h**********r
发帖数: 671 | 1 我一直做的是细菌,想表达一个植物的基因.是不是只需要克隆mature protein的coding
sequence(当然要保证ORF等正确)？
那叶绿体的信号肽怎么确定呢?看了有些paper直接认为前60个氨基酸就是,这不靠谱吧?
到底应该怎么分析呢?多谢指点! |
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c**i
发帖数: 265 | 2 最近在研究酵母分泌，请问大家有什么信号肽能引导蛋白进入ER，但蛋白会在保留ER里
，不会被分泌出来。谢谢。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 3 我是想把目的蛋白和核定位信号序列融合构成plasmid，希望转染后表达的蛋白都进到
细胞核内。这种融合的时候在NLS和目的基因之间要加其他序列吗？不会就这么硬生生
的连在一起吧？谢谢! |
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c*********d
发帖数: 9770 | 4 荒猫牛不耕微信号laoniu003005
功能介绍
好文分享
来源：荒猫之舞
作者：荒猫
中美贸易战告一段落，毫不意外地，咱们又赢了。不过与以往不同的是，这次美国也赢
了，是双赢。据报道，咱们答应了美国减少贸易逆差的要求，所以美国赢了；而因为要
减少贸易逆差，中方将大量增加自美购买商品和服务，这样可以满足咱们不断增长的消
费需求和促进高质量经济发展，所以咱们也赢了。
但让我感觉不可思议的是，这么好的事情，为什么一直不做呢？为什么要在美国政府的
逼迫下去做呢？是因为没有想到？那岂不是说那些人能力低下？是因为想到了而不做，
那岂不是证明了那些人很坏？
而且在美国高调启动贸易战之初，咱们是抱着多大的决心，宁为玉碎不为瓦全，一定要
打赢的，一定要粉碎美国人阻挡咱们大国崛起的阴谋的。当美国提出500亿的清单时，
咱们针锋相对；当美国提出1000亿的清单时，咱们继续应战；而当美国把清单的总价提
高到2000亿的时候，一夜之间，美国就不是阻挡咱们大国崛起，而是有利于咱们大国崛
起了。美国的要求原来是有利于咱们的发展，而不是遏制咱们的发展了。我恍然大悟：
原来以前的针锋相对，是用的激将法，是为了刺激美... 阅读全帖 |
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t******y
发帖数: 716 | 5 如果蛋白N端有信号肽，Flag连着信号肽，信号肽的切除不是100%，但也是绝大多数，
如果碰到这种情况检测不到就很正常了。或者下次你用MG132来抑制蛋白降解。看看目
标蛋白的量是否上去。 |
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q*****d
发帖数: 445 | 6 为什么这个质粒上的信号肽序列说是从酵母里来，但是蛋白序列确有几个氨基酸的差别
？我想用我的酵母分泌表达几个蛋白，应该是以酵母MF(ALPHA)前270bp的序列为准，还
是以pPIC9K质粒上的信号肽序列为准？我想是不是因为pPIC9K质粒主要是以P.Stiplis
为宿主，所以有几个氨基酸的优化。还望明白人给解释一下，以便我进行引物设计，谢
谢！ |
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q*****d
发帖数: 445 | 7 请问信号肽与后面要分泌蛋白的ORF之间是不是还要加入几个特殊的氨基酸呢？另外酵
母里除了Mata这个信号肽分泌能力强之外，还有哪些基因啊？ |
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X*******0
发帖数: 134 | 8 某原核蛋白,在其原来的菌里的定位未知,蛋白序列本身找不到信号肽.
在大肠杆菌里表达.由于胞质表达总是包涵体,于是改周质表达.用的是pET26b,就是N端
加了一段pelB信号肽的.问题来了,表达完的蛋白去哪儿找?用哪部分纯化?是用细胞,还
是用培养基上清?问题等价于,蛋白(46kD)会不会大多数穿过细胞壁漏到培养液中.
