M******y
发帖数: 9 | 1 请问各位有做过肠道的whole-mount免疫荧光吗？
最后是怎么把组织展开固定到slide上的？还是一开始就把组织固定到slide上了？
我第一次做免疫荧光，而且周围实验室的人都没做过，555~
可以把您的protocol发给我参考一下吗？网上查的protocol都是用胚胎或神经做的
谢谢了！拜托了！ |
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I***a
发帖数: 13467 | 2 小鼠组织切片，想做免疫荧光，
那么组织用什么固定对后面的免疫荧光比较好。
谢谢 |
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b******s
发帖数: 1089 | 4 现在通常用的固定基本只有PFA和glut两种。
前者是可逆交联，并且在组织内移动速度快。后者铰链度更大，并且不可逆，固定得更
好。但是移动速度更慢。而且对抗体保存不够好。现在一般采用混合固定，4%PFA加0.5
%的glut。
如果是大的组织，先初步固定之后，再slice成小块继续固定。
如果是免疫荧光，glut的浓度应当低于0.5% |
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h*****o
发帖数: 342 | 5 加了glutaraldehyde以后再做免疫荧光什么的效果很差啊，很多抗体都用不了了。一般
的情况只要用PFA (4% paraformaldehyde)就差不多了。除非你对细胞结构要求很高，
要看胞内细胞器或者做电镜的，可以加一点glut。我以前试过加0.1% glut,再往上加抗
体就失效了
.5 |
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q********0
发帖数: 92 | 6 某刺激都会促使A蛋白表达增加，在刺激后，我用普通免疫荧光观察A蛋白，和GFP-A蛋
白转基因小鼠比，是不是GFP-A蛋白转基因鼠更容易观察到A蛋白的表达？ |
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p****t
发帖数: 18 | 8 请问免疫荧光的信号强度和蛋白量是线性关系吗？对于同一个sample里面的同一种蛋白
而言。多谢各位！ |
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f*****e
发帖数: 34 | 9 RT，样品量太少，不够做western blot， 请问用免疫荧光的方法可以测量蛋白的多少
吗？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 10 以前我们在做免疫荧光的时候会在目标蛋白之外再加一个抗体来标记组织的大致结构。
如果实在没有的话至少会用DAPI. 但是最近我们要做脊髓组织的染色，但是我们对神经
组织没有任何经验。DAPI估计是不行吧，因为脊髓大部分地方都没有细胞核，有核的都
是一些外围细胞。我想过用tubulin B3 又怕信号太强到时候看不出contrast.
大家对此有什么推荐？我们想看神经组织的发炎情况。但是不能用H&E staining. 谢谢！ |
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r****o
发帖数: 105 | 11 转贴自中国留美学生学者生命科学论坛
http://www.smileface918.net/phpBB2/index.php
刚刚在www.ihcworld.com看到的。觉得很神奇。
具体方法就是样品固定后，首先用可见光照射12~24小时，
诱发photo bleaching,从而消除样品自身荧光产生的背景。
具体见：
Neumann M and Gabel D (2002) Simple method for reduction of
autofluorescence in fluorescence microscopy. J. Histochem. Cytochem.
50(3):437-439.
