m*********r
发帖数: 59 | 1 石马队真是一个美丽的地方啊。所以朕留着以后再说。
回到县城去。我们住在中学的宿舍楼里。哥哥六岁？趴在桌子上看文
汇报。朕不懂那么高深的文章，朕蹲在门口用粉笔往地上写字。
外公在中学里上很多种课。语文英语和历史。天啊，外公居然还上过
英语课。朕没听过他说一个英文词。外公有时候出去开会，回来就给
朕买棒棒糖。是现在圣诞节拐棍形状的那种红白条的棒棒糖，不是一
根棍子顶着个糖球。如果哥哥不在家朕就用外婆洗菜的竹箕把糖扣着。
他们都说，你和你哥真好呀。
星期天县城里赶场。农民卖的东西在篮子里，篮子搁在地上。朕喜欢
搁在地上卖的东西，连朕都看得见。杂七杂八的，半篮子鸡蛋，半篮
子四季豆，五个小南瓜，两只捆住了脚的鸡歪在篮子边。一摞花瓣还
新鲜的向日葵盘。背兜也搁在一边，里面睡着小孩。竹子编的各样用
具，洗菜的，唰锅的，晒米的，草帽草鞋。
卖茶水的老太太在供销社门口设摊，褐色的茶水在玻璃杯里，上面盖
着一片正方的玻璃片，矮杯子一分钱一杯，高杯子两分。炒葵花在白
布口袋里，五分钱一碗。蚕豆凉粉的摊儿是要排队的，豆青色的凉粉
盛在搪瓷盆里，搭着湿毛巾。切成丝，码在碗里，佐料洒上去，油海
椒和醋要多 |
|
c****i
发帖数: 2635 | 2 视频。。。
如果说言语沟通上有问题的话，其实还可以从肢体语言来看。
2'30"，从此开始主持人面对求职者经常性保持抱胸的姿势——这个最基本的解释就是防御。
3'：手指点求职者，攻击性而且比较不太文明的攻击性方式。
同一个主持人，面对老总的时候，身体姿势是放松和放开的。
老总们，比较欣赏灭灯后说放弃的那两个，其他的多少都面对着少年人忽然自己也变小孩了，搞得来跟高中生打架一样地帮衬主持人。
13'40"，那个捂胸口的，配上人说求职者“假”的评论，实在是本身就很有讽刺性，人不觉得歪歪斜斜地戴一个没玻璃片的黑框眼镜比人家求职的时候站端正点更累么？只许自己装时髦装懂不许人家遵守礼仪么？
国内的公司多如牛毛，很多民企老总简直就是江湖炼出来的流氓，白天人样晚上不定是什么。在那边坐着的没名气的本身来就是为了提升企业知名度的，花钱买媒体买排名的，公司真实的现金流财务帐还不知道什么样呢。
成年后人格定型后去国外生活，跟未成年就去国外，对人的影响是不同的。后者
除非小环境很复杂，基本都比前者要直率单纯得多。 |
|
J****C
发帖数: 1465 | 3 完全同意，特别是那句“白天人样晚上不定是什么”。
反正我认识的里边，就有男的给女老板当面首的，也有漂亮的女干部得到上级赏识大力
提拔的。其实真实情况是怎样用脚趾头都想的出来。
男老肿喝花酒那叫应酬，女老肿跟别人上床那叫公关。
是防御。
小孩了，搞得来跟高中生打架一样地帮衬主持人。
人不觉得歪歪斜斜地戴一个没玻璃片的黑框眼镜比人家求职的时候站端正点更累么？只
许自己装时髦装懂不许人家遵守礼仪么？
是什么。在那边坐着的没名气的本身来就是为了提升企业知名度的，花钱买媒体买排名
的，公司真实的现金流财务帐还不知道什么样呢。 |
|
A****i
发帖数: 5546 | 4 妹儿说的很对.天朝的酱缸文化可以在几年之类把人迅速堕落化.很庆幸我在没有定型的
时候就切了欧洲，虽然现在悲哀的发现我跟好多人想法很不同.
