进angiogenesis还是抑制呀,一般不都两实验同样趋势么? |
|
g***e
发帖数: 4 | 3 我也怀疑呢,没测proliferation,划痕就做了一次,似乎趋势和transwell一样.
我看有人说matrigel tube formation和细胞的侵袭,运动,还有什么什么有关,但我也在
很久以前貌似看到有篇很老的文献说迁移得弱的tube formation反而强,还说tube
formation不等同于在体的血管发育中的任何过程,只是一个间接反映细胞功能的指标.
但是这回出了这结果,再一查文献,都说迁移弱的tube formation也弱,简直是,难道当初
是做梦?
现在简直哪个结果都怀疑,恨不得都重新做一回. |
|
g***e
发帖数: 4 | 4 我也怀疑呢,没测proliferation,划痕就做了一次,似乎趋势和transwell一样.
我看有人说matrigel tube formation和细胞的侵袭,运动,还有什么什么有关,但我也在
很久以前貌似看到有篇很老的文献说迁移得弱的tube formation反而强,还说tube
formation不等同于在体的血管发育中的任何过程,只是一个间接反映细胞功能的指标.
但是这回出了这结果,再一查文献,都说迁移弱的tube formation也弱,简直是,难道当初
是做梦?
现在简直哪个结果都怀疑,恨不得都重新做一回. |
|
m******e
发帖数: 18 | 5 我们以前做的时候是把2个刀片用胶布绑在一起， 在3cm dish 背面划线，十字交叉，
然后种细胞。 100% confluent 后用粗的1000ul的tip头在dish里面划线，这个wound应
该在做的一条平行线记号里。选十字交叉的区域拍照片作为Time0,平行线记号应在照片
上。 每个时间段都选十字交叉的区域拍照片。wound healing定量不太好， transwell
assay 有kit,定量方便。不要用染膜细胞计数的， 有读吸光度的。 |
|
t****p
发帖数: 1504 | 6 生物学中让人头痛的地方就是这种情况，想做定量，但是varyation太大，不知道是否
该相信。
做过一些迁移的实验，多说两句。
1 transwell assay: 细胞状态很重要。你如果是贴壁细胞，trypsinization时间的些
微差别，离心重悬吊强度就有影响。另外我非常怀疑公司的产品是否能够做到不同孔的
膜都做得一样。
2 in vitro wounding assay：就是贴壁细胞划线，然后在特定时间看迁移到细胞所覆
盖的面积。此assay对medium的成分非常灵敏，要严格按照别人的protocol来做。换个
medium结果竟然会相反！你说该信哪个？此assay的定量分析非常耗时。
3 needle assay：就是一个小needle尖头释放chemoattractant，然后用软件实时记录
每个细胞的迁移，运算得到迁移速度和角度。模式生物Dictyostelium做这个assay的时
候需要先polarize才能迁移。很多文章说某个突变体影响力迁移速度。问题是很多突变
体本身它没法被polarized。你说究竟是它的极化能力受到影响还是本身的迁移受到影
响呢？曾经给c... 阅读全帖 |
|
n*m
发帖数: 27 | 7 多谢你们的解析，其实我也不知道那个做migration的是transwell还是boyden
chamber，反正就是那种买的insert独立包装的，把它放在２４well plate中。
control就是无serum的培养液，实验组就是正常１０%serum的培养液。结果就是有时候
control里migration的细胞很少（相对１０%的培养液的实验组），有时候很高，与实
验组没区别。migration的时间是４小时。
感觉每次细胞状态变化很大，除去没migration的细胞这个操作变化也很大，不知道大
家都是怎么做的，protocol都是说用cotton swab，感觉这个操作起来变化太大了
大家是怎么操作，怎么染色，定量的？
谢谢！！！
chamber |
|
h******y
发帖数: 351 | 8 Although the HEK/OATs over-expressing cells can be used to study drug uptake
, they do not form epithelial barrier on Transwell, so it is impossible to
study drug efflux using this model. Plus, HEKs lack other important
membrane transporters besides OATs/OCTs.
What do you think about primary RPTECs? Do they suffice for in vitro cell
model?
OCT2 |
|