做生化的,大量提蛋白解结构的,比较容易解答我的问题. |
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t******y
发帖数: 716 | 9 不同的蛋白表现不同。你这个蛋白是在哪里表达的？Flag在C末端还是N末端，如果是N
末端，是否存在信号肽，通常信号肽在表达过程中会被切除。还有一种情况是M2抗体对
位于N末端的Flag识别效率远远超过位于C末端的Flag，是否可以把Flag放到N末端。 |
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f*******e
发帖数: 354 | 10 信号肽的切除是蛋白酶体途径？ 我不懂这个
怎么看是否有信号肽，预测？或有特征氨基酸谱？
谢谢 |
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f*******e
发帖数: 354 | 11 信号肽的切除是蛋白酶体途径？ 我不懂这个
怎么看是否有信号肽，预测？或有特征氨基酸谱？
谢谢 |
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t******y
发帖数: 716 | 12 一般在内质网，细胞表面表达的蛋白有信号肽。可以用signal peptide prediction软
件查询。通常信号肽都是一下疏水性的氨基酸组成，譬如大量的亮氨酸，L。 |
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e********r
发帖数: 147 | 13 你说的对，我们可以合成这段小肽然后用CD试试。不过这么做还不能解决前面的跨膜区
感应到ligand后，信号传过来如何改变它的构象这个核心问题。这个如何破？另外，我
就是我的老板，呵呵...... |
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s******y
发帖数: 28562 | 14 靠！如果你就是老板的话那我可要收咨询费了！呵呵。
关于你说的“跨膜区感应到ligand后，信号传过来如何改变它的构象”这个问题我不是
很明白。
你说的这段17 Aa 肽链到底是在细胞内还是细胞外？ |
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l****y
发帖数: 398 | 15 想干嘛？考虑一下nanobody吧， 15kd,小小的，fuse个信号肽或者直接和一种什么肽
coincubate,都可能钻进去。 |
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发帖数: 1 | 16 问个问题： 分泌型细胞趋化因子，前体是pro-XX, 成熟体是XX （剪切掉C terminal几
个氨基酸）， 其基因表达的信号肽作用是什么？ 构建过表达载体时是不是可以去掉信
号肽和pro-XX 多肽尾巴？ |
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发帖数: 1 | 17 西湖大学的景观图
朋友要我评论，我其实已经就西湖大学写过一篇文章，现在兴趣也不浓。我是希望首所
中国民办大学西湖大学办得好的，但是他们在美国招人的牛皮也吹得太大了。
这西湖大学有些事情确实做得过了，刚开张时五年超Caltech（美国加州理工）的豪言
还在记忆中，现在又来这招：在美国花巨资雇人。如果这在哈佛传递的信息是真的，西
湖雇教授是美国同级教授几倍的年薪，孩子重返美国读书的学费西湖大学包。这些条件
开得太没有边际了，反而会抑制后续的捐款热情。
我们来举个美国一流大学的例子：圣路易斯华盛顿大学的助理教授为9万美元左右的年
薪，西湖如果三倍会支付近30万美元，比有些Endowed教授（讲席）还高。如果西湖用
几倍的钱雇华大的副教授（10-15万美元）或正教授（15-20万美元), 费用更是惊人。
为什么要支付助理教授级别的年轻人这么多钱？一点不错，助理教授是人生创造性的高
峰期，很多科学大佬们的标志性成就正是在这阶段完成的，但是他们当时都不富有，却
享受完全的沒有党委管的学术自由。他们要有一定的紧迫感，因为Tenure Clock（终身
评议时钟）每天都在走。你一下就给几十万美元的年薪... 阅读全帖 |
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b*********e
发帖数: 870 | 18 没太看懂。。。。
你是想用一个同样的信号肽带着不同的FPs，同时表达在一个细胞里？那他们三个都会
去同一个地方吧？比如你用CAAX，就会到膜上。
那你担心什么样的overlapping 问题？你这个表达的要求，他们三个的信号难道不是永
远在一起么？ |
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h**********r
