n*******e
发帖数: 27 | 1 hehe,//humble. that is a good question,做SEMINAR时,会答不上别人的文题时,通常
先用这招缓一缓:).我看了一下书,又得到一些INFO.首先,这些抗原都是糖蛋白,开始我
以为是由蛋白质和共价修饰它的多糖共同决定了抗原的表面决定簇EPITOPE.但是现在看
来仅仅是由一个由6个糖苷组成的多糖决定了抗原的种类.再说的明白些,O抗原是最基本
的多糖抗原,在绝大多数人体中都有(BOMBAY型没有),然后由一个糖甘转移酶(glycosyl-
transferase)转移不同的糖基至O抗原上.A型和B型的差别就在于这一个转移酶,它的基因
位于第9染色体的长臂上.这些多糖结构,在植物和微生物中也有,可以想见,如果人体把
这些自己没有的东西当成抗原来识别并产生相应的抗体,那这中抗体也能识别同样结构
的人体中的抗原.这似乎与免疫系统在长期进化中的适应性和它自身的发育有关.免异是
个生物学中最复杂,也是当前最热门的话题.象AIDS,AUTOIMMUNE都是很难解决的.为什麽
机体会产生一种抗体去识别它从来没见过的东东,为什麽不产生抗体识别自身的抗原(如
果有,人 |
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r****o
发帖数: 105 | 2 你给的信息不够，至少得说说这两个蛋白的标签是什么吧，比如
Flag, HA, 或者myc什么的。既然你用proteinA/G，你应该还加了一种
抗体可以把两个蛋白中的一个拽下来吧？
背景高倒是很常见，因为非特异性的结合会比较严重。要做得好，
被首先拽下来的蛋白的tag要比较好才行，而且如果用多次串联的TAG
会比较好，比如6XFLAG。也有人用两种不同的TAG串联在一起，通过
两步纯化来增强特异性。另外就是最好直接用抗体共价耦联的琼脂凝胶(
比较贵，1ML可能要五百多刀)。
还有就是，一般的做法是直接把洗过的beads 直接用sample buffer
煮。这样的样品非特异性的成分会不少，但如果用TAG peptide的溶液
冲洗蛋白(比如anti-flag matrix 用flag peptide 来冲洗)，效果会好很多。
没信号也许是因为缓冲液太强，或者是因为两个蛋白结合太弱，
冲洗过程中脱落了。用crosslinker可能会有所帮助。 |
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l***d
发帖数: 1828 | 3 中科院微生物所张树政院士作了“糖生物学与糖工程的诞生、蓬勃发展及前景”的综述
报告。张树政全面论述了当前国际糖生物学与糖工程研究的动态。1988年牛津大学R．A
．Dwek教授首先提出了“Glycobiology”，标志着糖生物学的诞生。美国对糖生物学与
糖工程非常重视，日本则在1991年开始实施一个耗资数百亿日圆的15年“糖工程前沿计
划”，欧盟1994年亦推出了一个“欧洲糖研究开发网络”与美、日竞争。国际上已召开
了多次糖生物学和糖工程的国际会议。K．Landsteinerl900年发现人的血型是不同的，
并因此获1930年诺贝尔医学奖。免疫学家经过半个世纪的研究于1960年由 Watkins确定
了血型抗原决定基的糖链结构，表明决定血型的物质是糖链。她指出，细胞内密布着糖
链，这些糖链与蛋白或脂共价结合成糖蛋白、糖脂或蛋白聚糖(合称糖缀合物)。细胞表
面糖缀合物上的糖链承担着细胞一细胞相互作用和细胞一细胞外基质相互作用，作为激
素、凝集素、酶、毒素、病毒、细菌等的识别分子，还是细胞表面抗原。糖链在细胞表
面承担信息分子的功能。她说“糖分体抗原(CD)”是发育过程中细胞的糖蛋白或糖 |
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t*******k
发帖数: 87 | 4 困扰很久了，想请教做ubiquitin的大牛：
把纯化的ubiquitin单体SDS电泳，考染一条带没问题，但用ubiquitin抗体做western，
总有一条大小为diubiquitin的条带出现，关键是这个条带在后续的pulldown实验中被
富集，不知道ubiquitin是不是能够自动聚集成多体啊，可能是非共价连接吗？谢谢 |
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m******h
发帖数: 32 | 5
＃＃不是大牛，但是跑过这个胶，呵呵，＃＃
＃＃我用12％的胶也没有带，后来换到15％就看见了。＃＃
但用ubiquitin抗体做western，
被富集，
＃＃关键是看你用什么来pulldown吧？＃＃
不知道ubiquitin是不是能够自动聚集成多体啊，
＃＃应该不会吧，没有酶催化的话。＃＃
可能是非共价连接吗？谢谢 |
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s******s
发帖数: 13035 | 6 我的理解是，用砷替代磷有两个办法，
一个是笨办法，所有和磷打交道的蛋白啥都复制一个copy,