此文献中还列举了其他化学除自身荧光的方法的文章。
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L****T
发帖数: 169 | 12 主要看看细胞免疫荧光和GFP、DsRed啥的，几大荧光显微镜品牌有啥推荐？要求对弱的
荧光灵敏度高、软件操作简单便利，哪个性价比好一些？谢谢！ |
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c*******r
发帖数: 440 | 13 如题，大家是如何选择二抗的荧光抗体的？ 只为确定两蛋白的共定位。
因为 Red TEXAS 染料在荧光显微镜下很弱，难以检测到。 |
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b******s
发帖数: 1089 | 14 固定剂的选择应当跟你的实验目的结合。methonal会使得蛋白变性而PFA只是可逆性得
交联蛋白。GFP变性了当然就看不到荧光了。用抗体应该还是可以看到荧光的，但是作
为细胞内蛋白的定位，还是应当用PFA。methonal对整个细胞的extraction太大，而且
会使核酸和蛋白发生聚集沉淀。
可能会有artifacts。所以ethonal和methonal只适用于组织形态学的实验。 |
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m*****u
发帖数: 15526 | 15 我用flow cytometry 测核内transcription factor就得用methanol处理。同时想看细
胞YFP荧光基本上就不可能了。如果哪个大虾有合适的protocol,不淬灭YFP,同时又能标
记上transcription factor的，麻烦提供一下。包子酬谢。有好的flow cytometry 用
的抗YFP荧光抗体，能标记上methanol处理过的细胞的也行。 |
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j*z
发帖数: 6 | 16 因为要精确细胞计数，且希望重复计数时染色本身不变，所以免疫荧光不太合适。肯请
指教一二，怎样做多种颜色的免疫组化染色？谢谢！ |
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V********n
发帖数: 305 | 17 问题较弱智。免疫组化（IHC）能染两种分子么？我们有一套标本，无法得到冰冻切片
做免疫荧光。刚好需要染两种蛋白，一种确定细胞类型，一种测表达。有什么好办法么？
多谢了！ |
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p********i
发帖数: 116 | 18 请问版上有人用96 孔板做过免疫荧光吗？用的是什么样的板子？另外这个可以加
mounting medium吗？然后怎么seal呢？谢谢。 |
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f*****f
发帖数: 195 | 19 单独EGFP，用-20 C Methanol 固定时，发现很多细胞荧光变得极暗或消失（4%PFA正
常），是因为Methanol 消除了GFP的发光信号还是抽提了GFP蛋白？也就是说用GFP抗体
是否还能标记出来？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 20 Methanol 使得大部分蛋白变性了所以没有荧光了。用抗体还是能够标记出来的 |
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f*****f
发帖数: 195 | 21 谢谢。不过很多GFP偶联的蛋白用Methanol 固定后荧光信号/定位好像并不会消失？ |
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f*****f
发帖数: 195 | 22 我倒没有直接在显微镜下看PFA影响，不过一般PFA 固定后用PBS洗后直接封片或IF标记
其它蛋白，荧光倒很正常 |
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v**********m
发帖数: 5516 | 23 这个线性范围是用已知量的抗原做实验做出来的，包括荧光和western的信号，还要考
虑信噪比和专一性。
题外话，CNS上那些按western信号就画个bar高低的数据图，还在那里比较量多少的结
论简直是开玩笑。 |
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f*****e
发帖数: 34 | 24 我用的就是普通的荧光二抗，不是elisa，想要看一下抑制剂处理后蛋白量有没有降低
，只是在对照和实验组之间定性的比较一下。 |
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m*****e
发帖数: 253 | 25 定性也许可以，定量不行。不过即使荧光低了也还有其他可能，比如蛋白变性结构变化
什么的，能做下realtime吗？ |
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b*****n
发帖数: 1841 | 26 搜了一下网上的配方，配出来的竟然有自发荧光。
版上有没有自己配antifade的？帮俺省点钱。 |
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p****l
发帖数: 291 | 27 免疫荧光组化两种分子分别是两种细胞的marker,发现有close or co localization
现在我想把图像上的信息生成类似flow的那种图,能够比较直观的看出两种颜色在不同
pixel位置上的分布
这个用什么软件分析啊?