其实人性哪儿都差不多，环境却可以早就一个人.西方国家长大的孩子，也许狡猾奸诈
自私冷酷跟天朝长大的一样，人性的底色却更加纯！
是防御。
小孩了，搞得来跟高中生打架一样地帮衬主持人。
人不觉得歪歪斜斜地戴一个没玻璃片的黑框眼镜比人家求职的时候站端正点更累么？只
许自己装时髦装懂不许人家遵守礼仪么？
是什么。在那边坐着的没名气的本身来就是为了提升企业知名度的，花钱买媒体买排名
的，公司真实的现金流财务帐还不知道什么样呢。 |
|
j******n
发帖数: 21641 | 5 我外行
测序是很低级的活么
记得那阵子人类基因组活泼的时候
有次去北京的火车上听邻铺的一个老头吹
他是浙江一个企业家
跟杨院士很熟
因为他们当时能生产国内唯一符合国际标准的玻璃片(或者其他什么材料的?大概就是取
样用的一个器材)
说有价值几千万甚至过亿元的生意,就冲这测序
，一测序包工头上了院士，也太过分了吧！ |
|
a***w
发帖数: 43 | 6 交大是受了急功近利的害！
2000年左右有个海龟博士后给当时的王书记吹了吹基因芯片如何如何，其实他自己也就是
知道有基因芯片这么个冬冬，王书记一晕呼给了这小子几百万，到现在屁也没放一个。领
导来视察的时候给机器里注点水，然后放个玻璃片在底下印上一些水印就算是基因芯片了
！！ |
|
z*x
发帖数: 46 | 7 清华猥琐男大抵是我们念书时赋予周遭各位学长学弟以及同龄男同学的惯称，事到如今
，再去追究猥
琐男这个词汇的来源已经不切实际，我也很难像北美女总结北美猥琐男那样写出清华男
生的一些共
性。不过我想称呼我校男同胞们猥琐，或多或少是出于对他们所编纂的“清华女生十回
头”的一种报
复。
“女生出了学校总会遇见更优秀的男生，而男生却难遇见比校园里更优秀的女生”，这
句话一直是我的
信条，然而如今，当我也是个一只脚踏入社会的85后老女人，当我离开清华校园也是两
年时光，我却
想大声呼喊，我中意清华猥琐男。
改编下某名句，母校的男生就是你可以怒其不争，却不允许外校任何男女骂他们的人。
清华猥琐男没有360度无死角的笑脸，所以当然不能带去前男友和暧昧小朋友啊的面前
炫耀说，嘿，
我过得很好。更甚者，连和清华猥琐男拍照上传微博都要好好PS，最后还不得不遮住他
们的脸假意神
秘。
清华猥琐男不够时尚，一身运动装，走遍春夏秋。好不容易穿次西服，衣服不合身是小
事，白袜子配
黑皮鞋才叫极富视觉冲击力。
清华猥琐男也许不爱干净，不喷香水不爱洗澡。犹记得念书时，每节栋梁杯后的课，每
个不通风的自
习教室，都曾是我... 阅读全帖 |
|
l********l
发帖数: 148 | 8 哥哥是我的骄傲...
没上小学的时候哥哥会捉知了喂我的小呱呱鸟
从皮筋上掉下来摔到玻璃茬子上是哥哥把玻璃片从膝盖上弄出去的
小学1年级的时候我可以数到好多数了...可是哥哥懂积分符号, 我就不懂...厉害!
小学2年级的时候丢书包吓的我哭着不敢回家...哥哥帮我找回来的
小学3年级的时候我是小报童暑假负责送报纸...老师说了.某同学家在东边然后
向南, 可是那边是东呢? 哥哥知道!
小学4年级的时候哥哥大一了! 班上就只有我的哥哥是大学生!
牛吧...哥哥懂与非门, 费劲心思解释了老半天...我总是神往的拼命点头
小学5年级的时候没啥事, 心肌炎, 老老实实的呆在家里..哥哥讲百慕大的故事
小学6年级的时候考重点高中, 不敢去看榜, 我哥哥看的...虽然吓唬了我一通,
但还是考上了莫
中学的时候6.4哥哥说学生的作法是对的..他也要去北京看看..我的理论,
在爸爸和哥哥的理论相冲突的情况下, 哥哥永远正确! 哥哥就是牛牛的!