发帖数: 671 | 20 Predotar v. 1.03 using plastid prediction networks |
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q*****d
发帖数: 445 | 21 没有intron啊，我要构建一个cellulosome的骨架，这上面有一个AGA2基因的信号肽，
三个cohesion分别来自三个微生物，第二和第三个cohesion之间有一个CBD(cellulose
binding domain)，现在问题出在第二个cohesion序列上，如果用这人序列就不能翻译
为一个蛋白，但是把第二个改变一下大小，就可以翻译成一个蛋白了。到底是什么原因
，我现在也没有搞清楚，我反正是把序列改动一下，就OK了！难道这个Vector NTI能够
自动识别intron吗？ 这是最新的序列，大家如果有空可以比对一下，只有几个碱基不
同而已，太令人匪夷所思了。
atgcagttacttcgctgtttttcaatattttctgttattgcttcagttttagcacaggaactgacaactatatgcg
agcaaatcccctcaccaactttagaatcgacgccgtactctttgtcaacgactactattttggccaacgggaaggc
aatgcaaggagtttttgaatattacaaatcagtaacgtttgtcagtaattgcgg |
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s******y
发帖数: 28562 | 22 有大量的蛋白在合成之后是会被切的。如果是信号肽，有一些算法可以预测。
如果是calpain 切的话也勉强可以预测，
如果是被ER, golgi, lysosome那些乱七八糟的蛋白酶切的话就更难预测了（主要是数
据库没有建立起来） |
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k******0
发帖数: 1073 | 23 糖链修饰或超强输水，都引起表观分子量异常。
非变性胶，不是用来测分子量的。
检查抗体特异性如何或是否目标蛋白质发生降解或切除信号肽，等等。 |
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y*********u
发帖数: 183 | 24 很多了，多了去了，比如定位到膜上的途径之一是信号肽
定位到核里的途径之一是NLS dependent - importin 介导途径
各种途径例外又很多，比如beta catanin 不需要Importin介导也能进入细胞核
楼主还是看看相关教材章节比较靠谱 |
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e*r
发帖数: 103 | 25 只是想知道蛋白如何到内膜上。如果蛋白序列本身没有信号肽，会有哪些途径？ |
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b*********1
发帖数: 5 | 26 这种不太常用的前体蛋白估计公司不会生产。你可以自己做。去掉信号肽，可以得到前
体。具体什么酶可以激活应该有文献报道。你也可以找公司做。 |
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y*****w
发帖数: 146 | 27 peptide在ER内被修饰，然后如何被导入mitochondrial呢？或者导入到细胞质也行，只
要不被降解或者分泌处体外。有这种可能行吗？需要加什么信号肽呢？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 28 这个好像是信号肽的数据库，这个其实一般在peptidome 里面测不到的。 |
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X*******0
发帖数: 134 | 29 我要提取的蛋白,带有C端6xHis-Tag,但是挂不上Ni柱,上柱后原封不动地出现在流出液
里,一点都没挂上.
由于必须用带N端pelB信号肽的pET26载体,并且N端靠近活性中心,所以只能把His-Tag放
C端,而且我已经试了放N端,蛋白彻底消失,估计N端Tag导致不稳定,降解了.
那么,除了Ni柱以外还有没有别的比较实用的办法纯化这个蛋白呢?我要用它作酶活鉴定
,所以需要纯化分离.蛋白大小在46kD.理论pI6.9. |
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s******y
发帖数: 28562 | 30 是的，是会有这个问题，不过我们本来是打算用一个空的GST-6Xhis 来预
