s******y
发帖数: 28562 | 1 其实还好。虽然扫描的时候时间很长，但是扫一次就完了，不像胶片如果
第一次曝光时间不对的话还得再曝几次。还有一点是如果用化学荧光法的话
一般必须在20分钟内完成，否则荧光就开始衰减了就不准了，但是Licor 就
没有这个问题。
不过，胶片不会被完全代替的，有些放射性显影(H-3, C-13)还是必须用胶片。
antibodies.
make
run |
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g*********5
发帖数: 2533 | 2 定量是licor的长处。因为是二抗直接带的荧光，不需要显影，
线形很好。
with
use
.
range |
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a******a
发帖数: 283 | 3 文献上查到的材料说我用的这个病毒株在细胞里的蛋白合成比其他的要少（但是他们用
的是pulse label然后跑胶显影得的结果）；我们用western blots的话，发现实际上感
染了这个病毒株的细胞里的病毒蛋白远远要比其他的多。现在问题是，需不需要重新做
其他组做过的pulse label的试验。我的意见是，我们有逻辑的数据分析（qPCR数据证
明该病毒株感染后细胞内的病毒dna也比其他的要多很多），所以没必要做那个试验，
但是老板的意见是一定要做这个试验。我认为是浪费时间。因为有其他的问题更需要回
答。
有经验的看看，这种情况有没有可能？就是学术讨论以下。谢谢。 |
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s********r
发帖数: 312 | 4 佩服楼主的精神，但这篇文章让我读的悲从中来。WB应该算是生物实验中倒数第二简单
直白的了，倒数第一的是常规的subclone。
当时我在国内读硕士的时候也是一样，什么试剂都没有，自己配buffer，洗玻璃板，配
胶，那破玻璃板还漏，一上午有时候都配不好一块胶，用那种几百块钱的破抗体，买来
之后马上分装好，每个人分那么一丁点，自己的用完了要到处看人脸色借，自己配显影
液定影液，有时候要在暗室里等半个多小时才能看到条带。cloning也是一样，稍微稀
有点的酶都要去隔壁借个几微升回来，感受态细胞自己做，PCR也是连个kit都没有，提
质粒自己配buffer。
楼上有些人说的对，试剂钱是省不下来的。我整个硕士都在纠结这些trouble shooting
，各种做不出来跑不出来，老板指着鼻子说你们这些人分子生物学都是弱智。后来拿到
master赶紧跑路来美国读PhD,前几个月做这些都有心理阴影,洗膜曝光的时候都神经兮
兮的，生怕做不出来。结果WB和cloning怎么做怎么有，慢慢的才对自己恢复了信心。
现在看的那些细胞分子方面的paper，western都是一堆一堆的，cloning更是直接带... 阅读全帖 |
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b*********h
发帖数: 951 | 5 多谢多谢！
常规的染色就可以了吗，是否需要额外步骤？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 6 在染完色之后，有些人会把胶泡在atufluor imaging enhancer solution
来改变胶体的结构，从而有利于放射线的穿透，对于某些比较弱的条带会有好处。
最后注意要把胶抽干，否则胶不够薄的话会有重影。
把胶抽干的时候，最好放个滤纸，然后在另外一面放个半透膜
如果不放滤纸的话，胶抽干后容易裂开。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 7 嗯，就是普通染色，然后干胶。我喜欢用cellulose膜，小心不要裂了。
找几个很暗的荧光标签贴上帮助定位。楼下说-80冰箱的，我也试过，
没啥大影响。你去facility看看有没有那种digital不要film的develop,
这个能快很多。我有一次放上film扔抽屉一个多月都快忘记了 |
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z********8
发帖数: 818 | 11 fuji这款仪器很好，比odyssey敏感多了，几乎和底片曝光差不多。
我们用的是nc膜，所以没有脱水的担忧，效果非常的好。
odyssey我们也有，但不用。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 12 p-PDK和PDK用得不是同一个抗体,不同抗体质量差距太大了, 强弱不能简单的比较
一般做pProtein/Protein都是先p在strip做总的,像你这种情况的话,我的建议是
parallel 跑两块一样的胶,一块做pPDK一块用个强一点的Femto显影做PDK就行了
至于AKT和P-AKT,我用过cell signaling 的p-AKT具体哪一个忘记了,band非常specific
.