中学的时候跟哥哥一起打计算机游戏总是哥哥赢. 然后他每天早晨上班前
我藏起来的他的那一只袜子他总是能找到.
然后就 |
|
|
k********y
发帖数: 111 | 9 我觉得大成华天不错，地址在五一路上，平和堂对面，最繁华地段 ，去哪里都很方便
。内部比较新，价格不太清楚，一两百？
吃的推荐，如果你住大成华天，他的美食街不错，糖油粑粑最好吃，我觉得长沙最好吃
的（如果你知道糖油粑粑是什么的话）
徐记海鲜，很多分店，整体水平不错，价格合适，服务周到，每个菜都很好吃，我最爱
吃他家的碳烤生蚝，五块一个？吃湘派海鲜的好去处。
还有就是好食尚，更爱八一路那家，经常送消费券，超值的。有很多有特色的新湘菜，
我最爱0731鸡煲，麻酱生菜和扬州猪脚？玻璃片也很好吃。说得我自己也想回去吃，
good luck. |
|
G******2
发帖数: 71 | 10 盐城自古产盐，故名盐城。不过这茫茫的雪花盐，并没有带给我们太多富足。扬州城
大盐商们挥金如土的画卷中，也几乎从未出现幸苦晒盐人的身影。我几乎是纯粹的苏北
人了，记得当年父亲还留着一块木头牌子，上面用毛笔写着好几代的祖宗。据说祖上兄
弟二人做官而来，后来人丁稀薄，到现在，几经风波，族谱已经无法再续上了。母亲祖
上是苏州阊门迁过来的，好像舅舅那边还有一起集体祭祖的，不过我从来没见过。我母
亲告诉我是好几百人，挂了祖先的像，烧纸，祭拜，然后一起吃饭。真想看一看。
盐城其实也是个老城了。父亲在世的时候，经常给我们讲以前的故事。以前日本鬼子打
进来的时候，拿老盐中做了司令部。鬼子在城里希望建立自己的良好形象，每天那个鬼
子头，骑着大洋马，给四周的小孩发糖。当时还有基督教徒，去教堂听牧师讲课，可以
分得美国的面粉或者大豆子罐头。当时有个傻子，也去了。牧师讲完课，大家要一起和
牧师说：我爱耶稣，耶稣爱我。结果傻子居然说成了：我爱耶稣，耶稣给我擦屁股！到
最后，有没有面粉和罐头，就不知道了。
盐城人讲究洗澡，过去条件不好，只能在公共浴室洗澡。男人们洗澡是比较奢侈的，有
洗，泡，搓，敲背，全部是男性服务... 阅读全帖 |
|
m*****p
发帖数: 72 | 11 我从小就喜欢天文，自己还邮购了一个望远镜，
白天可以看太阳黑子，晚上可以看月球环形山，
著名的哈雷彗星来的时候，我还起了好几个大早去太原附近的
山上看，结果什么也没有看到。
后来一年暑假，我听说太原市少年宫招天文短训班，就去报名了。
还要考试，我把各种天文知识背的滚瓜烂熟，那时第一次见到
贺老师，很瘦。没有考天文知识，就是问问为什么来学习。
后来发榜的时候，我来回找，没有找到我的名字，回家大哭了一场。
我的一个亲戚认识少年宫里的人，还是把我塞进去了。进去后，一问，
没有一个是参加考试进来的，都是托关系，我昏倒。
在短训班很好，有各种各样的望远镜，贺老师也给我讲很多天文知识。
很快就随着暑假结束了。
那时有了著名的日环食，我给贺老师发信，想去天文组观测，但是迟迟
没有回音，我只好和广大非天文爱好者一样用墨水涂的玻璃片观测了。
在日环事结束的那天，我收到贺老师的信，让我去天文组观测，可惜已经
晚了。但是就这样，贺老师让我参加了少年宫的长训班。 |
|
he
发帖数: 2025 | 12 五寸管的手枪，没法打猎，真去了林子，鹿啊野猪啊都得笑话我。
就当个额外保险，不贵，当初我估算枪弹消耗时明确指出: 比玩玻璃片便宜多了!