Thanks a lot! |
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I***a
发帖数: 13467 | 28 免疫比较差，
现在有点混乱，
目的细胞是真菌， |
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c*********d
发帖数: 9770 | 29 荒猫牛不耕微信号laoniu003005
功能介绍
好文分享
来源：荒猫之舞
作者：荒猫
中美贸易战告一段落，毫不意外地，咱们又赢了。不过与以往不同的是，这次美国也赢
了，是双赢。据报道，咱们答应了美国减少贸易逆差的要求，所以美国赢了；而因为要
减少贸易逆差，中方将大量增加自美购买商品和服务，这样可以满足咱们不断增长的消
费需求和促进高质量经济发展，所以咱们也赢了。
但让我感觉不可思议的是，这么好的事情，为什么一直不做呢？为什么要在美国政府的
逼迫下去做呢？是因为没有想到？那岂不是说那些人能力低下？是因为想到了而不做，
那岂不是证明了那些人很坏？
而且在美国高调启动贸易战之初，咱们是抱着多大的决心，宁为玉碎不为瓦全，一定要
打赢的，一定要粉碎美国人阻挡咱们大国崛起的阴谋的。当美国提出500亿的清单时，
咱们针锋相对；当美国提出1000亿的清单时，咱们继续应战；而当美国把清单的总价提
高到2000亿的时候，一夜之间，美国就不是阻挡咱们大国崛起，而是有利于咱们大国崛
起了。美国的要求原来是有利于咱们的发展，而不是遏制咱们的发展了。我恍然大悟：
原来以前的针锋相对，是用的激将法，是为了刺激美... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 30 中盛溯源生物科技有限公司(www.nuwacell.com)专注于人类细胞产品的研发和应用，公
司业务涵盖人类原代细胞、多能干细胞、和成体干细胞产品，用于新药筛选、药物疗效
与安全性评估、细胞医疗、癌症治疗及其他再生医学领域。公司已组建了以留学归国人
员为核心的细胞产品研发团队，期待有更多朝气蓬勃的年青科学家加入我们，共同在细
胞医疗领域开拓前行。
高级研究员或项目经理(免疫治疗)
1.建立成体免疫细胞的GMP体外扩增系统。
2.完善成体免疫细胞的基因工程改造技术。
3.熟练运用多种体外检测手段，如FACS,细胞因子生产测试，肿瘤细胞杀伤实验等。
4.完成小鼠体内肿瘤细胞杀伤实验。
高级研究员或项目经理(免疫细胞分化)
1.建立人类诱导多功能干细胞(iPSC)向免疫细胞的高效分化系统。
2.建立人类iPSC向免疫细胞的GMP高效分化生产系统。
3.熟悉人类iPSC的基因工程改造技术。
4.熟练运用多种体外检测手段，如FACS, qRT-PCR, 免疫荧光技术等。
5.完成从iPSC分化的免疫细胞在体外与在小鼠体内的功能测试实验。
高级研究员或项目经理(神经细胞分化)
1.建立人类... 阅读全帖 |
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w*p
发帖数: 16484 | 31 实验室检验科的水平太烂，医生跟病人交流的水平也非常烂
《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》（以下简称《规范》），严格进行。
一、HIV抗体检测
HIV抗体检测不同于其他病原微生物的检测，任何错误的诊断，包括假阳性或假
阴性，都会对被检者甚至他人造成重要的影响。因此，HIV抗体检测必须严格按照《规
范》要求，由接受过专门技术培训并获合格证书的技术人员在当地卫生行政部门审批合
格的实验室中进行，整个实验过程应有严格的质量保证体系。
HIV抗体检测分为筛查试验和确证试验，可用于诊断（确定个体HIV感染状况）、
监测（了解不同人群HIV感染率及其变化趋势）及血液筛查（防止输血传播HIV）。筛查
试验根据检测原理不同分为酶联免疫吸附法、凝集法和层析法，可对血液、唾液和尿液
标本进行常规或快速检测。临床用于血液筛查的方法包括酶联免疫试验（ELISA）、免
疫荧光法、化学发光法等，常用的为酶联免疫法（ELISA）。自1985年第一代ELISA试剂
问世以来，随着医学技术的发展，包被抗原已从一代的全病毒裂解物发展为目前以基因
重组和多肽抗原包被... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 32 请具体看他们的数据，而不是看最后的口号结论。只看标题和结论是小学生的做派。
这个文章的数据通篇在说细胞方面的影响是存在的，但是因为对于抗体以及cytokines
的测量结果不符合简单体液免疫模型应该推导出来的结果。所以他们最后下了一个“没
有影响”的结论。
我本来不想针对他们那篇文章评论过多，因为我本身也不是搞免疫的专门人士（只不过
碰巧知道得比较多，所以啥都是个半瓶水），所以我怕说多错多然后被人拿来攻击。但