另外二抗用的太高浓度了, 一般条带出不来,提高二抗是没有用的,反而会增加背景或者非特异性的条带
普通ECL的话,二抗我都是1:10000-20000 |
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D*a
发帖数: 6830 | 13 southern是第一个搞出来这些转膜啊显影的吧，其他就是顺着他的名字往下说了呗。如
果他叫Green，western今天说不定就叫Blue了哈哈 |
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c****9
发帖数: 95 | 14 因为周末加假期，western blot做到最后没有暗室钥匙去完成最后一步。现将洗过的膜
放在WASHING BUFFER里面存在4度的冰箱里面，请问这能最多保存几天呢？是否会影响
最后的显影呢？谢谢各位解答。急。 |
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l******g
发帖数: 1145 | 15 最近中心新买了一台，没人用过，现在刚开始摸条件。
原来wb用hrp的二抗，通常条件是一抗4度过夜，洗30分钟，二抗1：5000或10000一小时
，洗30分钟，然后ECL显影。
现在打算摸下萤光二抗的浓度，除此之外，一抗的条件和洗膜的条件也需要调整吗？
求任何tips！ |
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T**********2
发帖数: 38 | 16 曾经银染过测序胶的路过。
手工测序，制胶、跑胶、显影（同位素或非放）都不是问题，真正难的是读序，尤其是
读到密集的地方，有时还有band compression, G4 trap等。一个反应要读出尽可能长
的序列，往往读花了眼。 |
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T**********2
发帖数: 38 | 17 曾经银染过测序胶的路过。
手工测序，制胶、跑胶、显影（同位素或非放）都不是问题，真正难的是读序，尤其是
读到密集的地方，有时还有band compression, G4 trap等。一个反应要读出尽可能长
的序列，往往读花了眼。 |
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g****s
发帖数: 1755 | 18 好文要顶，虽然文字有点偏激但确实是好文。
我自己算是做了将近10年的anticancer,如果在我自己身上发现cancer/tumor我不会选
择任何现在的药物；如果是实体瘤我会选择手术，如果是非实体瘤手术也不要做。
1，药物研发很有点“本末倒置”的味道，一个化合物能否成药，先在动物身上试试效
果以及毒理，几百美元就差不多的成本；为什么非要体外、蛋白、通路乱搞一堆砸了几
百上千万之后再体内动物呢呢？就为了能发文章？Pfizer的抗生素Linezolid主要研发
在1990s,于2000年正式经过FDA批准上市，上市8年都不知道到底作用靶点是50S亚基上
的哪个蛋白，直到2009年才有第一个XRay确认的作用靶标蛋白。
2，任何药物，任何化合物在体内生物起效和代谢过程都不仅仅是个别Pathway的过程；
又回到上面说的，弄个通路可以发文章。Western-blot原本是用类似TLC和显影的方法
把小分子和蛋白结合再现出来，但用来用去又有多少人真正相信WB的结果呢？虽然WB是
生物类文章必备的一道坎儿，但我并不相信WB就真的证明药物分子和作用靶点完好结合
并发挥药物作用。
3，Tumor和... 阅读全帖 |
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c****u
发帖数: 584 | 19 demo 过bio-rad. syngene Gbox, 和UVP. 都不错。sensitivity 赶上film. 而且
sequential 曝光非常方便。Bio-rad 的software 做的最好。但是 syngene的camera
和镜头好。最后定了个syngene pxi6.