然后进化出一套略有不同的能够适应砷的体系。
一个是聪明办法，对砷进一步改造让它更加像磷。这个改造
看上去不是共价改造，而是更像通过聚羟丁酸作为一个buffer
系统实现的。 |
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p***n
发帖数: 9 | 7 实验中遇到一个问题，亟待解决，请各位高人支支招！
我们借助一个蛋白质将双链DNA与树脂相偶联（蛋白质与树脂之间是非共价结合），但是自由状态的DNA会与树脂发生非特异性结合，请问：如何在保持蛋白质活性的情况下，将非特异性结合的DNA从树脂上去除？
非常感谢！ |
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c*********r
发帖数: 1312 | 8 代LP发帖，欢迎交流指教。多谢！^_^
实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
都用酒精作溶剂。
2. 标记运动神经元的效率下降。以前我用dextran注射的时候，只要注射到轴突支配的
肌肉里面，很容易就标记了运动神经元。现在用CM-DiI，会发现被注射的肌肉部分有很
强的荧光，但却没有进入轴突。貌似需要很精确地注射到轴突里面才行，那... 阅读全帖 |
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g*********d
发帖数: 233 | 9 夏荣辉，李江
上海交通大学医学院，上海（200011）
E-mail：e******[email protected]
摘 要：基因的表观遗传学修饰正越来越受到人们的重视，它包括DNA甲基化和组蛋白修
饰，组蛋白修
饰又包括组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化。基因的表观遗传学改变在基因转录调节方面有
重要作用。最
近研究较多的是多种组蛋白修饰方式和DNA甲基化在基因转录调节方面的共同作用，本
文详述组蛋白
修饰和DNA甲基化的发生机制，并且总结了组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化与DNA甲基化之
间的相互作
用，提示不同位点的组蛋白甲基化与DNA甲基化共同作用于基因转录，并且发挥不同的
作用，具体体
现在组蛋白乙酰化、组蛋白H3K9、H3K27和H4K20甲基化与DNA甲基化协同作用，使基因
发生转录抑
制，而组蛋白H3K4甲基化与基因转录激活有关。
关键词：组蛋白修饰；DNA甲基化；关系
1. 引 言
目前，在研究肿瘤发生发展的过程中，基因的表观遗传学修饰所起的作用日益得到人们
的重视。组蛋
白修饰和DNA甲基化是两种最重要的表观遗传学修饰方式。研究表明，人类几乎所有类
型的肿瘤都存
在组蛋白及DNA甲基化的异常... 阅读全帖 |
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d***y
发帖数: 8107 | 10 【 以下文字转载自 Returnee 讨论区 】
发信人: irving (当我数到三 我听到隔壁有人自楼上跳下), 信区: Returnee
标 题: 美国助理教授因为爱情而海龟
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 20 17:25:30 2012, 美东)
http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2012/2/259362.shtm
在美国学习、研究10余年，获得了终身制的教职，买了房，定了居，唐淳实现了所谓的
“美国梦”。但一场“万里一线牵”的爱情让他改变了自己的“运动轨迹”,把他“牵
”回了祖国。
唐淳：中科院武汉物理与数学研究所博士生导师。1998年获浙江大学生物学学士，2003
年获美国马里兰大学生物化学博士，2003至2007年在美国国立医学中心糖尿病、消化及
肾脏疾病国家研究院从事博士后研究，2008年至2009年在美国密苏里大学生物化学系任
终身制助理教授，2009年12月入选中科院“引进海外杰出学者计划（百人计划）”回国。
主要研究方向为溶液核磁共振、生物物理和结构生物学，多年从事生物大分子核磁的新
方法及应用研究，建立和... 阅读全帖 |
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j******n
发帖数: 941 | 12
Pierce有direct IP试剂盒，让抗体先和Protein A(G)共价结合后再做IP 即省抗体又避
免elution里面的抗体干扰 |
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l******n
发帖数: 143 | 13 这个俺尝试回答一下
1.你的gel是native or denatured?如果是denatured,一般非共价键的homo-dimer会分
离成monomer.
