发帖数: 1 | 1 前些天楼下几个河南老乡聚餐,我因为在平顶山上过学的缘故也被邀请了。
菜还挺丰盛的,我吃了特多。其中最好吃的就是两条新鲜大鲤鱼,每条都有7-8斤重。
他们丫做了一个酸菜红烧鱼,一个烤鱼。我很久没吃鱼了,我一个人起码吃了3斤半的
鱼,太好吃了。
然后我就问我说你们鱼哪儿买的。特新鲜特好吃。然后一个开封来的千老就说你根本买
不到这么新鲜的鱼,因为都是现钓的。我说你丫你教教我怎么钓,我也钓点儿,还能省
个肉钱。
然后丫就说你就用lab的培养基,搓个琼脂团子,往钩子上一挂,往水里一扔,就行了。
我说你丫你吹牛呢吧培养基也能钓鱼??
丫就说培养基营养巨丰富,又香,鱼特喜欢。而且搓的琼脂丸子有一定弹性,不像面粉
团子容易被小鱼偷饵。
尼玛也不知丫说的真的假的,我感觉丫们像是吹牛逼逗我玩儿。版上会钓鱼的索南说说
看。 |
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s*********t 发帖数: 1229 | 2 想要配PDA培养基
网上搜了下,都是要用土豆自己做。
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基是分离菌物和细菌的常用培养基,其做法是称取200g
马铃薯,洗净去
皮切成小块,加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟,纱布过滤,再加10-20g葡萄
糖和17-20g
琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),15
磅蒸气
(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
请问这里有买现成的原料自己配吗?就是用 葡萄糖,agar 和(土豆粉?)按比例混合
水? |
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m*****5 发帖数: 23482 | 3 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: yelo (没有昵称), 信区: Military
标 题: 拿着变黄的培养基,我泪流满面
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Nov 3 11:45:35 2011, 美东)
前天晚上把细菌培养瓶的瓶盖拧的太紧,过了24个小时,里面的培养基变黄发酸了.
酸性环境杀死了我需要的实验菌种,这周又要白干了.
千老的日子不是人过的啊隔壁美女师姐也要回国
我担心她要回去嫁人,早上她来敲门, 递给我一块浸泡了KOH的纱布,告诉我下次把这个
纱布悬在培养瓶里,对改善碳酸有帮助.
我接过纱布,哽咽了一下,她的手很漂亮,指甲精心修过,手背面还有不小心用强酸烫出来的
一些伤痕.真想鼓起勇气去握住.但是我双手都拿着试管.只好用力捏捏试管,仿佛捏住了
她的手指.
她仿佛看出了我的想法,跟我谈谈的说,这次回去,我就不一定回来了.
我不知道她为什么这么说,傻呼呼地冒出一句,我会想你的.
师姐轻轻地带着些哭腔说,你想我干嘛?然后带门出去了.
我左手里拿的那些免疫亲和柱纯蛋白,顿时融化...... |
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k**t 发帖数: 63 | 4 请教大家一个问题:
最近想Check以下,分离得到的一个菌株是否具有trimethoprim 抗性,以便确定下一步
插入transposon的抗生素选择,请问大家用什么样培养基进行trimethoprim 抗性测试
。我试过LB 培养基,不知为什么,到200ug/ml菌还能生长,是不是说明这个菌具有
TMP抗性呢? 可是我的对照的E.COLi 有时也能生长。请大家指点。
非常感谢 |
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d*****a 发帖数: 53 | 5 各位达人:
小弟正在尝试小规模发酵(50-500升)来生产大肠杆菌(用来表达蛋白),目前用的的
培养基大都大都只能生产几克或者10几克菌体,看了药厂的已经至少可以达到上百克菌
体,因此很是苦恼,还请各位前辈给予指点一些比较有效的发酵培养基配方,感激不尽
! |
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s*****y 发帖数: 32 | 6 RT。有没有什么培养基是纤维细胞不长,上皮细胞能长的?我需要把一个纤维细胞和上
皮细胞的混合中,把上皮细胞纯化出来。要是有什么培养基可以直接分离出这种细胞就
方便很多了。FACS来分选还是太麻烦了。 |
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h**********r 发帖数: 671 | 7 感谢sunnyday MM,培养基的stock solution发霉,不是最后的培养基发霉。这个stock
solution没有autoclave也没有filter除菌。
Thanks! |
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y**o 发帖数: 8897 | 8 前天晚上把细菌培养瓶的瓶盖拧的太紧,过了24个小时,里面的培养基变黄发酸了.
酸性环境杀死了我需要的实验菌种,这周又要白干了.
千老的日子不是人过的啊隔壁美女师姐也要回国
我担心她要回去嫁人,早上她来敲门, 递给我一块浸泡了KOH的纱布,告诉我下次把这个
纱布悬在培养瓶里,对改善碳酸有帮助.
我接过纱布,哽咽了一下,她的手很漂亮,指甲精心修过,手背面还有不小心用强酸烫出来的
一些伤痕.真想鼓起勇气去握住.但是我双手都拿着试管.只好用力捏捏试管,仿佛捏住了
她的手指.