是现在看来我有些过于高估在这个帖子系列下发言的人的素质了，有些估计根本不是搞
生物的？所以我只好赶鸭子上架多讲几句吧。希望专门做免疫的同学如果发现我那里讲
错了，请拍得轻一些。
Bt protein 的一个潜在生物毒性，就是杀死肠道上皮细胞，导致上皮层异常脱落，这
样皮下组织直接受到肠液的刺激，就会产生非特异性的炎症。如果是这种情况的话，一
个常见的临床表征就是Monocytes异常升高（这个被那个文章的作者观察到了）。但是
肠道发炎其实属于黏膜免疫的范畴，不能直接套用体液免疫的指标。尤其对于慢性黏膜
炎症，测什么cytokine 很难看出什么来，去测Bt protein 的特异... 阅读全帖 |
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g*********d
发帖数: 233 | 33 RNA干扰及其在动物繁殖中的应用
2009-12-28
RNA 干扰(RNA interference, RNAi)是生物进化过程中遗留下来的一种在转录后通
过 RNA 调控基因表达的机制, 它是指在真核细胞中引入双链 RNA分子从而导致具有序
列同源性的基因产生特异性基因沉默 (gene silencing)的现象 。由于 RNA干扰可以阻
断特定的基因表达, 具有超越疫苗和抗病毒药物的诸多优点, 因此在阐述基因功能以及
蛋白质相互作用等方面, 表现出诱人的前景。近年来随着分子生物学的发展, RNAi 的
机制也不断被阐明, 同时国内外研究也证实 RNAi 技术可以为动物繁殖过程中所涉及的
基因功能提供一条新的思路, 这在科研和生产实践上都具有重要的意义。
1 RNAi的发现
Matzke 等于 1989 年报道了启动子介导的序列同源性基因共转染烟草可引起转
基因表达发生沉默。 1990 年, Napoli 和 Van der Krol 等为了让矮牵牛花的颜色更
加鲜艳, 把与紫色相关的查尔酮(chalcone)基因转染到牵牛花内, 结果意外发现, 植物
体的颜色... 阅读全帖 |
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d*****r
发帖数: 5934 | 34 国家食品药品监督管理局昨天向媒体公布了防治“非典”药品审批情况，其中有药
品已获批准生产上市，有的进行临床试验。
4月24日，国家食品药品监管局首次批准北京市远策公司研制的“重组人干扰素α-
2b喷雾剂”进行临床试验。
4月28日，国家食品药品监管局正式批准军事医学科学院微生物流行病研究所研制的
“冠状病毒（变异株）IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）”、“冠状病毒（变异株
）IgG抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）”生产上市；批准吉比爱生物技术（北京）有
限公司研制的“冠状病毒(变异株)IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）”、“冠状病毒(
变异株)IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）”生产上市。该品分别用于人血清标本中冠
状病毒（变异株）IgM抗体或者IgG抗体的定性检测，可试用于冠状病毒（变异株）感染
的辅助诊断。鉴于产品只能用于“非典”的辅助诊断，故仅批准该品试生产半年，在一
定范围内供临床试用。
4月28日，国家食品药品监管局正式批准军事医学科学院微生物流行病研究所研制的
“重组人干扰素ω喷鼻剂”进行用于高危人群（接触“非典”病人的医护人员、密切接
触“非典”患者的家属或其他人群） |
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S******9
发帖数: 2837 | 35 最近做aorta的eNOS染色，用免疫荧光，elastin自显色背景很高，效果不好。然后换用
免疫组化
的方法，感觉背景还是比较高。
抗体eNOS是BD公司的，mouse。
片子是frozen 切片。
1. 免疫荧光染色：
acetone固定10分钟； 1抗 1：200稀释，2抗 goat anti-mouse 1：200稀释。
2.免疫组化：
4%paraformadehyde 10分钟固定，用的是DAKon的kit；1抗是1：200稀释，2抗是1：4K稀
释。阴性对照：只加2抗的或者用IgG，smooth muscle还是有背景；只加1抗的没有背景。
请教大家如何改进，enos有没有好的抗体推荐？
谢谢 |
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b*******3
发帖数: 99 | 36 如果标签被切掉的话,那么immunofluorescence就不会成功啊.