处理得到的抗血清，把那些和那个peptide 没有关系的东西都清理掉。
不过我就怕万一运气不好，发现把血清处理完之后彻底就没有抗性了
（就是说根本没有抗peptide 的信号）
我们这里还不能直接用(-peptide-)n, 因为我们要求抗体能够识别peptide
N-terminus. 如果用(-peptide-)n 就没有这个性质了。
但是你说的Dentrimer 说不定可以用，因为末端都是暴露的，所以我说不定
会先试试这个。希望不要太贵就好了。呵呵。
lower |
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d****i
发帖数: 2346 | 31 google了半天拿不定主意。。有商用的最好。 |
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b******y
发帖数: 627 | 33 Check Yuh Min Chook's studies. There are many options. Of course, the one
suggested by ahche works. As far as linkers are concerned, a GGS linker in
between should do it. If your protein is intrinsically disordered at the
location of linkage, direct fusion should also do it. What matters is the
availability of the NLS to importin(s). |
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t******y
发帖数: 716 | 34 插入的lacz后面有一个stop codon，而且exon 1 里面包括进入内质网表达的信号肽，
这样还会表达蛋白的其他domain吗？
domain |
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j****x
发帖数: 1704 | 35 正在折腾一个bicistronic vector for in vivo，前后的ORF齐活了，但中间linker
的选择上犯嘀咕啦。
最普通的基本结构：
Tissue-specific promoter + ORF1(membrane protein) + (IRES/2A) + ORF2(nuclear
protein) + pA
困惑在于，前面ORF1膜蛋白（没有信号肽）而后面ORF2偏是个核蛋白（核定位机制不明
）。用2A的话，一是担心2A残留序列会对功能有影响，二是担心in vivo下引发针对2A
peptide的细胞免疫，三是担心前面的膜蛋白表达可能会对后面核蛋白的定位产生影响。
IRES没有了前两个担心，但是体内的表达水平很难保证，手头也没有现成的商业化载体
（哪位能给推荐一个？）。
简单翻看了之前版上的诸多讨论，还是很难抉择。请诸位经验丰富的先行者给支支招吧
。谢谢！ |
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e***o
发帖数: 344 | 36 想在一个细胞里同时表达GFP, RFP，BFP，不知道用什么办法能让这几个蛋白成像时各
自分得比较开，没有overlapping，（就像做DNA FISH那样），
不用很大的放大倍数就可以把几个蛋白分开.
不知道用弱启动子，或是加特殊的信号肽，比如锚定到细胞膜上或囊泡上什么的。
谢谢各位！ |
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e***o
发帖数: 344 | 37 谢谢回复。我这几个FP需要用同样的信号肽。或者都不用。我想弱启动子，膜会不会好
一些。 |
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w*e
发帖数: 740 | 38 同样的信号肽 ？
这样就表达在同一个地方了呀，不和你的愿望矛盾？ |
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e***o
发帖数: 344 | 39 不好意思，我没有表达得清楚。我的主要目的是表达这几个蛋白。让他们分的比较开，
彼此没有overlap（就像DNA FISH 那样，不同的颜色分得很开，各自独立）。不然就混
到一起了，只有一个颜色了。
我想过吧他们弄到细胞膜上，或囊泡上，什么的。不知道能不能通过confocal分开。
但是这几个construct要不不带信号肽，要不都得带一样的。因为我还得做得做别的实
验。 不知道我表达清楚了没有。
感谢！ |