她仿佛看出了我的想法,跟我谈谈的说,这次回去,我就不一定回来了.
我不知道她为什么这么说,傻呼呼地冒出一句,我会想你的.
师姐轻轻地带着些哭腔说,你想我干嘛?然后带门出去了.
我左手里拿的那些免疫亲和柱纯蛋白,顿时融化...... |
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发帖数: 1 | 9 具体办法是把grant一年25万全部拿来买培养基。然后在ebay卖掉,然后钱分了。 |
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f********n 发帖数: 6465 | 12 pertussis toxin (PTX,Gi蛋白的抑制剂)使用时为什么培养基中不能加FBS?
谁给科普一下啊。 |
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s******s 发帖数: 13035 | 13 你用啥玩意发酵的?你有发酵罐?
跟培养基没啥关系,LB一样能长到OD15甚至更高,除非你的蛋白有啥毒性啥的 |
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h***n 发帖数: 1793 | 14 为什么在完全培养基中要加入putrescine呢? |
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h**********r 发帖数: 671 | 15 辛辛苦苦地折腾了大半天,配trace soltuion,配stock,调pH。配完后放4c,一个月后发
现长毛了。请问如何应对?加点CH3CI?又怕太毒了。用之前要autoclave的。培养基是
养微生物的,也做转化实验。
多谢建议! |
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s******y 发帖数: 28562 | 16 培养基不会无缘无故发霉的,一般只有两个原因:
1。消毒不严格; 2。瓶子没盖好
如果是1,那就加强高温消毒的过程,如果原来用20分钟消毒那么就加到30分钟
如果是2,那么就用更好的盖子,如果是用铝膜的话注意要用双层 |
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w*****1 发帖数: 121 | 18 最近我们正准备研发某动物血清细胞培养基的制备工艺,如果有如胎牛血清制备经验的
朋友可以与我联系,项目发展前景较大,相关部门提供大力支持。
我的邮箱:[email protected]
/* */ ,微信:xizhongzhu |
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b******n 发帖数: 4225 | 19 RP-HPLC
流动相是a gradient of 0–35% CH3CN (with 0.1% TFA) in water (with 0.1% TFA)
目的是检测medium中的我们感兴趣的物质被细菌利用的情况
我查了一下,MEM-alpha中磷酸二氢钠的浓度大概1 mM
这个medium我直接拿过来酸化之后用0.22um的filter过滤
能否直接上HPLC的柱子[Vydac C18 (22 x 250 mm) column]
会不会堵上?
请有经验的人,尤其是做过细胞培养基分析的人指点一下
谢谢啦 |
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v**********t 发帖数: 9 | 20 先附上猎头联系方式:qq3386366586,微信:futing2870
职位一:生物大分子发现总监(Phage Display)
岗位职责:
1. 负责构建人抗体的噬菌体展示库,利用展示技术进行新单克隆抗体序列的筛选、
鼠源抗体人源化、亲和力成熟以及抗体成药性的优化;
2. 负责除单克隆抗体外的其他新型结构抗体包括双特异抗体、单域抗体的噬菌体展
示筛选、优化;
3. 在创新生物大分子药物的研发过程中,协同其他专业团队,保证项目研发快速高
质量推进;
4. 协助调研临床疾病治疗需求,进行创新项目的选题立项;
5. 负责噬菌体展示实验室仪器设备、试剂耗材等的综合管理;理;
6. 负责相应团队的培训和建设、指挥与管理。
任职要求:
1. 学历要求:博士学历;
2. 专业要求:分子生物学、生物化学、免疫学等相关专业;
3. 工作经验:
1) 具有8年以上噬菌体展示技术开发生物大分子药物工作经验者;
2) 或具有5年以上国际大药企的噬菌体展示筛选部门成功... 阅读全帖 |
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G****a 发帖数: 10208 | 21 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: Clonetech (Clonetech), 信区: Biology
标 题: 故事人生______我的博后生涯
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Nov 18 15:39:43 2010, 美东)
按版主的要求,将零散的段落连在一起重发一次, 不好意思。
***********************************************************************
在我以往的科研生涯最困难的时候,曾在此版得到好心网友的指点。 怀着感恩的心写
下自己的一点切身经历,或许能给版上的兄弟姐妹点滴启迪。
(一 )
2007年 4月我完成博士论文答辩,7月1号高高兴兴地正式进入博后老板的实验室。 高
兴的原因有三: 1) 老板是领域大牛;2) 课题新颖前沿;3) 面试的经历让我觉得老板
能给我提供一个施展才华的平台。
我所承担的课题,老板原来的一个博后(法国人/代称 A)已经启动,分离了有特定遗传