夏天的时候差一点就搬家到圣地亚哥了，没想到最后阴差阳错来德州，只好入乡随俗改
变烧钱方向。 |
|
|
c****i
发帖数: 2635 | 14 去看了下视频。。。
如果说言语沟通上有问题的话，其实还可以从身体语言来看。
2'30"，从此开始主持人面对求职者经常性保持抱胸的姿势——这个最基本的解释就是防御。
3'：手指点求职者，攻击性而且比较不太文明的攻击性方式。
同一个主持人，面对老总的时候，身体姿势是放松和放开的。
老总们，比较欣赏灭灯后说放弃的那两个，其他的多少都面对着少年人忽然自己也变小孩了，搞得来跟高中生打架一样地帮衬主持人。
13'40"，那个捂胸口的，配上人说求职者“假”的评论，实在是本身就很有讽刺性，人不觉得歪歪斜斜地戴一个没玻璃片的黑框眼镜比人家求职的时候站端正点更累么？
国内的公司多如牛毛，很多民企老总简直就是江湖炼出来的流氓，白天人样晚上不定是什么。在那边坐着的没名气的本身来就是为了提升企业知名度的，花钱买媒体买排名的，公司真实的现金流财务帐还不知道什么样呢。
成年后人格定型后去国外生活，跟未成年就去国外，对人的影响是不同的。后者
除非小环境很复杂，基本都比前者要直率单纯得多。 |
|
x*r
发帖数: 11073 | 15 嗯，基本同意你的观点，我和LD对那个主持人和节目现场的布置安排都不太喜欢。但是
小女生的心理也是有点问题的，一个巴掌拍不响，如果我是那小女孩，我才不在那里跟
他们斗嘴皮子损自己形象还浪费时间和精力，我直接就下台走人了......
我更喜欢看职来职往，从主持人到各位达人还有那两位老师我觉得整个节目的质量要比
这个非你莫属高多了，节目的名字也起的更有水平一些，哈哈:D
是防御。
小孩了，搞得来跟高中生打架一样地帮衬主持人。
人不觉得歪歪斜斜地戴一个没玻璃片的黑框眼镜比人家求职的时候站端正点更累么？
是什么。在那边坐着的没名气的本身来就是为了提升企业知名度的，花钱买媒体买排名
的，公司真实的现金流财务帐还不知道什么样呢。 |
|
c*********l
发帖数: 1065 | 16 果粉这智商果然。。。。
按这么说米帝这么强的电子工业实力，早该把尼佳蔡莱秒得渣都不剩了吧？
还是果粉认为镜头就是块有机玻璃片？
果粉不会以为苹果的广告宣传照片poster都是用ip照得吧？
好点的大光圈头随便都能买一打ip/安猪了知道不？
LOL |
|
I*******0
发帖数: 602 | 17 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】
发信人: Iaodaye10 (Iaodaye10), 信区: PDA
标 题: Ipad Air问题汇总
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 1 18:49:17 2013, 美东)
1.确实比之前的牛排轻了很多，但是单手持握还是会很累
2.屏幕差评，左侧屏幕偏亮，右侧屏幕偏暗
3.手指按下去，触感有点差，感觉就像在按一层非常薄的玻璃片，不像牛排厚实，用着
很虚
4.卡！手势操作的时候卡顿严重！下了个节奏大师，卡的无法自理！这种感觉就像当初
的牛排三一样！浏览器最多开3个新浪，开多了会卡！
5.信号只能说差强人意，官网宣传的更快速没体验到，但是同样的无线，我的老4S信号
是满格，air只有3格-2格之间
6.开机后自动锁屏，没设密码，之前没用过，所以不知道是不是正常情况，还有无线网
络连接很慢，qq摄像头花屏 |
|
I*******0
发帖数: 602 | 18 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】
发信人: Iaodaye10 (Iaodaye10), 信区: PDA
标 题: Ipad Air问题汇总
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 1 18:49:17 2013, 美东)