Li |
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r******k
发帖数: 446 | 22 做western的时候 用biorad的显影仪器调了一下对比度 把background 减少了一些。
这样算吗？ |
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r******k
发帖数: 446 | 23 做western的时候 用biorad的显影仪器调了一下对比度 把background 减少了一些。
这样算吗？ |
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M*******C
发帖数: 183 | 24 以前我们用ECF底物，strip用0.2N NaOH 就好了。
现在ECF 买不着了，改用ECL plus，Thermo Fisher/Pierce （32132）的，发现用NaOH
没法strip了，第一次blot的带仍然在那里。 看了ECLplus 的说明书，他们叫用
Thermo Scientific™Restore™ Western Blot Stripping Buffer (
Product No. 21059) 或者Restore Plus Western Blot Stripping Buffer (Product
No. 46430). ， 价格 500ml/$130, 太贵了，strip 一张膜得10ml 吧，500ml 50张膜。
不知道成分是什么，想自己配点，求各位指点！谢谢 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 27 用个两三次没什么问题
而且不管用什么stripping buffer， 用ECL的都要考虑把target 蛋白的位置错开，如
果不能错开的话还是分开做
尤其是ECL plus或者用pierce的dura/femto， 很容易就把膜烧坏了
而且最好rabbit 和 Mouse的抗体轮换做，这样interference 会小很多 |
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M******g
发帖数: 152 | 28 you can try 0.1 M glycine pH2.5 to strip the membrane 15 min twice. |
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h******y
发帖数: 351 | 29 How To Make Your Own ECL
ECL can be an expensive reagent in a lab, and what with it being involved in
the final stage of a western blot, it’s something you don’t want to have
to worry about too much. During my PhD, I was struggling with my western
blots for ages – it seemed I was doing everything right, I just wasn’t
getting any signal in the dark room. At the time I was using a pre-made ECL,
and a friend that I shared lab space with suggested I try her home-made
brew. I was sceptical at first, ... 阅读全帖 |
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M*******C
发帖数: 183 | 30 请问你用glycine PH 2.5之后，是水洗还是PBS/TBST之类的洗？
我看见网上一个类似的protocol，他们要PBS, TBST洗很久，这样strip耗时很长啊，不
知道有没有必要？ 以前我们NAOHstrip后，清水洗2min就好了。
http://www.abcam.com/protocols/western-blot-membrane-stripping-
Mild stripping
Buffer, 1 L
15 g glycine
1 g SDS
10 mL Tween 20
Dissolve in 800 mL distilled water
Adjust pH to 2.2
Bring volume up to 1 L with distilled water
Procedure
Using a volume that will cover the membrane, incubate at room
temperature for 5–10 min.
Discard buffer
Repeat incub... 阅读全帖 |
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M******g
发帖数: 152 | 31 After glycine 0.1 M pH2.5 striping twice, I normally just use TBST to
briefly rinse the membrane twice, and use 5% milk or 3% BSA to re-block the
membrane. |
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M*******C
发帖数: 183 | 32 今天试了我上面发的那个配方，
strip 5min/5min/洗。。， 不work， 以前的带还在，很强。
strip 10min/10m/洗。。。， 膜变的花了，新的带很弥散，没法看。
还得继续摸索
the |
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M*******C
发帖数: 183 | 33 请问你strip twice，每次几分钟？
the |
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M******g
发帖数: 152 | 34 2x strip, and each one for 15 min at room temp. make sure the pH of the 0.1
M glycine is below 2.5.