性状的大量突变体,而且构建好了用来克隆基因的群体。所以老板给我交待工作的时候
还得意地... 阅读全帖 |
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C*******h 发帖数: 75 | 22 <三 >
圣诞节休假回来后,我着手克隆另外的三个基因, 在所里专门负责培养基制作的人员
处填写了订单。因苗量数目庞大,培养基自然也多,所以我把所有的培养基都统一放在
一个靠近我 BENCH的地方。因为第一个基因已经到手,工作大致走上了正轨,连夜加班
已经没有必要,正好也腾出些时间来阅读文献了。
2008年1月16号,在兄弟C的帮助下,我们俩用这批培养基上了总数10000颗幼苗进行特
定的抑制剂筛选重组单株。然而万万没有料到,24小时后,所有的苗无一幸免,全都死
亡。思忖了一会儿,回办公室把所有可能出现的问题都一一罗列出来。分析来分析去无
外乎两种可能:(1)抑制剂出了问题 & (2)培养基出了问题。在和专门负责培养基的技
术员讨论完后,感觉到培养基有问题的话,也该是到我手头后的事情。死亡的形态让我
推测有可能培养基的pH 值要么过高要么过低。于是把养苗的培养基回收测定pH,NND,
14!缺德啊,出离了愤怒,谁在我的培养基里加强碱了。虽然事实就摆在面前,可是对
于是谁干的,确没有确戳的证据。我只能打掉牙,把苦水往肚里咽。
在这里我内心真的被兄弟C所打动了。是你的衷心帮助,让我即刻走出了... 阅读全帖 |
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C*******h 发帖数: 75 | 23 按版主的要求,将零散的段落连在一起重发一次, 不好意思。
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在我以往的科研生涯最困难的时候,曾在此版得到好心网友的指点。 怀着感恩的心写
下自己的一点切身经历,或许能给版上的兄弟姐妹点滴启迪。
(一 )
2007年 4月我完成博士论文答辩,7月1号高高兴兴地正式进入博后老板的实验室。 高
兴的原因有三: 1) 老板是领域大牛;2) 课题新颖前沿;3) 面试的经历让我觉得老板
能给我提供一个施展才华的平台。
我所承担的课题,老板原来的一个博后(法国人/代称 A)已经启动,分离了有特定遗传
性状的大量突变体,而且构建好了用来克隆基因的群体。所以老板给我交待工作的时候
还得意地说了句 "WE HAVE A GOOD START" 。
A 从老板手下出来,有老板的鼎力支持,在老板所在的研究所于2007年6月成立了A自己
的研究小组,继续研究他在老板实验室的课题。
A本人的博士后(代称 B)和我各自从 A手上接手4个已构建好 MAPPING ... 阅读全帖 |
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C*******h 发帖数: 75 | 24 按版主的要求,将零散的段落连在一起重发一次, 不好意思。
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在我以往的科研生涯最困难的时候,曾在此版得到好心网友的指点。 怀着感恩的心写
下自己的一点切身经历,或许能给版上的兄弟姐妹点滴启迪。
(一 )
2007年 4月我完成博士论文答辩,7月1号高高兴兴地正式进入博后老板的实验室。 高
兴的原因有三: 1) 老板是领域大牛;2) 课题新颖前沿;3) 面试的经历让我觉得老板
能给我提供一个施展才华的平台。
我所承担的课题,老板原来的一个博后(法国人/代称 A)已经启动,分离了有特定遗传
性状的大量突变体,而且构建好了用来克隆基因的群体。所以老板给我交待工作的时候
还得意地说了句 "WE HAVE A GOOD START" 。
A 从老板手下出来,有老板的鼎力支持,在老板所在的研究所于2007年6月成立了A自己
的研究小组,继续研究他在老板实验室的课题。
A本人的博士后(代称 B)和我各自从 A手上接手4个已构建好 MAPPING ... 阅读全帖 |
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y***u 发帖数: 7039 | 25 柴卫东:不要注射被外国人插手过的诡异的麻疹疫苗!
http://www.wyzxsx.com/Article/Class4/201110/268207.html
不要注射被外国人插手过的诡异的麻疹疫苗!
一、令人震惊的消息——2011年麻疹疫苗再掀波澜,矛头直指育龄妇女
2011年,媒体披露,全国多个省市部署对大中专学校在校生进行麻疹疫苗注射。有
地方称,在2011年到2012年期间,将按照自愿免费原则,为所有20-35岁育龄妇女接种
一剂次麻疹风疹疫苗。
我国已经成功控制住的儿童疾病,为什么突然要大规模给成年人注射疫苗,且特别
针对育龄妇女?
政协委员何新先生评论说:“有必要指出,毒疫苗所内涵的恶果,其实有些是要在
许多年后才会逐步显现的,有些甚至是隔代显现的。而作为此次疫苗来源地的荷兰——
这是一个非常特殊的低调金融、石油和医药国家,这个国家不仅是上世纪50年代神秘
的“比德伯格俱乐部”的发起国,自18世纪以来也是被共济会最早控制的主要欧陆国
家之一。”
“愿卫生部高抬贵手,不要强制人们注射诡异的外国加工麻疹疫苗————让多灾... 阅读全帖 |
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w*********g 发帖数: 30882 | 26 柴卫东:不要注射被外国人插手过的诡异的疫苗!
| 作者:柴卫东
一、令人震惊的消息——2011年麻疹疫苗再掀波澜,矛头直指育龄妇女
2011年,媒体披露,全国多个省市部署对大中专学校在校生进行麻疹疫苗注射。有
地方称,在2011年到2012年期间,将按照自愿免费原则,为所有20-35岁育龄妇女接种
一剂次麻疹风疹疫苗。
我国已经成功控制住的儿童疾病,为什么突然要大规模给成年人注射疫苗,且特别
针对育龄妇女?