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e********r
发帖数: 147 | 40 是滴，这是个细菌滴信号蛋白已经被研究了30年了，有很多工作放在前头。最关键的一
点，是它调控quorum sensing过程，细菌领域里头的大热门，所以我们正在折腾它，呵
呵。
您的意思是不是：这么做已经做得太细了？ |
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发帖数: 1 | 43 myc-tag放在中间可以被识别。
前提是你对你的蛋白质上的domain和功能有很好的了解。不要插在其中，myc-tag尽量
能够暴露在外。
放在两端也可能会破坏蛋白质功能，比如N端信号肽。又比如KASH protein，myc放在C
端一定不行。
最简单的是BLAST一下，看看那个地方不保守就放哪里。 |
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m****g
发帖数: 530 | 44 细胞突变可引起失明、失聪以至癌症等不同的致命病征或身体残缺，过往科学家已发现
，细胞突变往往源于细胞内出现
错误的运动方式，但对于具体情况却所知不多，更遑论如何作治疗。
香港科技大学生物化学系讲座教授张明杰与其研究团队，对人体细胞内用以运输蛋白质
的一种重要的“机动蛋白
6(Myosin VI)”进行了长达8年的研究，终于成功找到其运动模式，成为细胞生化学的
重大突破。研究团队指，掌握“机动
蛋白6”运动模式是纠正变异细胞的关键，未来更有机会发现所有相关疾病的根治方法。
细胞内的蛋白质包含细胞所需要的营养、生长因子、信号肽、离子等，是确保细胞健康
、人体正常运作的重要物质。张
明杰介绍称，细胞内有多种负责运输蛋白质的“机动蛋白”，但是绝大部分的“机动蛋
白”都是往同一方向运行，只有“机动
蛋白6”是往相反方向走，“蛋白质可以循环再用，因此需要有运输器将它们来回的双
向运送，所以在‘机动蛋白’中，‘机动
蛋白6’是特别重要的。”
张明杰与余聪、冯巍和魏志毅等多人组成的团队又发现，“机动蛋白6”的运作模式，
是由其承载的蛋白质的用途所决
定，“有的蛋白质需要运送至细胞的另一处，便会促使‘机 |
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o*****y
发帖数: 699 | 45 11101433 彭君 中南大学 “补丁”马氏过程
及其相关问题的研究 A0110 青年科学基金项目 22
2012-1-1 2014-12-31
2 11101434 徐勇 中南大学 无限时滞随机泛
函微分方程及其在种群动力系统中的应用 A011003 青年科学基金项目
22 2012-1-1 2014-12-31
3 11101435 周岳 中南大学 三类常数项恒等
式的数学机械化研究 A0116 青年科学基金项目 22
2012-1-1 2014-12-31
4 11102239 李地元 中南大学 ... 阅读全帖 |
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w********h
发帖数: 12367 | 46 2012诺贝尔化学奖得主罗伯特·洛夫科维茨(左)以及布莱恩·克比尔卡(右)
新浪科技讯 北京时间10月10日消息，据诺贝尔奖委员会官方网站报道，2012年度
诺贝尔化学奖已经于北京时间10月10日17:45公布，由于在“G蛋白偶联受体”方面所作
出的突破性贡献，今年的化学奖项授予美国科学家罗伯特·洛夫科维茨(Robert J.
Lefkowitz)以及布莱恩·克比尔卡(Brian K. Kobilka)。
细胞表面的“聪明”受体
你的身体是由数以十亿计的细胞之间的相互反应形成了复杂统一体。每一个细胞都
拥有一个微小的受体用于感知周遭的环境，以便可以让细胞得以适应新的情形。美国科
学家罗伯特•洛夫科维茨和布莱恩·克比尔卡正是由于他们在“G蛋白偶联受体”
方面所作出的突破性贡献而被授予2012年度诺贝尔化学奖。
长期以来，有关细胞如何感知周遭环境一直是一个未解之谜。科学家们知道一些荷
尔蒙，如肾上腺素拥有重大的影响：它可以提升血压，加快心率。因此他们怀疑在细胞
的表面拥有某种对于这些荷尔蒙物质的受体。然而至于这些受体具体是由什么构成的，
以及它们究竟如何工作仍然在整个20世纪的... 阅读全帖 |
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f******e
发帖数: 938 | 47 虽然很长，但是看完很涨姿势，很高深，很神秘。
NND， 觉得这一切，宇宙，地球，人类，不是偶然的，都是预先设计好的。
关键是谁设计的呢？ 佛祖？耶和华？安拉？好象都不大符合条件。
越想越头疼，算了，超出哥的理解能力，只能昏昏睡去。。。。
TOP10
存在“最小粒子”吗？
很长的一段时间里，人们曾经认为物质、时间、空间这些东西是可以无限分割的。《庄