2.似乎不太明白你的描述left lane and right lane哪个蛋白被过表达?
3.可以跑个简单的MALDI-TOF质谱检测一下那个>50 kD的band是不是确定存在
4.如果你的gel是native gel without reducing reagent,你的蛋白质(们)会不会在空
气中氧化形成共价disulfide bond,可以很简单地加点还原剂做对比实验.
5.条件允许的情况下用分析超高速离心sedimentation velocity analytical
ultracentrifugation跑几个不同浓度的样品,看一看有没有reversible dimerization
进行,或者这两个条带分别是两个不相互作用的蛋白质,这个方法比SEC柱子resolution
高很多.
6.co-IP的artifect不少,最好用其他方法检验来确认
希望能帮到你哈
50KDa |
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p****p
发帖数: 3360 | 15 subunits之间二硫键算不算？sumoylation? |
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z*********s
发帖数: 38 | 16 二硫键做的太多了，SUMO，ISG15，Fat10，Nedd8这些都算在UBL里面。除了这些以外还
有吗？比如两个不同的蛋白质或者蛋白质亚基之间通过K和D，E连接，或者通过K和Q连
接？是生物体内天然的那一种 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 17 search JMJD6 by Yi Zhang |
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z*********s
发帖数: 38 | 18
在pubmed和google上都搜了，没有找到特别make sense的。能不能麻烦给个更详细的连
接 |
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s******s
发帖数: 795 | 19 谢谢楼上的回答，10个包子奉上。话说，你的ID。。。。。。
1.结合力够强就好。那我的设计思路基本可行了！
2.washing和elution肯定要摸条件。这个我有心理准备。
3.谢谢，我去多挖挖文献。
4.你的point我get了：）。。。这个没法保证。protein A是个肽段，老板要我不考虑
生物学活性了，只管相互作用（我倒，这还是做science么，不过老板就这样说滴。不
过其实把这个肽段跟biotin共价结合或者直接偶联到sepharose上，或者任何其他偶联
操作，说不定就已经改变了其功能了，所以。。。就不考虑那么多了）
Any input is welcome！有搞过类似的，直接给产品+protocol信息吧，包子求！ |
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b*******g
发帖数: 1309 | 20 一般认为gold 是+1价， S是-1价,但是Au-S应该属于共价性质的
Au |
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p*******y
发帖数: 1064 | 21 表面带点性质不一样
应该属于共价吧，因为不太容易打断 |
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c*s
发帖数: 2145 | 22 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区,原文如下 】
发信人: quasi (燕双飞), 信区: Chemistry
标 题: Re: 如何从高分子结构判断是亲水还是憎水？
发信站: The unknown SPACE (Wed May 1 13:04:24 2002), 站内信件
一个基本原则是，极性或离子部分是亲水的，而共价部分是亲油或者说
是憎水的。
比如高分子的碳主链是亲油的，而极性基团，羧基，羟基，磺酸基是
亲水的。
高分子整体的亲水或憎水由两者的相对强弱决定。【
在 askwhy (I wanna know, so please....) 的大作中提到: 】 |
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r***y
发帖数: 187 | 23 从你的体系里面没有看到PU和丙烯酸之间如何共价连接的，不知道我哪里理解错了。请
指正。
另外，为什么选择PDI，我个人觉得PDI刚性比较大，并不是很适合做优良弹性的单体。
我没有做过涂料，对这方面不是很懂，但 isocynate和水会反应啊，呵呵。我肯定理解
错了。
