q****2
发帖数: 208 | 1 werstern blot 蛋白经常显出来是一条连在一起的带是为啥呢？
排除
1. 上样品量太多
和sample buffer 加的dye太浓了 会不会有关系呢？ |
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D*a
发帖数: 6830 | 2 一般建老鼠系的时候，要genotype, southern western都做了来确认你的老鼠没有目标
蛋白表达，建立起来之后，就可以只做genotyping了。
如果是tissue specific的KO，交配完也要先做tissue specific PCR和 western确认，
cell specific的最好还能加IHC确认，然后之后的routine的交配可以只做genotype
我看的paper里面一般都会有PCR和werstern/IHC的图来表示这个蛋白是确实敲掉了的。
很多KO的mRNA转录很活跃，因为一般情况下你并没有动它的promoter. 但是一般情况下做KO的会尽量使mRNA丧失功能，比如造成移码突变等等，因此一般蛋白翻译会是无功能的小片段，然后被清除了。因此考虑不周的话也会造成问题。比如一个蛋白有20个exon，你切了第10个想让他KO，但是恰好这个蛋白有两种长度形式，其中一个小的是利用了前面的9个exon，那么可能你就没有把这个小的(完全)敲掉。
但是蛋白的变异体的功能这个很难说啊，我觉得大部分应该是没活性的吧？ dispensable与否
要看是生理情况下... 阅读全帖 |
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w**********k
发帖数: 386 | 3 能把Werstern Blot 还有 statistical graph show出来吗？把所有的target都用符号
代替
谢谢。 |
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