f******r
发帖数: 96 | 1 我做过用western检测DNP-protein反应ROS production的实验，不知道可不可以做组化
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m***i
发帖数: 2013 | 2 我想确定一个受体在神经细胞的synaptic cleft(post-synaptic)里面的表达情况，
因为没做过相关实验，不知道目前用哪种技术。当然我想最后成像时ｃｏｎｆｏｃａｌ或者电镜应
该用得上。
假设试剂、抗体、设备都没问题，请做过相似实验的牛人指点一下哪种方法比较好，大
致怎么做。或者知道的给个ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ就行。在此先行谢过！ |
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i***l
发帖数: 1656 | 3 我会先做ｃｏｎｆｏｃａｌ immuno fluorescence microscopy
再想看细微的亚细胞结构，或者不同刺激下的Translocation，免疫电镜可能会更好
ｌ或者电镜应 |
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m*********n
发帖数: 215 | 4 Abcam的 anti chicken GFP 抗体，效率极高，我们做免疫组化都是1：4000在用，背景
很干净。 |
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s**********d
发帖数: 1694 | 5 怀孕的可能性可以排除，老鼠分开性别养的，而且不仅是一两只的事情。
老鼠当然没有活四年，是这个colony我们一直在maintain。
环境的因素有可能，但是变量太多了，很难一一排除啊。
enlarged的胃我剪开看了看，里面充满了鼠粮 (yew~)胃壁和肠壁我倒是没有看，回头
再杀一只看看。组化还没有做，一般该怎么染呢，就是H&E? 看哪个组织呢？胃吗？
老鼠体重较同龄野生老鼠比，轻了不少，也不活跃，有haunched。 |
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c****g
发帖数: 93 | 6 我做的是CHO cells， >10个细胞的一个克隆用我的方法基本能看到。一般的细胞及时
体积小点也应该是这个数量级吧。最后有没有clone还是依赖于你的效率，实在没有的
话就转染的plasmids多一些吧，我们一般10k cells/100mm dish，1-2ug plasmid，
48hr之后 add selection pressure。如果有clone，你后续的还要通过免疫组化或
western blot鉴定呢，通常positive的挺多的。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 7 I used some antibodies from abcam to do IHC but I used frozen sections.
I am not sure of paraffin sections. |
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d*****s
发帖数: 647 | 9 Santa Cruz的抗体做IHC最好，一定有阳性结果 |
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d*****s
发帖数: 647 | 12 为了精确，单抗
为了阳性，多抗
实验目的决定实验方法
。 |
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t******n
发帖数: 354 | 14 尽量的保证抗体的浓度和incubate的时间一样 |
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F***d
发帖数: 11 | 15 Yes. You can. It is very easy. Just ask how people in pathology do it. |
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v***a
发帖数: 1242 | 16 没有做出来mechanism，有质量尚可的Western Blot、免疫组化、免疫荧光，共3张图。
主题是发现在一个药物模型中，两个能免疫共沉淀的蛋白的表达均被诱导。前人均无相
关的report。
就想把做的东西发出去，哪怕是一个很小的journal也成。请大家帮忙推荐～ |
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J******9
发帖数: 736 | 17 我很少接触IHC试验，实验室新进一个抗体，老板要求看看阴性、阳性对照的染色情况。
我查询了一下，阴性对照，通常需要做：
1，空白对照（pBS替代一抗）；
2，血清替换对照：同种属动物的正常血清替换一抗；
请问“血清替换对照”，具体怎么做？是不是直接用血清液（原液）添加在组织片上，
或者是需要稀释（用什么稀释？稀释度一般是多少？）
请大拿赐教~！ |
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h*******o
发帖数: 4884 | 18 I think all you need is to include an No-primary antibody control.
For example, you have mouse sections, and your primary antibody is rabbit
anti-mouse
for your sample: dilute your primary antibody in your incubation solution (
normally PBST + 5%-10% horse/goat serum), followed by washing. then your 2
nd antibody will be horse/goat anti-rabbit antibody in incubation solution.
For your control: just use your incubation solution without primary antibody
.
This is particularly important if your pri... 阅读全帖 |
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J******9
发帖数: 736 | 19 谢谢。
另外老板还提到一个阻断这个抗原（比如A）的表达，是用A peptide来检测吗？该如何
处理？跟一般的IHC步骤一样吗？仅仅是将peptide替换一抗？
我完全没有概念，谢谢赐教~！ |
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D*a
发帖数: 6830 | 20 2楼说的是空白对照，没必要用血清对照。反正我从来不用。
但是还有一个阴性control 很重要，比如你在brain里面KO掉了蛋白A，你隔壁实验室说
他们有一个在肝脏里面看蛋白A是不是被KO掉的抗体。你于是拿过来在brain上试了试，
发现哇，KO和WT都闪闪发光。。。-_-III
这种情况可以出现在空白对照很干净的抗体上。 |
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k*****s
发帖数: 63 | 22 你可以做只有二抗的对照
血清稀释对照，大概5%-10%
况。 |
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k*****s
发帖数: 63 | 24 一抗里加血清有时候会有意想不到的效果
所以用血清对照有其道理的，有时候可以降低只有二抗时候的非特异染色 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 25 I don't quite understand what you meant.