1.确实比之前的牛排轻了很多，但是单手持握还是会很累
2.屏幕差评，左侧屏幕偏亮，右侧屏幕偏暗
3.手指按下去，触感有点差，感觉就像在按一层非常薄的玻璃片，不像牛排厚实，用着
很虚
4.卡！手势操作的时候卡顿严重！下了个节奏大师，卡的无法自理！这种感觉就像当初
的牛排三一样！浏览器最多开3个新浪，开多了会卡！
5.信号只能说差强人意，官网宣传的更快速没体验到，但是同样的无线，我的老4S信号
是满格，air只有3格-2格之间
6.开机后自动锁屏，没设密码，之前没用过，所以不知道是不是正常情况，还有无线网
络连接很慢，qq摄像头花屏 |
|
|
r****r
发帖数: 755 | 20 举世瞩目的美国哈勃航天望远镜随发现号航天飞机发射升空，接着又被送入绕地轨道，
揭示宇宙起源及诸多天体秘密。本文记述的，是美国技术人员加工该望远镜核心—主反
射镜的艰难经历。
康涅狄格州某工厂，秋高气爽的一个下午，二十几位身穿冰蓝伞兵服，戴外科手术
口罩的人正全神贯注地站着观察一个不锈钢罐。它有两层楼高，罐内真空度被抽得跟宇
宙星际一样，里面安放一块直径为8英尺的图形玻璃片，造价1500万美元，现在，杰克
·库多克和同事们正张罗着准备为它涂铝。
据说这是最精细的制品之一，它是哈勃航天望远镜的主反射镜，这架望远镜要在
1990年春随航天飞机发现号升天。罗纳德·巴德·里格比，曾整整精心劳动 5年，磨研
抛光这块大玻璃镜。眼下，库多克准备完成最终工作，有生以来他从未感到这么紧张过
。如果他失败，公司就得支付数百万美元维修费。但成功却意味着天文学家们可以观察
到宇宙的起源。
人们认为，宇宙是一百亿年前的比针头还小的宇宙“蛋”爆炸而成的。而且，宇宙
至今还在膨胀。如果我们能够观察到这种大爆炸的详情，天文学家们说，我们就可准确
追溯天地混沌的真象，预知宇宙的未来。
在某种程度上，谁都可以凭肉眼观察到 |
|
z**********e
发帖数: 22064 | 21 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: zhonghangyue (中行说), 信区: Military
标 题: 扫谎打非：敦促潘建伟院士走出迷途（王国文）
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Aug 17 10:42:04 2016, 美东)
http://m.kdnet.net/share-10645022.html
宇筠锋
2015.01.15 09:50 转帖发表在 猫眼看人
（王国文，北京大学物理学院，2014年6月1日）
【概述】
笔者与量子打交道久长（一甲子），对量子真相探究的昔今情况比较了解，包括哲学、
数学、理论和实验方面。自己漫长从容的探索也有所收获，结果可以说，还是拥护爱因
斯坦、玻尔、德布罗意、薛定谔、海森伯、狄拉克、玻恩、盖尔曼、温伯格等不承认有
鬼魅隔空作用。说隔空作用存在，爱因斯坦错了，细查并无确实的实验根据。如今，眼
看量子物理被曲解，科学精神被罔顾，良知被泯灭，纳税人的辛苦钱被糟蹋，有些想法
越来越觉得不得不说。从物理理论和实验两方面考察，有足够理由认为：所谓的非定域
关联（非定域性，隔空鬼魅作用）——“当测量一个粒子时，另... 阅读全帖 |
|
m****m
发帖数: 395 | 22 依旧是铺磷脂膜蛋白的小玻璃片，上次说了第一次用苯洗（大家说可以用丙酮代替），
现在第二个步骤是用甲醇清洗，请问这个甲醇可以用乙醇代替吗？效果会有什么区别吗
？谢谢！ |
|
w*****a
发帖数: 37 | 23 这个你多看看国内生物公司的介绍有时候会写的。
我知道有注册资金70万的，是入股制的，2个大头出到60万，其它小的占小股份。