政协委员何新先生评论说:“有必要指出,毒疫苗所内涵的恶果,其实有些是要在
许多年后才会逐步显现的,有些甚至是隔代显现的。而作为此次疫苗来源地的荷兰——
这是一个非常特殊的低调金融、石油和医药国家,这个国家不仅是上世纪50年代神秘
的“比德伯格俱乐部”的发起国,自18世纪以来也是被共济会最早控制的主要欧陆国
家之一。”
“愿卫生部高抬贵手,不要强制人们注射诡异的外国加工麻疹疫苗————让多灾
多难的中国人在当今这个风云诡谲变幻莫测的世界上,多多少少留下几个健康人的种子
吧!
去年陈竺先生曾经就麻疹疫苗注射问题对我做出三点明确的说... 阅读全帖 |
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w*********g 发帖数: 30882 | 27 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: wayofflying (小破熊), 信区: Military
标 题: 不要注射被外国人插手过的诡异的疫苗!
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Nov 27 16:13:06 2011, 美东)
柴卫东:不要注射被外国人插手过的诡异的疫苗!
| 作者:柴卫东
一、令人震惊的消息——2011年麻疹疫苗再掀波澜,矛头直指育龄妇女
2011年,媒体披露,全国多个省市部署对大中专学校在校生进行麻疹疫苗注射。有
地方称,在2011年到2012年期间,将按照自愿免费原则,为所有20-35岁育龄妇女接种
一剂次麻疹风疹疫苗。
我国已经成功控制住的儿童疾病,为什么突然要大规模给成年人注射疫苗,且特别
针对育龄妇女?
政协委员何新先生评论说:“有必要指出,毒疫苗所内涵的恶果,其实有些是要在
许多年后才会逐步显现的,有些甚至是隔代显现的。而作为此次疫苗来源地的荷兰——
这是一个非常特殊的低调金融、石油和医药国家,这个国家不仅是上世纪50年代神秘
的“比德伯格俱乐部”的发起国,自18世纪以来也是被共... 阅读全帖 |
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S*****N 发帖数: 242 | 28 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: wayofflying (小破熊), 信区: Military
标 题: 不要注射被外国人插手过的诡异的疫苗!
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Nov 27 16:13:06 2011, 美东)
柴卫东:不要注射被外国人插手过的诡异的疫苗!
| 作者:柴卫东
一、令人震惊的消息——2011年麻疹疫苗再掀波澜,矛头直指育龄妇女
2011年,媒体披露,全国多个省市部署对大中专学校在校生进行麻疹疫苗注射。有
地方称,在2011年到2012年期间,将按照自愿免费原则,为所有20-35岁育龄妇女接种
一剂次麻疹风疹疫苗。
我国已经成功控制住的儿童疾病,为什么突然要大规模给成年人注射疫苗,且特别
针对育龄妇女?
政协委员何新先生评论说:“有必要指出,毒疫苗所内涵的恶果,其实有些是要在
许多年后才会逐步显现的,有些甚至是隔代显现的。而作为此次疫苗来源地的荷兰——
这是一个非常特殊的低调金融、石油和医药国家,这个国家不仅是上世纪50年代神秘
的“比德伯格俱乐部”的发起国,自18世纪以来也是被共... 阅读全帖 |
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f********s 发帖数: 115 | 29 你说的很多我都同意。只不过现在我想定量的的来分析一种特定的 progenitor (ex.
CMP) 分化到各个lineage 的能力。我觉得在把多个progenitor 接种到同一个盘子上
有几点非常影响我做定量分析:
1.你在挑集落的时候是可以看到集落的样子的,所以也许你会不自觉的多挑或者少挑某
些集落,引入bias;
2.在挑集落的时候,大的集落容易挑出来,小的集落不容易挑,即使挑了小集落在后续
实验过程中不知道怎么就不见了 (而且大小通常意味着不同的lineage),也会严重影响
实验者的判断。
因此,我觉得一定要接种单细胞到96孔板里,在不看孔的情况下, 随机挑选比如说20个
孔来观察,这样可以得到各种百分比,比如说百分之多少的单细胞能形成集落,百分之
多少的细胞能形成红细胞集落,多少能形成粒细胞集落……不知道关于这一点你是否同
意?