It works for me most of time. It is inexpensive and each to make. I
normally make a stock solution of 1 M glycine pH 2-2.5. |
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s******y
发帖数: 28562 | 35 自从自己的实验室建立起来，我们一直是混用胶片和Oddysey的。我自己是两者都用。
我的学生和博士后们是个有个的偏好。
但是，今天那个维护胶片冲洗机的系告诉我说他们打算不再保留那个冲洗机了，因为用
胶片的人越来越少，而且那台机器越来越老，已经没有保留的意义了。
我听了有点震惊也有点不知所措。因为我已经用了10几年胶片了，已经习惯了拿着胶片
在上面写写划划，对着光和学生讨论带的强弱，以及把胶片作为一个原始数据放在实验
记录本，等等这类的行为。虽然我也用Oddysey，但是总觉得一个旧的习惯如果没有必
要就不需要打破。
但是，今天到了一个我需要重新选择的时候了。如果我真的坚持一定要用胶片的话，我
可以一狠心自己买一台来给自己用。但是我又询问自己到底要不要这样做？在大部分人
都不再用胶片的情况下，我有没有必要念念不忘？
其实我唯一真正需要用胶片的情况是做放射显影，但是其实这种情况一年都做不到一次
，而且如果真的需要的话我们应该是可以到医院里面用他们那台机器的。但是我总觉得
一个数据只放在计算机里的话总觉得不够正式，总是喜欢拿一个真正的东西放在手里。
而且，Oddysey如果做起来不小心的话会... 阅读全帖 |
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b*****s
发帖数: 169 | 36 胖老师，前阵子有个中国人到我们实验室推销他自己发明的显影装置，只要2500刀。这
个设计很简单的，就是一个数码相机带大光圈的定焦镜头，前面套一个非常长的类似于
遮光罩的东西。因为当时没有WB实验，没有试试效果怎样。感觉应该很实用的，我找到
他的名片后告诉你联系方式。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 37 自从自己的实验室建立起来，我们一直是混用胶片和Oddysey的。我自己是两者都用。
我的学生和博士后们是个有个的偏好。
但是，今天那个维护胶片冲洗机的系告诉我说他们打算不再保留那个冲洗机了，因为用
胶片的人越来越少，而且那台机器越来越老，已经没有保留的意义了。
我听了有点震惊也有点不知所措。因为我已经用了10几年胶片了，已经习惯了拿着胶片
在上面写写划划，对着光和学生讨论带的强弱，以及把胶片作为一个原始数据放在实验
记录本，等等这类的行为。虽然我也用Oddysey，但是总觉得一个旧的习惯如果没有必
要就不需要打破。
但是，今天到了一个我需要重新选择的时候了。如果我真的坚持一定要用胶片的话，我
可以一狠心自己买一台来给自己用。但是我又询问自己到底要不要这样做？在大部分人
都不再用胶片的情况下，我有没有必要念念不忘？
其实我唯一真正需要用胶片的情况是做放射显影，但是其实这种情况一年都做不到一次
，而且如果真的需要的话我们应该是可以到医院里面用他们那台机器的。但是我总觉得
一个数据只放在计算机里的话总觉得不够正式，总是喜欢拿一个真正的东西放在手里。
而且，Oddysey如果做起来不小心的话会... 阅读全帖 |
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b*****s
发帖数: 169 | 38 胖老师，前阵子有个中国人到我们实验室推销他自己发明的显影装置，只要2500刀。这
个设计很简单的，就是一个数码相机带大光圈的定焦镜头，前面套一个非常长的类似于
遮光罩的东西。因为当时没有WB实验，没有试试效果怎样。感觉应该很实用的，我找到
他的名片后告诉你联系方式。 |
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b*****2
发帖数: 94 | 39 我们有BioRad 的 ChemiDoc imaging system. 我以及周围用过它的人多数不太喜欢用
它来做western blot的显影。很多时候，尤其是对信号不强的条带，还是胶片的结果更
可靠。无关潮流，唯求质量。 |
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h****n
发帖数: 2552 | 40 一直想换，但是遇到过有些不怎么样的抗体不用胶片根本显影不出来。所以问下大家有
没有这方面比较的经验？ |
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g*********5
发帖数: 2533 | 41 这样行不行？细胞培养加入同位素标记的核糖核酸。
裂解细胞，用这种蛋白的抗体做IP, 跑胶，干胶，放射自显影。 |
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l*****D
发帖数: 41 | 42 导师简介：
蒋先兴(Xianxing Jiang)，男，博士，教授，博士生导师。中组部第十一批“千人计划
”青年人才入选者，中山大学“百人计划二期”杰出青年引进人才。迄今为止，在SCI
刊物上已发表论文40余篇，其中作为第一作者及通信作者在Chem. Rev.，J. Am. Chem.
