b******n
发帖数: 4225 | 1 1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。
进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好
抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是... 阅读全帖 |
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i****g
发帖数: 3896 | 2 写得比较有意思，但是不太实用，可能实验条件相差太大。precast gel比自己制的gel
效果要好很多，结果也容易重复。antibody要看运气的，呵呵。
1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这... 阅读全帖 |
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w********h
发帖数: 12367 | 3 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: bulletin (bulletin), 信区: Biology
标 题: 穷人的劳斯莱斯——五年western经验谈（转）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Mar 2 23:29:05 2012, 美东)
1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10... 阅读全帖 |
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M**a
发帖数: 4816 | 4 本人，男，2002年中科院博士毕业，当年J1签证去UVa被据，因为自己底气不足，所以
转战法国【1】。一年半后，把蛋白质双向电泳技术平台建起，却被告知法国政府削减
基础研究经费，下半年的经费没有着落了，虽然老板努力找了个大使馆的奖学金，我还
是因为老要担心下半年在哪里上班的压力，转回米国【2】。米国实验室老板是华人，
当时比较穷，可人还好，所以在呆了一年之后，选择了留下【3】。再后来，就是文章
稿子压在老板手上，一直出不去，到2007年【4】。老板在去年7月答应给办绿卡，结果
今年4月发了广告，到前几天告之系里认为广告无效，理由是有2美国人申请了这个位置
。无语了。
【】内的几次选择，现在看起来都是错的。唉。
文章，无。草稿，无数。
想法，一打；白头发，一把。
想自己办绿卡，因没有文章，也确实底气不足，除了催老板改文章投出去，还要咬牙想
办法多做实验，多出草稿，然后，走人，换个地方。
牢骚和教训发完了，想借地问问各位前辈，
1）没有文章能自己弄绿卡么？不请律师，自己能摆平不？
2）还要继续相信老板么？
3）没有文章能换到好一点的（主要是老板人要NICE）地方吗？
祝各位后来的DDMM们 |
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b******n
发帖数: 4225 | 5 现在有些proteomics的工作，抽提蛋白做SDS-PAGE（不是双向电泳）
然后割胶做LC-MS方面的工作
如果有糖蛋白，怎么能识别出来？因为糖基化修饰有时候很未知的，你不知道有几个糖基
我理解MS就是得到一个肽段的分子量，然后跟已知肽段分子量比较
如果目的肽段有可能糖基化，是不是很有可能无法鉴别出来？ |
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c*****t
发帖数: 1879 | 6 Spin your sample down really well (15 min, max speed), then
take the very top layer.
PS, I use phast gel system, can get away with little sample
volumn :) |
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