在这个基础上,我想知道半固体和全液体培养基在这个实验里的优劣。我能想到的半固
体的坏处在于,1.如果你不看孔,不知道这个克隆在哪里,你就要把全部的200ul半固
体培养基吸出来,非常不利于cytospin. 2.而且半固体培养基会有一部分粘在t... 阅读全帖 |
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z******g 发帖数: 1331 | 30 健康元:地沟油是原料培养基 专家称不影响质量
2012年08月31日 09:29 已有38人阅读 字号:T | T 复制链接 打印
[财讯网]针对健康元用地沟油制药,健康元董事长表示,地沟油只是用来做培养基,出
产出来的产品完全合格。专家也表示:使用油酯类物质作为头孢菌的营养成分,不会对
7-ACA产品质量造成影响。
根据公安机关侦查,健康元全资子公司――河南焦作健康元生物制品有限公司涉嫌采购
地沟油制药,并用于生产制药原料7-ACA。根据公诉机关指控,2010年初至2011年7月,
河南惠康油脂有限公司及其关联企业与焦作健康元签订购销合同,共销售1.62万吨地沟
油,金额高达1.45亿元。
对此,健康元称地沟油只是培养基,用来作为食物提供给微生物,进而在一系列的工艺
下生产出7-ACA,并不是直接作为产品原料,不会影响产品的最终质量。健康元董事长
朱保国称,地沟油只是培养基,化工原料没有质量问题,如果不合格我们愿意承担任何
责任。
军事医学科学院毒物药物研究所药剂学研究室主任梅兴国撰文表示,7-ACA生产过程中
使用油酯类物质作为头孢菌的营养成分,生产过程中需要经过多次分离纯化处理,... 阅读全帖 |
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M*****3 发帖数: 259 | 31 生物学投入高产出低是目前短期内难以改变的现状,为什么要投这么多钱了?
感觉美国投资是要把整个产业链培养起来,虽然,真正投资到research上的钱,基本没
啥产出,但是这些钱除了人头费之外,都买了药品,试剂,并且这些药品试剂美国产的
居多,其实,NIH的钱间接的流入了美国的生物试剂公司,这些钱的稳定流入,保证了
这些美国公司有长期的订单,从而降低了产品成本,并且保证了生产线不被关闭,使美
国的公司更有竞争力。并且,生产生物试剂的这些公司,大部分应该属于生物以外的,
比如化工,机械等,这些行业是可以赚钱的。
我不是生物内行,做个可能不恰当的比喻,美国投资搞微生物,就要买培养基,培养基
大部分是美国公司产的,不管通过了那个大学的账户,这部分的经费最终流入了生产培
养基的公司。这样,美国政府就间接给了这批公司稳定的订单,而培养基的公司就可以
安心的搞技术改进而不用担心明年没订单了,这样这个公司就可以低成本的生产优质的
培养基,卖到全世界去。世界其他国家发现了一种很有用的微生物,那产业化也极有可
能在美国完成,因为只有在美国能方便的买到大量廉价的培养基。
中国投了很多经费,然后自己有生产不出培... 阅读全帖 |
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W*****B 发帖数: 4796 | 32 无公害的人粪尿发酵肥
人粪尿是富含氮素的速效有机肥,肥效良好,果蔬栽培应用广泛,有显著的增产效
果,但发酵方法不当可使氮素损失40%以上且污染无公害栽培的大气环境。科学的发酵
方法是保证肥效和无公害生产的首要技术。
1、新鲜的人粪尿放入发酵池,按3%的比例加入优质的过磷酸钙和少量的硫酸亚铁
(每100千克人粪尿加入0.5千克硫酸亚铁)。人粪尿中加入磷肥能使细菌繁殖力增强,
加快发酵速度,还能使人粪尿中易挥发的碳酸铵转化成磷酸铵,防止氮素的损失,而且
弥补了人粪尿中磷肥含量低的缺点。人粪尿硫酸亚铁,可使其中的碳酸铵转化成性质稳
定的硫酸铵,也能起到防止氮素损失的作用。人粪尿中的腐殖酸能使土壤减少对铁的固
定,充分发挥硫酸亚铁松暄土壤,预防缺铁性黄叶的作用。
2、加入加速发酵菌剂。
3、搅拌均匀后覆盖薄薄一层田园土。能阻挡发酵放出的氮素气体挥发进入空气中
,保证无公害果蔬生产的环境质量。
4、如果是早春,要在池上搭设竹弓子,铺上塑料棚膜,四边用土压严实,搭设小
拱棚可起到升温保温的作用,也是肥料快速发酵,完全发酵的关键技术之一。
... 阅读全帖 |
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a****a 发帖数: 26187 | 33 ☆─────────────────────────────────────☆
lonelycloud (floatingcloud) 于 (Tue Oct 18 12:29:31 2011, 美东) 提到:
唉,前些日子没事就开始捉摸着种植蘑菇,喜欢家乡的平菇,这里叫oyster mushroom
。以前在DC地区的大中华(Great Wall)经常见到,四块多钱一磅,觉得好贵,因为我
们老家很便宜,比青菜稍微贵点,现在老爸说也就2.5人民币一斤;搬到这里看到沃尔
玛更黑,一片要卖一块多,天哪,我要多少片我才能吃一顿,不过我也不能确定那是不
是oyster mushroom,因为就一片一个包装。那天转到附近的nursery 听到mushroom
compost,才激发自己探索种植蘑菇之路。
到网上找菌种,一看价钱放弃了,还不如直接买蘑菇吃呢?可还是不甘心,尤其上
次经刚刚点拨可以自己培养菌种,最近开始研究如何培养菌种。不过从蘑菇培养菌丝这
一步,因不能确认蘑菇,只能到网上购买grain spawn,然后繁殖。今天通过我免费拿
鸡粪的养鸡人找到了卖rye grain的店... 阅读全帖 |
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t*******n 发帖数: 446 | 34 我们实验室做表达一般是这样的:头天新鲜转化的平板,第二天早上挖下一堆克隆转到
100-200ml LB的培养基中37度摇到OD1.0,离心后转到新鲜配制过滤的N15标记的1升M9培养基中,37度摇到OD1.0后加IPTG诱导。
一直以来都很顺利,不过这一段时间出了怪事:M9培养基扩增的时候OD值升到0.5-0.6的时候就突然开始猛降,培养基也变得澄清,OD值降到大概0.1。如果接着摇OD值还能再升回来,摇过夜的话还能升到1.5左右。培养基中有很多白色絮状物,闻上去不像大肠杆菌的味。这个时候加IPTG诱导,有时能拿到自己的蛋白,有时候拿不到。
大家帮我看看是什么污染? |
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f********s 发帖数: 115 | 35 想请教一个实验问题:有没有人尝试过用液体培养基加细胞因子来分化过细胞?