可是我的免疫荧光实验却很成功,可以看到细胞的膜部分很亮的荧光.
而MOCK细胞却没有.
免疫荧光实验也是用的抗FLAG的一抗. |
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d***e
发帖数: 167 | 37 严谨 再严谨 (2014-10-19 23:07:50)
分类： 学术研究
自从今年8月30日得知四年前发表在JI的一篇论文（J Immunol 2010; 185: 63
48-6354）结果有误之后，我的心情一直郁郁寡欢。已发表的论文出现难以原谅的差错，
这在我们是第一次，这是一件很痛苦的事情。
该项研究始于2007年，主体工作是在广西完成的，少部分实验包括免疫荧光染
色步骤来到武汉之后继续补充完成。有些图如Figure 1A甚至是在投稿之后，依据编审意
见补充实验加做的。Figure 5A的免疫荧光照片本来是要显示恶性胸腔积液巨噬细胞、T
细胞以及肿瘤细胞表达趋化因子CCL20的情况。在Lab Meeting上为了便于讨论和构思论
文的框架，在还没有得到CCL20表达照片的情况下，权宜以已经发表的一些CCL22图片组
合成Figure 5A，以便于直观分析。
为了训练学生的研究思路和论文构思，直到今天我们也都日常这么做。也就是
说，在没有得到全部的研究结果之前就开始撰写论文，或将部分结果撰写成摘要以便参
加学术会议交流。问题在于，... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 38 发信人: daxiaoguai (daxiaoguai), 信区: Military
标 题: 河南一男孩 打了疫苗后仍死亡 是谁之过？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jul 22 20:19:37 2018, 美东)
兰考男孩张远航在上学路上被流浪狗咬伤面部，其在家人带领下立即赶到镇防疫站做了
伤口处理，并遵医嘱按规程注射了狂犬疫苗和狂犬免疫球蛋白。9个多月后，就在一家
人已经淡忘这件事时，张远航开始“昼夜不睡，还嗷嗷叫，怕水、怕风”，随后在开封
市医院确诊为狂犬病。5天后的凌晨，张远航死亡，而开封市疾病控制中心在孩子死前
对其抽血化验的结果显示，病人狂犬病抗体为阴性。
打过疫苗，为何体内却没有抗体？在对疫苗表示“质疑”的同时，张家人进一步
发出疑问：“打疫苗时，医生是否有义务告知病人随后检测体内有没有产生抗体？”
与此疑问相应的是，一些防疫专家认为，即使第一次注射失败，如果“狂犬病毒还
没扩散到中枢神经系统，再打加强疫苗依然可以产生抗体”。而在国家出台的《狂犬病
暴露后处置规范》中，未将提醒病人注射后检查是否产生抗体列入硬性规定。
失子之痛
36岁的兰考县张君... 阅读全帖 |
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d********i
发帖数: 224 | 39 兰考男孩张远航在上学路上被流浪狗咬伤面部，其在家人带领下立即赶到镇防疫站做了
伤口处理，并遵医嘱按规程注射了狂犬疫苗和狂犬免疫球蛋白。9个多月后，就在一家
人已经淡忘这件事时，张远航开始“昼夜不睡，还嗷嗷叫，怕水、怕风”，随后在开封
市医院确诊为狂犬病。5天后的凌晨，张远航死亡，而开封市疾病控制中心在孩子死前
对其抽血化验的结果显示，病人狂犬病抗体为阴性。
打过疫苗，为何体内却没有抗体？在对疫苗表示“质疑”的同时，张家人进一步
发出疑问：“打疫苗时，医生是否有义务告知病人随后检测体内有没有产生抗体？”
与此疑问相应的是，一些防疫专家认为，即使第一次注射失败，如果“狂犬病毒还
没扩散到中枢神经系统，再打加强疫苗依然可以产生抗体”。而在国家出台的《狂犬病
暴露后处置规范》中，未将提醒病人注射后检查是否产生抗体列入硬性规定。