子•天下》中这样说：“一尺之棰，日取其半，万世不竭。”用数学的语言来解
释这段话，意思就是你可以把1尺长的棍子进行无数次对半分割，第一次对半分割得数
是0.5尺，第二次是0.25尺，第三次是0.125尺……这个过程可以无限地进行下去。
公元前四世纪的希腊哲学家亚里士多德也认为，物质是连续的，人们可以将它无限地分
割下去，我们永远也得不到一个不可再分割的“最小颗粒”。
但很早就有人怀疑“物质可以无限分割”的观念，希腊哲学家德谟克利特相信最小颗粒
是存在的，他把这种粒子叫做“原子”。
德谟克利特认为所有的物质都是由原子组成的，原子是一种不可穿透、不可分割的实体
，一切原子都有着相同的性质，只是在形状、大小、重量、排列、位置上有所不同。... 阅读全帖 |
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E***X
发帖数: 885 | 48 2015年2月12日转入北京儿童医院治疗
入院后辅查：
头颅血管成像：MRA双侧大脑后动脉近段细，左侧大脑前动脉较对侧细，余未见异常；
MRV左侧横窦、乙状窦及左侧颈内静脉较细，右侧枕窦较粗大。
头颅核磁平扫：右额叶皮层、白质，左侧基底节及放射冠区条点状稍长T2/FLAIR稍高信
号，部分含小囊变，DWI少许病变弥散略受限-感染？脱髓鞘？其他？
抗核抗体阴性；DS-DNA阴性
北京儿童医院住院期间治疗情况
3月27日出院诊断：
1、Evans综合症
2、系统性红斑狼疮待除外
3、脑梗塞
4、肝功能损害
5、肾功能损害
6、心肌损害
电解质紊乱（低钠低钾血症）
住院治疗经过
入院后继续予原量甲泼尼龙片口服一致炎性反应。卡托普利、螺内酯口服降压治疗。入
院单日查血生化提示血钾降低，故予氯化钾口服补钾。肝酶升高，存在肝功能损害。予
肝水解肽静点保肝治疗。复查血常规提示患儿血小板较前降低。全身皮肤可见斑点、瘀
斑，故予酚磺乙胺、尖吻蝮蛇血凝酶静点止血治疗。
入院第2天予低盐少渣儿童饭，避免胃肠道出血，予丙种球蛋白400mg/日，实予12.5g/
日静点调节免疫治疗，共用5天。患儿血压高，予硝笨... 阅读全帖 |
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s*****e
发帖数: 970 | 49 8月1日，著名血液学专业杂志《血液》（Blood）刊出附属瑞金医院血研所科学家研究
成果。该成果对止血及血栓形成的分子机制进行了分析和研究，首次在人类完整血小板
中论证整合素β3介导血小板活化信号转导的精确分子机制，证明整合素β3羧基末端三个
氨基酸即精-甘-苏氨酸（RGT）是Src激酶的结合位点；同时利用合成寡肽实现了对整合
素αIIb/β3外向内信号转导的单向阻滞。由此发现，具有透膜作用的RGT寡肽对整合素
β3/Src激酶相互作用的特异性干扰可能是一种安全有效防治血栓性疾病的新途径。该项
研究由上海血液学研究所研究员、医学基因组学国家重点实验室血栓与止血课题组长奚
晓东教授主持完成。
该项研究前后进行了3年半，奚晓东教授和他的课题组认为整合素β3是血栓形成的关
键“控制点”，如果能对整合素β3及其相关信号转导通路进行有效控制，将有助于防治血
栓性疾病。以血栓形成为基本病理特征的心、脑血管疾病目前已超过恶性肿瘤，成为威
胁人类生命的第一“元凶”。
血小板的粘附、聚集和伸展是血栓形成的关键因素，通常包含两个阶段即不稳定的第一
阶段和稳定的第二阶段，分别由内向外或外向内信号转导所控制， |
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d****n
发帖数: 5 | 50 近年来，当国内某些网站和媒体还在争议着中医是否科学，却不知在国际上，近三十多
年来中医阴阳学说已在现代生物医学界风靡，国外的生物医学科学家们津津乐道地研究
着中国古代的哲学思想，来寻找生命科学的理论突破口。他们已阴阳学说运用在现代医
学包括分子生物医学的各个分支领域，用来阐述和分析医学生物界各种的生理功能调节
和病理的变化，从而在更高的层次归纳总结生物体内的机能活动，组织结构及其内稳态
的相互关系，并为科学研究提供前瞻性的理论指导。
阴阳学说在现代医学中的兴起
在七十年代， 当时Goldberg ND教授发现了cAMP与cGMP（环磷酸鸟苷）通常呈拮抗性，
有共同参与调节生物细胞的作用，首次提出了细胞功能调节的“阴阳学说”假设。这一
观点引起了许多学者的兴趣，生物医学界相继发表了不少有关cAMP和cGMP的这种拮抗性
调节与阴阳对立消长的学术论文。此后在八十年代，科学家们试图将阴阳学说运用于医
学各个领域。其中1986年Marx JL在《科学》杂志上发表了“细胞生长调控的阴和阳”
，可以说是阴阳学说第一次在世界顶级科学刊物上被得到了认可，确立了阴阳学说的科
学性，及在现代生物医学中的运... 阅读全帖 |
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