我想做这样一个实验,把MEP用FACS分选出来,然后在每一个96孔板的孔里面放一个细
胞。分化7天以后把这个孔里的细胞cytospin + staining, 然后看每个MEP都能分化成
什么种类的子细胞。用这个实验来比较wt 和mut 的区别。我看到一个protocol, 用
IMDM+ SCF,IL3, IL11, GM-SCF, FLT3-Ligand, TPO和EPO 来养细胞。我没有做过液
体培养基,一般用的都是methylcult medium,所以不知道液体培养基的效果好不好。有
没有有经验的人来说一说呢?
不知道在哪里看到说semi-solid的培养基比纯液体好,但是考虑到最后要cytospin,
semi-solid的培养基太粘了,洗一下的话又怕细胞丢失太多,因为本来一个细胞就分化
不出太多细胞。
多谢多谢!! |
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s******y 发帖数: 28562 | 36 我没有做过血细胞分化啊,所以困惑的来问一下啊,
如果不加半固体培养基的话,乐意贴壁的细胞贴到培养板的底部不就完了么?
然后收集的时候先吸走液体,就把那种不贴壁的细胞移走了,然后再用trypsin
处理,不就把贴壁的细胞收集下来了么?
而且如果要直接在板上观测的话,多了那个半固体培养基反而麻烦,因为对焦
很麻烦的。
当然用半固体培养基的一个好处就是所有的细胞都不贴壁,可能在收集的时候比较
好办吧?但是如果不小心的话会把培养基什么的也收集下来,会很讨厌吧?
所以我奇怪的问一下,为什么一定要用这个半固体培养基啊? |
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j****x 发帖数: 1704 | 37 关于这个问题,刚读研无聊的时候做过不是很严谨的比较,“结论”是和缺氧无关
当时的培养瓶盖还是老式的,不带filter需要自己拧开一个角度的那种,同时养的三种
细胞293/Huh7/Hela,用的invitrogen的普通DMEM培养基,不含hepes。有一次传细胞的
时候没留神盖子全部拧紧,结果第二天发现所有培养基全部变碱,293/Huh7贴壁出现严
重问题,漂浮大量“死细胞”,活细胞形态也非常差。但是Hela没有任何问题,一切正
常。拧开瓶盖之后不到24小时,多数“死细胞”重新贴壁,细胞形态恢复正常,培养基
颜色也回到正常pH范围。这时候我又把瓶盖拧紧,继续培养差不多48小时,所有细胞生
长一切如常,这时候由于细胞已经生长一段时间自然产酸,即便拧紧瓶盖,培养基也不
会变碱的过分。
我的“结论”是,某些细胞(293/Huh7)对培养基pH比较敏感,尤其是在悬浮后等待贴
壁的时候,而有些糙的比如Hela就不敏感,而缺不缺氧,大部分细胞不在乎,尤其是在
短时间内 |
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R****a 发帖数: 6858 | 38 这种武器用来对付印度、越南、印尼、日本这样人口众多、土地稀少的国家会非常好用
的。
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我国粮食作物病毒病研究的先驱――王鸣岐
2006-01-01 作者:王守正 查看评论 进入光明网BBS 手机看新闻
王鸣岐,植物病理、植物病毒学家。他首次发现粟黑粉菌异宗配合,并突破在人工
培养基上完成其生活史的技术。他是我国粮食作物病毒病研究的先驱
,对粮食作物病毒的鉴定、诊断和防治的研究上取得了许多开创性成果。晚年,他从事
病毒分子生物学和遗传工程的研究,许多成果达到国际先进水平。此外,对粮食安全贮
藏和粮食微生物学的研究,他也做出了一些重要贡献。
王鸣岐,又名凤岗,号济熙。1906年2月17日出生于河南省滑县一个农民家
庭里。幼年常随家人下地耕耘。1913年进邻村蚕桑小学学习,毕业后,因家庭经济
困难回家务农,并在本村就读私塾。在此期间,经常聆听老师教导:读书要有益于天下
;学习要博学、审问、慎思、明辩、笃行。这些话他虽然不甚理解,但在幼小心灵中却
留下了深深的烙印。192... 阅读全帖 |
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w*********o 发帖数: 830 | 39 偶是一个刚开始工作的新人,最近碰上一件事向大家征求意见:
现在做的一个project跟同组的一个女同事(硕士,在这个部门工作3年了)合作,但是
这个同事做事情特别马虎,接连犯各
种各样的低级错误,归咎到底就是做事情不认真。给大家举个例子吧:我们是做细胞培
养的,有次她给细胞换培养基(培养
基就是给细胞提供吃的),结果这个大姐把旧的培养基从培养器中取走后,竟然把新的
培养基加到别的地方去了(用的是
24孔板,只用了两个孔养细胞,结果这个大姐就把培养基加错地方了,如果是学生物的
这样说比较好懂)。如果里面只有
细胞,你看错了好说,但是里面明显还有其他东西,即使个高度近视的人,只要看一眼
就知道啊。结果细胞被饿了至少4个
小时,直到我想重新看细胞才发现,但是已经晚了。这样低级的错误她在不到3个月的
时间里,不知道已经犯了多少次了,
我都会替她cover一下,并且已经照顾了大部分的细胞。
但是最近她养的一种细胞出问题了(不是第一次,以前我跟另外一个人替她补救过),