失子之痛
36岁的兰考县张君墓镇农民张广新学会了上网，到网吧查阅资料、发布信息，成了
这个农民近一个多月来每天的必修课。
张广新的上网积极性缘于8岁儿子张远航的死：“我一定要为孩子的死讨个说法，
为啥咱啥都做了还是救不了孩子的命？”
张广新有两个儿子，大儿子张远乐今年1... 阅读全帖 |
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s********s
发帖数: 84 | 40 谢谢。。western blot，免疫荧光都作过了。。
只要是transient transfection 不管是WB还是免疫荧光都可以出来。。
不过我倒是真的没有检测过用来packing的293里面有没有蛋白。。我可以试试，但是我
觉得应该是有的
就是从用293细胞produce virus开始，往后就不行了。。
如果是promoter silencing的话 是不是就没别的办法了。。
不知道为啥以前是怎么做出来一次的。。要是从来没做出来过，也就死心了 没啥好说的
曾经做出来过可以用的virus，出了一些结果，然后把那批virus用完了。。之后就再也
做不出来能用的了。。plasmid都是同一管啊。。
好吧。。其实我也知道这问题只有上帝才能回答。。要那么容易回答，我老板早就回答
我了，他也说有些问题就算是作virus很多年的人也不一定能搞明白啥问题，但是问题
在于老天，能不能让我突然很好运的把这个virus毫无理由的再做出来一次么。。
不管能不能解决问题，我谢谢回答了我问题的人。。至少我抱怨了。。= =
for
many |
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i****g
发帖数: 3896 | 41 觉得这种非标记的检测方法虽然有一定应用价值，但是对追求精度的实验检测而言还是
有点太粗糙了，如果能发现新的可标记但对蛋白结构功能影响很小的的荧光或其他小分
子，不仅分辨率可以提高几个级别，还能实时观测细胞内动态，那就很牛逼了。
抛砖引玉先。
十年前听过Sunney Xie的报告，讲近场拉曼成像，就是CARS。不久前的年会上，他又讲
了最新的进展，已经能做到实时成像了，能看到血红细胞在血管里的流动，能区分皮肤
表面组织的大致成分，还能区分出动物脑中的癌变部位。主要是用拉曼谱的两个波长，
lipid 2845 cm-1, protein 2950 cm-1.
我的粗浅理解是，只要能得到可解析的信噪比，成像就是激光扫描和后续处理的事了，
至于精度可能不能要求太高，但贵在不用标记，完全Non-invasive。只是近场拉曼成像
，要求样品紧贴物镜，对于其应用稍有限制，或许将来可以用手持式光纤的方法直接用
到临床，这样手术中主刀医生就不用等病理切片的结果出来就可以判断哪些是病变组织
需要切除的。
听过钱永健的一次报告，他是做GFP起家的，所以他的方法是用免疫或转基因的方法将
癌变组织标记上荧... 阅读全帖 |
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i****g
发帖数: 3896 | 42 觉得这种非标记的检测方法虽然有一定应用价值，但是对追求精度的实验检测而言还是
有点太粗糙了，如果能发现新的可标记但对蛋白结构功能影响很小的的荧光或其他小分
子，不仅分辨率可以提高几个级别，还能实时观测细胞内动态，那就很牛逼了。
抛砖引玉先。
十年前听过Sunney Xie的报告，讲近场拉曼成像，就是CARS。不久前的年会上，他又讲
了最新的进展，已经能做到实时成像了，能看到血红细胞在血管里的流动，能区分皮肤
表面组织的大致成分，还能区分出动物脑中的癌变部位。主要是用拉曼谱的两个波长，
lipid 2845 cm-1, protein 2950 cm-1.