也知道一个早年米国牛校回国创业的，注册资金100万，以前在罗氏研发部做项目经理的，公司有一个几个人组成的小科研部研发产品。老板看背景应该科研很强的，是个很理想很想创新的人，但无奈国内山寨太多，慢慢所谓的创新也逐渐同类化，实验室环境不太好，防护也比较差，几年了，还是小作坊式。
我知道最厉害的是一个上年纪的已经入外籍的华人，他也是实验室出身，现在回国圈钱，只出技术股，钱全部由投资方出，以千万计。买了N多相对贵重的生物仪器，像模像样的弄起一个十几人的科研团队。
最差的是我陪一个女同事去一个小区参加工作面试，接我们的人转了N个弯才到一个房间，一进去黑呼呼的，看起来像住家的单间，很小潮味也很大，还以为遇到rapist，当那个人把门一关，魂没吓掉，后来镇静十秒种，才看到有传真机是办公的地方，没想到还有2个小屋，里面放着乱七八糟的玻璃片和旧仪器，我还以为进了修电视机的地方，另一个也是顶多十个平米小屋有个女孩在打标签。那个老板说他们是做医院检测包外的，刚跟以前的公司分开，自己单干 |
|
|
s******y
发帖数: 28562 | 25 这种问题应该在工业界早就解决了。
我猜可以用酸刻，也可以用微型探头加热。 |
|
|
|
|
C*******I
发帖数: 151 | 29 可以用光刻在硅晶片上作出来，但费用很高。
找到简单答案也请告诉我一下。 |
|
|
f*******t
发帖数: 596 | 31 你是要做一个还是一排一排啊 据我所知以玻璃为基底很难实现
别的材料还是可以的 |
|
t******t
发帖数: 3045 | 32 没那么麻烦
在白纸上用黑笔画个叉
找个1mm的塑料或者玻璃片，用红笔画个圈
先聚焦到白纸上的黑叉
放上片，再聚焦到红圈，看看要转多少圈 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 33
lamba
烦,
对于这个盖玻片引入的两个问题，
前一个问题,盖玻片对光路的折射的解决方案比较简单,各个显微镜的厂家针对盖玻片的
厚度在光路里放一些修正的东西(具体怎么做可就远远超出我的知识范围了).
但是一开始各个厂家用的盖玻片厚度是不一样的,修正也不一样.这个让做生物的人感到
很混乱很困扰.后来各大厂家就统一规定默认用1.5号的盖玻片,大家都针对这个系数来
修正.这个事情我后面再详细讲两句.
后一个问题,.如果盖玻片两侧的介质的折射系数n的问题, 生物学里的因地制宜的解决
方法就是把两边的介质的n值尽量弄一致. 但是如果万一两边的n值真的不一样怎么办?
这种情况下到底是看样品这边还是镜头那边的n? 我和你的分歧大概就是在这里产生的
. 其实这个分辨率是由样品这边的介质决定的. 盖玻片的另外一边到底是油还是空气还
是水还有到底用什么镜头, 对于系统的真实Airy disk 的尺寸是没有任何贡献的. 也就
是说,假如盖玻片样品的一侧有靠得很紧的两个光斑因为太胖而紧贴成一大团的话,不管
你在盖玻片另外一侧做什么手脚涂什么东西,只要你的系统是线性的话,就不能真的把那
个大胖一团光斑还原成... 阅读全帖 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 34 鉴于有不少人来问我这个关于光学成像的问题，这个我作为一个老用户来说两句我的体
验吧:
1. 对于尺寸比较大的东西,比方说有5个微米那么大的,不管你的样品封在什么介质里，
你爱用什么镜头都无所谓, 因为那个由于镜头引入的偏差对于你关心的尺寸根本就无
足道.但是因为生物成像时要考虑到暴光过度会损伤样品,所以应该尽量用比较明亮的系
统,也就是,首选油镜，来减少暴光时间.
对于特别细微的东西,比方说酵母里面一个endocytic site 那么大小的东西,那就要非
常注意,如果你的样品制备在甘油或者那些常见的mounting medium 里那就用油镜,
如果你不小心是制备在PBS 里,那就尽量用水镜. 对于浸泡在培养液里的活细胞,如果必
须看非常细微的东西的话, 同样推荐用水镜.