结果lab manager就知道了。今天她
跟lab manager聊了,然后lab manager来找我,问情况,我说了一点她的... 阅读全帖 |
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s****y 发帖数: 89 | 40
达到
溶液了
我试过在培养基快变黑前换溶液,换过溶液后一两天在下一次溶液颜色快变黑前我离心
细胞,会发现细胞颜色还是淡黄色的,也就是说只有等到培养基颜色变完全黑了(同时
细胞也死了很多了)这时我离心的话才会得到黑色细胞(可这些细胞都基本死了)。这
种情况正常吗?
您是说你们试验中在培养基变黑前离心会得到黑色细胞的吧。
培养基的颜色对我们不重要,重要的是要得到活的黑色的细胞。 |
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v***a 发帖数: 1242 | 41 是关于氯化镉(CdCl2)的溶解度问题,使用的药品纯度>99.99%。
我是在做细胞培养,需要把氯化镉添加到培养基中(终浓度3uM)。我的做法是先配置
一个3mM浓度的stock,再将stock以1:1000的比例稀释入细胞培养基中。
当我用水溶解氯化镉做3mM的stock时,氯化镉能全部溶解,溶液澄清透明,久置也不会
有沉淀产生。但如果用pH 7.4的培养基(DMEN/F12)来溶解,则氯化镉无法彻底溶解,
且放置不久就会有大量的沉淀产生(看起来比我加的氯化镉还多)。
标准做法是应该将氯化镉溶解到培养基中。
对此非常困惑。
恳请高手释疑。 |
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t*******y 发帖数: 21396 | 42 健康元用地沟油制药续:大量制成品已流入市场
昨日凌晨,焦作市政府发布公告称,网上报道“健康元采购掺杂地沟油在内的劣质成品
油制7-ACA”后,焦作市委、市政府非常重视,立即成立了一个由市直相关部门组成的
调查组进驻企业。目前,调查工作正在进行,待调查结果出来后,第一时间面向社会公
布。
4个调查组进驻企业调查
昨日,焦作市委宣传部新闻科工作人员表示,自8月30日获悉此事后,当日下午,已让
质监、工商、药监等部门组成4个调查组,进驻企业进行调查。由于此事专业性较强,
因此,虽然当前已经有一个初步的结论,但还需权威机构的认定。该人士表示,初步调
查结果很快就会以市政府公告的方式进行公开。查出是谁的问题,就由谁承担责任。
由于地沟油成分复杂,按照现有的技术,还无法知道里面到底含有哪些有害或致癌物。
为此,多名专家表示,对用地沟油代替豆油一事,风险不好评估。此前国家食品药品监
管局也发文表示,正组织专家评估豆油质量对头孢类抗生素药品质量安全的影响。
地沟油制成产品已流入市场
此前,全国首例特大地沟油案件开庭审理,牵出重磅内幕:焦作健康元在长达一年半的
时间里,连续采购1.45亿元地沟油,用于生... 阅读全帖 |
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f**e 发帖数: 3343 | 43 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: biokold (kold), 信区: Joke
标 题: 转贴:《范博中Cell》, 苦逼千老写照 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 24 00:35:12 2014, 美东)
发信人: dongHei200 (医学小子), 信区: Biology
标 题: 转贴:《范博中Cell》, 苦逼千老写照
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 23 13:33:06 2014, 美东)
范博做完实验回office,实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭,只见他老板Dr. 胡,手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基,走了进来
。范博向他作揖,坐下。Dr. 胡道:“我自倒运,把个博后位置给与你这现世宝 ,历
年以来,不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德,带挈你中了个PLoS ONE ,我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声,叫rotation student把柱和培养基收起来,在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换m... 阅读全帖 |
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l*********r 发帖数: 695 | 44 e.coli生命只有20分钟,那一天72代的数量后代数量是,4x10^21个个体。e.coli的质
量是9.5x10^-9g. 所以,72代后数量是4x10^13g, 4x10^10kg, 4*10^7吨, 4千万吨?
你肚子里的一个大肠杆菌有长这么快吗?