我的粗浅理解是，只要能得到可解析的信噪比，成像就是激光扫描和后续处理的事了，
至于精度可能不能要求太高，但贵在不用标记，完全Non-invasive。只是近场拉曼成像
，要求样品紧贴物镜，对于其应用稍有限制，或许将来可以用手持式光纤的方法直接用
到临床，这样手术中主刀医生就不用等病理切片的结果出来就可以判断哪些是病变组织
需要切除的。
听过钱永健的一次报告，他是做GFP起家的，所以他的方法是用免疫或转基因的方法将
癌变组织标记上荧... 阅读全帖 |
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T******y
发帖数: 298 | 43 多谢两位的建议！我再试一下这几种试剂。
我用MitoTracker® Red FM检测了线粒体的形态有些改变，免疫荧光显示cyt C释放
不明显(还未用western blot证实)。
JC-1染色显示低剂量药物处理或高剂量药物短时间处理，细胞mitochondiral membrane
potential明显增强，JC-1染色呈黄颜色荧光；高剂量长时间处理后，细胞死亡增加，
potential减弱，JC-1染色呈绿色荧光。但关键的是，未加任何处理对照组的细胞，JC-
1染色时，红色荧光一直不是太明显，故而还没敢下结论。争取下周再做一次，有个结
论。
如果用PrestoBlue (一种resazurin-based solution）试剂检测，高剂量药物短时间处
理或低剂量药物处理的细胞resazurin的还原反应呈升高趋势；而MTS检测则显示该药物
显著降低MTS的还原反应。
体外实验中，这种药与Rotenone或Antimycin A合用时产生明显的倍增效果（1+1》3）
，而与NaN3或CCCP合用时只是简单的叠加关系（1+1=2）。请两位大侠推断一下这种情
况下呼吸链的... 阅读全帖 |
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i*S
发帖数: 175 | 44 RNA --- in situ hybridization
Protein --- 免疫荧光
除了这两个，就没什么可以用的了吗？
现在我是做免疫荧光发现某个protein存在于某神经组织的一种细胞里，但是以前都认
为是只存在于这个组织另一种细胞里的，老板不放心想确认一下.这两种细胞也是离得很
近的，很难分离以后单独检测RNA/protein什么的。我觉得是不是做个in situ看看mRNA
以外就没什么办法了啊？ |
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s*****g
发帖数: 7857 | 45 要不
1。固定，打孔，直接免疫荧光染色，照相？（你会需要一个cytospin的机器把悬浮细
胞离心到玻片上）
2。或 IP-Western
3。 或针对此蛋白做细胞的免疫荧光染色， 再做Flow cytometry
4。灵敏的 ECL 液体也是关键。反正GE 的ECL不行。 我平时都是用GE的加少量
MILLIPORE的。MILLIPORE的太强了，有杂带，还需要更好的分子量marker. （GE的我们
是专门用
来显GAPDH，ACTIN等常规大量蛋白的） |
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z********g
发帖数: 48 | 46 抛砖引玉先。
十年前听过Sunney Xie的报告，讲近场拉曼成像，就是CARS。不久前的年会上，他又讲
了最新的进展，已经能做到实时成像了，能看到血红细胞在血管里的流动，能区分皮肤
表面组织的大致成分，还能区分出动物脑中的癌变部位。主要是用拉曼谱的两个波长，
lipid 2845 cm-1, protein 2950 cm-1.