我觉得可以参考一下水性聚氨酯的一些方法，说不定是一个突破口？！
一起探讨。
另外。大多数PU都是由硬段和软段构成的。比较PDI 和PPG，就PU来讲，一般还有一个
扩链剂。比如BDO之类的。PPG 软段，PDI 和BDO 组成硬段。您的体系如何实现这个的？
良的 |
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w********h
发帖数: 12367 | 24 超导高分子聚合物的研究进展
摘要：本文介绍了超导和导电高分子材料简要发展，对超导和高分子材料两个学科的交
叉前景做了展望，并对有机高分子超导聚合物的可能性做了一个初步的展望。
关键词：超导、导电高分子、有机、研究、发展
一、超导的发现
1911年，荷兰科学家Onnes意外地发现，将汞冷却到-268.98°C时，汞的电阻突然
消失[1]；后来他又发现许多金属和合金都具有与上述汞相类似的低温下失去电阻的特
性。导体的直流电阻率在一定的低温下突然消失，被称作零电阻效应,此时的导体变为
“超导体”。这一发现引起了世界范围内的震动，他也因此获得1913年诺贝尔奖物理学
奖。超导体没有电阻，电流流经超导体时就不发生热损耗，电流可以毫无阻力地在导线
中形成强大的电流而无损耗，也可以产生超强磁场。超导的发现不仅有极大理论价值，
而且展现了极好的应用前景。
超导的神奇性，以及其表现出的诱人的前景吸引了世界各地的众多科学家投身于
超导的研究，1957年美国科学家Bardeen、Cooper、Schrieffer三人密切合作，在前人
研究的基础上，成功的提出了第一个超导微观理论... 阅读全帖 |
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t*****n
发帖数: 13 | 25 【 以下文字转载自 Physics 讨论区 】
发信人: toddson (小蚂蚁), 信区: Physics
标 题: 谦谦君子 温润如玉-追忆在林家翘先生身边的日子
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Feb 1 03:26:04 2013, 美东)
[转载科学网] http://blog.sciencenet.cn/blog-95086-653075.html
2013年1月13日，农历的腊月初二，传统三九的第六天，在经历了近30年来最冷的冬天
后，北京城一片萧瑟，挥之不去的雾霾笼罩着这个古老都城的上空。
这天是星期天，上午9点50分，收到短信，得知林先生于凌晨4：50分走了。虽然我知道
林先生已经住院一个多月了，但是突然间收到这个消息，仍然心头一紧，一种空落落的
感觉涌上心头。遥望着窗外阴暗的天空，我思绪万千，眼前不断浮现出在这位温文尔雅
的长者面前讨论学术问题、聆听教诲的情景。
我是2005年7月留在周培源应用数学研究中心工作的。记得当时中心还暂时在理学院西
配楼，林先生在那里有一间办公室，里间是他日常工作的地方，外面是秘书靳力女士办
公桌。在中心每周四下午的讨论会上... 阅读全帖 |
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l******u
发帖数: 2314 | 26 ACS Nano:
Supramolecular Chemistry on Water-Soluble Carbon Nanotubes for Drug Loading
and Delivery
Zhuang Liu, Xiaoming Sun, Nozomi Nakayama-Ratchford, and Hongjie Dai
August 2007 Vol. 1, Iss. 1
Web Release Date: 14-Aug-2007 pp. 50-56 DOI: 10.1021/nn700040t
Read: Abstract Full Text HTML Full Text PDF (1,225k) Supporting Info
【简评】
虽然这是我看的唯一一篇ACS Nano这个新杂志的文章(Kamat的文章只是读了xiaoyi2007
的解读)，我不得不说，Dai博士给这个杂志做出了吓人的榜样。编辑们大概会很高兴，
因为这样一来没有两把刷子和足够工作量的文章是不会乱投过来的。
文章讲述用水溶性(已经PEGylated)的碳管表面非共价地沾上DOX - 一种著名的抗癌 |
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s******y
发帖数: 13 | 27 想确证一个小分子化合物比较牢固的非共价结合在了SWNT上，并且调控溶液条件可以控
制释放。有办法么？监测NIR的吸收和荧光？还是混合、洗涤测光谱？还有什么办法？
谢谢！ |
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g**a
发帖数: 953 | 28 谢谢详细的回复 非常专业。 这样说来说EMCH的结合位点是cys, 载体结合性能的问题