你说的e.coli只在营养丰富的培养基中,在对数生长期会长这么快,平时它哪有不停繁
殖?一毫升里有10^9个细菌,就不会长了。如果要你说的后代达到4x10^21个个体,那
培养基的体积会达到4x10^12毫升,也就是4x10^9升,也就是4x10^6立方米,也就是4百
万立方米的培养基,也就是一个边长160米的立方体。 |
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C*****N 发帖数: 301 | 45 年关将至,本来打算顺利的将手上的活儿都结束掉,可以安心过个节。
可是,老板却不是这样打算的,天天追着问结果。
新课题,需要摸索,进展不快也就算了。
谁知道,屋漏偏逢连夜雨。我这个老江湖竟然污染了培养基。培养基污染得也蹊跷,污
染物生长得很慢,过了几天才发现。难怪,这几天的试验结果都怪怪的。可是原因还需
要继续排查,除了培养基之外,似乎还有别的原因。几天的试验结果都白费了。
刚巧,最近在调整系统,试验结果与预想得不一样,也许是因为改了系统。如果,放在
平时,也不算件坏事,因为可能发现了些有趣的新东西。但是,在规定的时间内必须拿
到结果的情况下,可就笑不出来了。
就要放假了,很多部门都要放假了,订购试剂也不方便了。
唉,只能感叹一句,欲速则不达。做实验,就是要心静。
今天把系统调整至原状态,希望一切顺利。 |
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f**********r 发帖数: 18251 | 46 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
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范博做完实验回office,实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭,只见他老板Dr. 胡,手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基,走了进来
。范博向他作揖,坐下。Dr. 胡道:“我自倒运,把个博后位置给与你这现世宝 ,历
年以来,不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德,带挈你中了个PLoS ONE ,我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声,叫rotation student把柱和培养基收起来,在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换m... 阅读全帖 |
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f**********r 发帖数: 18251 | 47 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
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范博做完实验回office,实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭,只见他老板Dr. 胡,手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基,走了进来
。范博向他作揖,坐下。Dr. 胡道:“我自倒运,把个博后位置给与你这现世宝 ,历
年以来,不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德,带挈你中了个PLoS ONE ,我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声,叫rotation student把柱和培养基收起来,在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换m... 阅读全帖 |
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b*****d 发帖数: 7166 | 48 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
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发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 23 13:33:06 2014, 美东)
范博做完实验回office,实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭,只见他老板Dr. 胡,手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基,走了进来
。范博向他作揖,坐下。Dr. 胡道:“我自倒运,把个博后位置给与你这现世宝 ,历
年以来,不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德,带挈你中了个PLoS ONE ,我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声,叫rotation student把柱和培养基收起来,在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换medium。Dr. 胡又吩咐范
博道:“你如今既中了PLoS ONE,凡事要立起个体统来。比如我这行事里,都是些正经
有脸面的人,又是你的同事,你怎敢在我们跟前装大?若是实验室门口这些提质粒的,
养老鼠的,不过... 阅读全帖 |
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A**e 发帖数: 1388 | 49 培养的细胞,在高倍镜下发现小黑点,不多,但是仔细观察这些小点在动,同时培养基
没有混浊,细胞形态影响不大。
查了一下,好像是一种叫“黑胶虫”的东西,不知道英文名字是什么。说是国内实验室
感染这种东西的很多,所以想请教一下大家,你们在国外养细胞有没有遇到过这种东西?
这个东西到底存在不存在呢?英文是什么呢?遇到这种问题了,究竟该怎么处理?谢谢
下面是我在网上搜的:
“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物,“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。
“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为
生,并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影
响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重
影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密
度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断,尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死
亡。
目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物,增殖缓慢但对细胞有损害,数量达
到一定程度可引起细胞死亡,其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的
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m****m 发帖数: 395 | 50 膜蛋白难表达是很正常的事。
先把各种可能性一一排除,然后确定原因。各个击破。一次改变一个条件,一次解决一
个疑问。
关于测序的事,如果可以的话,还是想想办法做一下。
先从涂板开始,每个菌落小量摇菌,检测质粒的存在,还有生长活性。标记好有质粒的
菌,挑选最有活力的菌进一步做表达蛋白,有几个问题需要解决:OD生长到多少的时候
开始换培养基最好?(一般是对数生长期吧,不过自己也可以试一下在不同生长期)。
更换培养基后,多久以后开始诱导?(我一般是1个小时以后,不过你可能不同,要试
一下)。分几个不同的温度进行诱导(更换培养基后就用这个温度)、诱导多久后膜蛋
白表达量最高?(这个就要麻烦你要每隔一段时间取点菌去测一下有没有蛋白了)最后
决定最佳诱导温度和时间,还有你说的IPTG量的问题,也可以试一下,抗生素的浓度也
要控制好,太高菌就不长了,太低么要长杂菌。最后裂解细菌,看你用什么方法了,裂
解完离心后膜蛋白有可能在上清液里,也有可能在PELLET里。确定这个以后,就可以开
始纯化了。总之每个步骤都要严格监控,别把蛋白弄丢了。
小小建议呈上,希望对你有所帮助,祝你成功~ 实在不行,最后可以去做 |
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