我的粗浅理解是，只要能得到可解析的信噪比，成像就是激光扫描和后续处理的事了，
至于精度可能不能要求太高，但贵在不用标记，完全Non-invasive。只是近场拉曼成像
，要求样品紧贴物镜，对于其应用稍有限制，或许将来可以用手持式光纤的方法直接用
到临床，这样手术中主刀医生就不用等病理切片的结果出来就可以判断哪些是病变组织
需要切除的。
听过钱永健的一次报告，他是做GFP起家的，所以他的方法是用免疫或转基因的方法将
癌变组织标记上荧光，这样医生直接切除有荧光的组织即可。
Sunney Xie是实验方法创新的大牛。对于研究工具与研究方法的改进和创新，是中国学
术界需要大力改进思维定势的地方，老是用已商业化的机器，只能跟在别人后面跑，做
不到最前沿。
其他同学再... 阅读全帖 |
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z********g
发帖数: 48 | 47 抛砖引玉先。
十年前听过Sunney Xie的报告，讲近场拉曼成像，就是CARS。不久前的年会上，他又讲
了最新的进展，已经能做到实时成像了，能看到血红细胞在血管里的流动，能区分皮肤
表面组织的大致成分，还能区分出动物脑中的癌变部位。主要是用拉曼谱的两个波长，
lipid 2845 cm-1, protein 2950 cm-1.
我的粗浅理解是，只要能得到可解析的信噪比，成像就是激光扫描和后续处理的事了，
至于精度可能不能要求太高，但贵在不用标记，完全Non-invasive。只是近场拉曼成像
，要求样品紧贴物镜，对于其应用稍有限制，或许将来可以用手持式光纤的方法直接用
到临床，这样手术中主刀医生就不用等病理切片的结果出来就可以判断哪些是病变组织
需要切除的。
听过钱永健的一次报告，他是做GFP起家的，所以他的方法是用免疫或转基因的方法将
癌变组织标记上荧光，这样医生直接切除有荧光的组织即可。
Sunney Xie是实验方法创新的大牛。对于研究工具与研究方法的改进和创新，是中国学
术界需要大力改进思维定势的地方，老是用已商业化的机器，只能跟在别人后面跑，做
不到最前沿。
其他同学再... 阅读全帖 |
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v***a
发帖数: 1242 | 48 没有做出来mechanism，有质量尚可的Western Blot、免疫组化、免疫荧光，共3张图。
主题是发现在一个药物模型中，两个能免疫共沉淀的蛋白的表达均被诱导。前人均无相
关的report。
就想把做的东西发出去，哪怕是一个很小的journal也成。请大家帮忙推荐～ |
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i*****8
发帖数: 6735 | 49 搜了下，希望有帮助
病情分析:
(一)普通型
潜伏期一般2～4天,最短1天,最长7天.起病急骤,发热,体温一般38℃～39℃,重者可
达40℃以上,婴幼儿起病时可能产生惊厥或谵妄.患者全身不适,咽喉疼痛明显,会影响到
食欲.咽喉及扁桃体显著充血,亦可见脓性分泌物.舌头红,乳头红肿如草莓,称杨梅舌.颈
部及颌下淋巴结肿大,有触痛.皮疹于24小时左右迅速出现,最初见于腋下,颈部与腹股沟
,1日内迅速蔓延至全身.典型皮疹为弥漫着针尖大小的猩红色小丘疹,触之如粗砂纸样,
或人寒冷时的鸡皮样疹.疹间皮肤潮红,用手压可暂时转白.面颊部潮红无皮疹,而口周围
皮肤苍白,称口周苍白圈.皮肤皱折处,如腋窝,肘,腹股沟等处,皮疹密集,色深
红,其间有针尖大小之出血点,形成深红色“帕氏征”.口腔黏膜亦可见黏膜疹,充血
或出血点.病程第1周末开始脱屑,是猩红热特征性症状之一,首见于面部,次及躯干,然后
到达肢体与手足掌.面部脱屑,躯干和手足大片脱皮,呈手套,袜套状.脱屑程度与皮疹轻
重有关,一般2～4周脱净,不留色素沉着.
(二)其他类型
1.轻型 全部病程中缺乏特征性症状,往往至出现典型的皮肤脱屑时,才取得回... 阅读全帖 |
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