Soc.，Angew. Chem. Int. Ed.等国际知名刊物上发表论文24篇，到目前被SCI 引用
1200余次，最高单篇被引用162次。已申请国家发明专利5项，美国专利1项，已授权2项
。曾施维雅青年药物化学奖（2012 CPA-Servier Young Investigator Awards in
Medicinal Chemistry）；2014年获教育部自然科学一等奖（排名第二）；中科院奖学
金等。
科研方向：
1. 多肽及抗体药物化学生物学研究；
2. 抗体药物偶联体和生物大分子药物的化学修饰和活性研究
3. 蛋白质的特异性修饰和荧光标记及其在细胞显影中的应用
招聘内容: 常年欢迎有下列专业方向或研究背景的博士后，特聘正、副研究员和助理研
究员: 分子生物学，细胞生物学，生物化学，免疫... 阅读全帖 |
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a******r
发帖数: 1464 | 44 http://hai1332.blog.hexun.com/61156383_d.html
胜癌日志（1）：莫怕 [原创 2011-01-29 17:43:32]
小启：癌症，来之突兀，去同鸟飞，且无论高官、平民，富翁、穷人，名星、草根，专
家、医生，在所难免。老夫年届古稀，一向发如黑染，唇同涂朱，身轻体健，感冒小疾
，亦难上身。有谁料到，不病则已，一病便是大病：前列腺癌骨转移晚四期！连老生都
在劫难逃，其他人等，可想而知。
“既来之则安之。”癌症是美帝、小鬼子，怕者死无疑，抗者生有望。战略藐
视：欺软怕硬，外强中干，纸老虎；战术重视：无恶不作，置人死地，真老虎；胜癌原
则：周总理也是前列腺癌，然毛主席在周总理治疗专家组上呈的报告上，作出的“不手
术、不化疗、不放疗，加强调理，加强营养”批示（当时称之最高指示，理解的要执行
，不理解的也要执行，在执行中加深理解），至今没有过时。故手术、放疗、化疗、介
入、穿刺、活检等“杀敌一百自损一千”的“速死”医法，一概拒绝，坚持西医检查、
治标，自癌自药、求本。
中西并举，历时两月余，至2010.10.08经武汉大学... 阅读全帖 |
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F*I
发帖数: 2896 | 45 （59）历史经常做出弃珠宝而留窝头的选择，这是不需要讲什么道理的
从表面上看，母亲不适合在医院工作是她个人的行医方式与她所在医院的运作方式
相冲突，父亲把这归于我母亲的个性原因。近半个世纪过去了，历史的显影作用如今呈
现出来的却是这一事件中两种医疗方式的必然冲突。母亲当时不一定能意识到中西医矛
盾的实质，她凭的是感觉，她考虑的不是工资、名利、地位，而是要让中医得到施展。
她离开大医院的做法当时可以说无人理解，我小时同我父亲一样，认为我母亲幼稚、愚
昧。
母亲脱离医院，远离社会主流的做法，使她相对保留了一些不曾被冲击的中医传统
的行医方式。这使我今天对比母亲能看出现代中医与传统中医的差异来。严格说来，当
今的许多中医已偏离中医轨道不能称其为中医了。好多从中医药大学毕业的人，当他面
对病人时，眼睛里反映出来的不再是阴阳五行的人，而是一个生物的、解剖的人。所以
，他们是使用中药的西医，而不再是传统意义上的中医。
为振兴传统文化而振兴传统文化之路我认为是行不通的，必须得依托一些有实际用
途的东西才行，比如中医。西方文化虽有弊病，但其眼前的实际用途是它得以存在的现
实基础。人类的进化是要轻装上阵... 阅读全帖 |
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s**********a
发帖数: 1277 | 46
Doctor，又来打扰你，我的问题实在太多了，哎。我今天月经十一天做了输卵管造影，
右侧曾经有过宫外孕的输卵管通畅，左侧完全不显影。16个月前我在国内做的造影还是
左侧通畅，右侧狭窄。后来在医院做了导丝介入术，那个医生说做导丝的时候发现左边
阻力很大，右侧反而还好，他就在左边多疏通了几次。我现在想是不是因为这个，导致
左侧感染堵塞了。请问有什么药可以治疗输卵管的么，这里的医生让我明天就可以开始
试孕，我一是怕宫外孕，一是怕怀孕几率小了，靠右侧这个得过宫外孕的输卵管，我心
里一点底都没有。 |
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j***h