估计不太容易查到数据。药物的释放部位也很有意思。
我还有几个问题，请内行人赐教／指正。
dox在已不常用，是指它被其它蒽环类药物取代了吗？还是说有被其他作用机制的药物
取代的趋势？取代品的优势是因为效能更强，还是不容易抗药，或是副作用轻？我感觉
蒽环类化合物在血液病，淋巴瘤和实体瘤上都有一些应用。
此外 和脂质体阿霉素相比，这种albumin-EMCH的优势可能体现在哪儿呢？
是的我也看到了Abraxane，它是taxol非共价结合albumin再内吞到细胞内。
再次感谢
albumin
tumor
gsh |
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t*****n
发帖数: 13 | 29 [转载科学网] http://blog.sciencenet.cn/blog-95086-653075.html
2013年1月13日，农历的腊月初二，传统三九的第六天，在经历了近30年来最冷的冬天
后，北京城一片萧瑟，挥之不去的雾霾笼罩着这个古老都城的上空。
这天是星期天，上午9点50分，收到短信，得知林先生于凌晨4：50分走了。虽然我知道
林先生已经住院一个多月了，但是突然间收到这个消息，仍然心头一紧，一种空落落的
感觉涌上心头。遥望着窗外阴暗的天空，我思绪万千，眼前不断浮现出在这位温文尔雅
的长者面前讨论学术问题、聆听教诲的情景。
我是2005年7月留在周培源应用数学研究中心工作的。记得当时中心还暂时在理学院西
配楼，林先生在那里有一间办公室，里间是他日常工作的地方，外面是秘书靳力女士办
公桌。在中心每周四下午的讨论会上，当时中心主任谢定裕先生跟大家谈起林先生和学
生之间的讨论内容，我了解到林先生倡导的蛋白质结构理论研究。这是一个新奇而又充
满诱惑力的研究领域，对于固体力学出身的我来说，生物学简直就是一座笼罩在浓雾之
中的大山，然而林先生提出的蛋白质折叠随机过程和统计热力学方法，... 阅读全帖 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 30 代LP发帖，欢迎交流指教。多谢！^_^
实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
都用酒精作溶剂。
2. 标记运动神经元的效率下降。以前我用dextran注射的时候，只要注射到轴突支配的
肌肉里面，很容易就标记了运动神经元。现在用CM-DiI，会发现被注射的肌肉部分有很
强的荧光，但却没有进入轴突。貌似需要很精确地注射到轴突里面才行，那... 阅读全帖 |
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t*****r
发帖数: 747 | 31 张毅现任哈佛大学医学院教授。张毅教授1984年获中国农业大学生命科学专业理学学士
，1987年获中国农业大学生命科学专业理学硕士学位，1995年获得佛罗里达州立大学博
士学位，之后在霍华德•休斯医学研究所从事博士后研究，曾任北卡罗莱纳大学
教堂山分校Kenan杰出讲席教授和霍华休斯医学研究院研究员。
张教授多年来一直致力于表观遗传学的分子机理研究，在组蛋白的共价修饰及其生物学
功能研究领域取得了一系列重要研究的成果。
张教授累计发表论文120余篇，其中在Science、Nature和Cell杂志上发表文章27篇，
2008 年被Science Watch评为生命科学领域最有影响的前十名作者。 |
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z**********e
发帖数: 22064 | 32 第十二章金属矿的开采与冶炼
一、开采金属矿的目的及其简况
所谓金属矿，在当时是指金、银、铜、铅、铁等种类。在1874—1875
年间，大臣疆吏筹议海防中奏请开采煤炭时，常常是煤铁并提，也涉及铜铅
等五金矿藏。例如丁日昌于1874年在其《海防条议》中说：“镇江之东南山
煤铁五全似皆可采。..产煤之处皆多产铁。..五金煤铁等项，非特利源
所系，亦军事胜败所关，..故开矿一层，尤为目前军事饷事之第一要务矣。”
③其他封疆大吏也有类似的煤铁五金并提的说法。但付之于实行时，首先是煤
炭，虽也注意到铁的开采，实际上却未曾与煤置于同等重要的地位，“先煤
后铁”是办洋务企业者常讲的一句话，其他金、银、铜、铅等就等而次之了。
这可能是由于以下几个原因所造成：一是洋人觊觎中国矿藏最早的着眼点是
煤炭，清政府洋务派为保护自身的利权，故把采煤放在优先的位置：二是洋
务军用工厂和兵商各轮迫切需煤，不橡五金那样可以暂时从缓；三是采煤较
为易办，并且采出来即可使用，经济效益也可以立竿见影，不像铜、铁等金
属需要有一个冶炼加工过程。以故，金属矿使用机器开采与冶炼，延至1880
年前后始提到实践的日程，比之煤炭的开采晚... 阅读全帖 |
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