至于干镜, 没有特别理由就尽量不要用来做精细成像,除非你们要做自动高通量多孔板
成像,镜头要在不同的孔之间反复挪来挪去, 那就只好用干镜.
2., 要注意你们用的盖玻片的厚度,除非你们的显微镜或者镜头的手册明确指明用
其他厚度,否则必须按默认值用1.5号. 这个事情很多人都搞错.我见过好几个物理出身
的人(但不是... 阅读全帖 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 35 说了这么多,一些不熟悉光学成像的人可能心里嘀咕了,那么我们到底该怎么做才是正确
的? 这个我作为一个老用户来说两句我的体验吧:
1. 对于尺寸比较大的东西,比方说有5个微米那么大的,不管你的样品封在什么介质里，
你爱用什么镜头都无所谓, 因为那个由于镜头引入的偏差对于你关心的尺寸根本就无
足道.但是因为生物成像时要考虑到暴光过度会损伤样品,所以应该尽量用比较明亮的系
统,也就是,首选油镜，来减少暴光时间.
对于特别细微的东西,比方说酵母里面一个endocytic site 那么大小的东西,那就要非
常注意,如果你的样品制备在甘油或者那些常见的mounting medium 里那就用油镜,
如果你不小心是制备在PBS 里,那就尽量用水镜. 对于浸泡在培养液里的活细胞,如果必
须看非常细微的东西的话, 同样推荐用水镜.
至于干镜, 没有特别理由就尽量不要用来做精细成像,除非你们要做自动高通量多孔板
成像,镜头要在不同的孔之间反复挪来挪去, 那就只好用干镜.
2., 要注意你们用的盖玻片的厚度,除非你们的显微镜或者镜头的手册明确指明用
其他厚度,否则必须按默认值用1.5号. 这个事情很多人... 阅读全帖 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 36 说了这么多,一些不熟悉光学成像的人可能心里嘀咕了,那么我们到底该怎么做才是正确
的? 这个我作为一个老用户来说两句我的体验吧:
1. 对于尺寸比较大的东西,比方说有5个微米那么大的,不管你的样品封在什么介质里，
你爱用什么镜头都无所谓, 因为那个由于镜头引入的偏差对于你关心的尺寸根本就无
足道.但是因为生物成像时要考虑到暴光过度会损伤样品,所以应该尽量用比较明亮的系
统,也就是,首选油镜，来减少暴光时间.
对于特别细微的东西,比方说酵母里面一个endocytic site 那么大小的东西,那就要非
常注意,如果你的样品制备在甘油或者那些常见的mounting medium 里那就用油镜,
如果你不小心是制备在PBS 里,那就尽量用水镜. 对于浸泡在培养液里的活细胞,如果必
须看非常细微的东西的话, 同样推荐用水镜.
至于干镜, 没有特别理由就尽量不要用来做精细成像,除非你们要做自动高通量多孔板
成像,镜头要在不同的孔之间反复挪来挪去, 那就只好用干镜.
2., 要注意你们用的盖玻片的厚度,除非你们的显微镜或者镜头的手册明确指明用
其他厚度,否则必须按默认值用1.5号. 这个事情很多人... 阅读全帖 |
|
w*********n
发帖数: 439 | 37 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的， |
|
w*********n
发帖数: 439 | 38 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的， |
|
h******y
发帖数: 351 | 39 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital sec... 阅读全帖 |
|
w*********n
发帖数: 439 | 40 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的， |
|
w*********n
发帖数: 439 | 41 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的， |
|
h******y
发帖数: 351 | 42 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital sec... 阅读全帖 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 43 最简单的办法，就是用parafilm剪一个洞，然后贴在玻璃片上，然后小心的把样品放在
中间的空洞里，然后加mounting medium, 然后封装。
如果你要更fancy 的话，貌似某些公司有一定厚度的spacer 卖。但是我实在想不起是
哪个公司了。 |
|
|
e******u
发帖数: 1854 | 45 一些简单的pattern，有没有customized MEMS之类服务的公司？ |
|