发帖数: 4412 | 47 十分罕见！中国官媒炮轰温家宝缓核政策
旺报 2011-03-18 20:19:21
大陆官媒新华社和隶属中国国家广播电影电视总局的国际在线，昨天引述学者意见
，抨击国务院
总理温家宝放弃发展核电的决定，是非理智之举、因噎废食，如此公开炮打中央的作法
，十分罕见。
因应日本福岛核灾发展情势，大陆国务院总理温家宝16日召集国务院常务会议，决
定全面安检大
陆核设施，同时加紧编制核安全规画，调整核电发展中长期规画。
60余核电机组将陷停摆
温家宝指示，在核安全规画批准前，暂停审批核电项目(包括已展开前期工作的项
目)。
《21世纪经济报道》指出，知情人士表示，核安全规画需要在1-2年方能出台。以
中国每年开工
8台机组来计算，温家宝的裁示，让建设周期因此延后的核电机组可达16台，总投资可
能超过2000亿
元。
加上中核集团、中广核集团、中电投集团，和华能集团，合计有高达60余核电机组
前期审批作业
和筹建工程陷入停摆。
以每台二代改进型核电机组投资约120亿元(人民币，下同)，上述60多个项目中有
些还采用了其
它投资更高的核电技术，总投资将可能在8000亿元以上。
英国《金融时报》... 阅读全帖 |
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r******t
发帖数: 8967 | 48 曝光显影不足还是最常见的。加长曝光时间？调整Developer的浓度和温度？ |
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w********h
发帖数: 12367 | 49 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: wsnonline (卫所南次郎-做人要厚道，约泡自带套), 信区: Military
标 题: 揭秘“千人计划”:那令人垂涎的邀约背后
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Nov 16 15:07:52 2014, 美东)
新闻来源: 南华早报 于 2014-11-16
几年前，理论物理学家莱昂哈特得到华南师范大学重金邀请担任教职，但双方的合作并
不顺利。
2011年，理论物理学家乌尔夫?莱昂哈特（Ulf Leonhardt）在中国开会，间隙期间
在一间酒店房间里，拿到一份好到无法拒绝的要约。华南师范大学光及电磁波研究中心
向他发出邀请，每年在该中心驻留3个月，每月向他支付133,333元人民币的报酬。这是
他在英国圣安德鲁斯大学（University of St. Andrews）终身教职收入的三倍。
莱昂哈特是理论物理学界的著名学者，对隐形斗篷理论框架的概述曾引起极大关注
，丝毫不用担心自己的职业前景。但广州发来的这份要约恰逢其时：当时他为了出访和
邀请访客，正苦于筹措资金。而中国对科学领域的巨额投入也开始取得回报... 阅读全帖 |
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m****8
发帖数: 419 | 50 (三)生物效应’
当X射线照射到生物机体时，生物细胞受到抑制、破坏甚至坏死，致使机体发生不同程
度的生理、病理和生化等方面的改变，称为X射线的生物效应。不同的生物细胞，对X射
线有不同的敏感度。枫X射线可以治疗人体的某些疾病，如肿瘤等。另一方面，它对正
常机体也有伤害，因此要嘞人体的防护。X射线的生物效应『臼根结底是由X射线的电离
作用造成的。 由于X射线具有如上种饿!因而在工业、农业、科学研究等客_爪领域，获
得了广泛 的应用，如工业探伤，晶体分析等。在医学上，X射线技术已成为对疾病进行
诊断和治疗的专门学科，在医疗卫生事业中占有重要地位。
三、X射线在医学中的应用。
(一)X射线诊断
X射线应用于医学诊断，主要依据X射线的穿透作用、差别吸收、感光作用和荧光作用。
由于X射线穿过人体时，受到不同程度的吸收，如骨骼吸收的X射线量比肌肉吸收的量要
多，那么通过人体后的X射线量就不一样，这样便携带了人体各部密度分布的信息，在
荧光屏上或摄影胶片上引起的荧光作用或感光作用的强弱就有较大差别，因而在荧光屏
上或摄影胶片上(经过显影、定影)将显示出不同密度的阴影。根据阴影浓淡的对比，结
合临床 |
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