My guess is to use peptide pre-absorbed antibody as negative control.
Honestly, I never bothered to take this step in the past.
Guess for a new antibody, it is good to try. |
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n********k
发帖数: 2818 | 26 Controls are important but more important is to know your systems/stuff well
...Otherwise it could still be problematic even with seemingly right
controls...
况。 |
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J******9
发帖数: 736 | 27 谢谢大家，我可能没说清楚，用该抗体的blocking peptide来处理组织片，作为阴性对
照。 |
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h********n
发帖数: 4079 | 28 blocking peptide, which can bind with the antibody. You can add the
peptide with the antibody to stain a positive sample. If the signal
disappears, it means the antibody has good specificity. My phd boss think
this is very important. |
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n********k
发帖数: 2818 | 29 你是真穷。。。不过我其实也回收过二抗，有时越用越干净。。。你以前最组化很少吧
，产品说明上有警告的。。。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 30 我在研究生院的时候从来没有做过western blot...
细胞组化倒是常作，但是azide 并不影响抗体结合，所以immunochemistry 里面
常常用它的，所以我当时就把这个习惯带到western blot 里去了。
另外，二抗并不是越用越干净吧，我猜其实是越用越弱了，然后弱的信号看起来都
会干净一些吧？ |
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r****t
发帖数: 10904 | 31 省赛拿奖算个p, 进了冬令营的不还是在老老实实扎电极或者做组化。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 32 搭车问一下；
以前没有作过切片。这个有培训班吗？
准备做老鼠了，想学做些免疫组化的东西
谢谢。 |
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h******u
发帖数: 602 | 33 是从HYBRIDOMA来的单抗。一直都是收集细胞培养的MEDIUM，直接用做免疫组化和
WESTERN。用几次后就扔掉。
现在想节约点，除了分装小体积，避免多次冻溶，是不是还可以加点proteinase
inhibitor？ 别的招呢？ |
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h***e
发帖数: 20195 | 34 错，多伦多博士应该是真的，行骗的原因也是他同系近10年来有多人去MIT/HMS 某组做
博士后，好些已经做FACULTY了，他受到了启发 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 35 抗体wb就一条带吗？
一直有个疑问，如果抗体多条带的话，免疫荧光和免疫组化总能得到一些信号的...
我实验室一个人，做病理的，像我说santa cruz的抗体质量好。
可能每次片子都能得到信号吧。 |
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p****a
发帖数: 198 | 36 接了一篇老中的稿子
搜过，没有发现相关文献，感觉内容有点新意
但实验内容不多，动物造模处理，做几个western，免疫组化双染就完了，造模后都没
有验证模型的效果。
更主要的是
通篇，随便拎出一句话来都可能有语法或表达问题，a/an不分、第三人称单数加s乱用
、图3的结果描述的时候说成图4、图中没有scale bar，但在图表说明中说是多少多少
um、部分参考文献不完整。
感觉拒了有点可惜。
想听听大家的意见。
谢谢。 |
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C********4
发帖数: 308 | 37 比如，我要看mouse HOXA9这个基因在ES细胞里面，promoter区的H3K27、DNA甲基化修
饰情况。
这类data是不是都有个公用网站，供查询啊？
能否给个详细点的链接？
谢谢！ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 39 unfieldified (未场化的蛮) is MATRIX
in this bioinformatics topics
it is matrix mior/interests not major. |
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v****e
发帖数: 131 | 40 搭车问一下，什么公司的GFP抗体可以做免疫组化 |
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b******n
发帖数: 4225 | 41 你突变体纯合子能被抗体检测，是western还是免疫组化？
突变体纯合子的mRNA可以做primer extension，看看是不是有alternative start
codon
想降低qPCR本底水平，引物可以设计一端priming在exon1，另外一端在别的exon或者5'
-UTR |
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b******n
发帖数: 4225 | 42 如果logic make sense，results are solid to support the conclusion
western多还是少不是一个问题
反而那种看起来花花绿绿，很多免疫组化的结果我看起来有点不太踏实
当然，如果western是伪造的是另外一回事 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 43 额， 我是听shi 实验室的人说的。
我听到的版本是，当时不是发现了tet1， 是通过薄层层析发现了有一个莫名的blot，
当时不知道这个点是hmc。 后来不知为何没有做下去。后来那个薄厚跳到rao那里。 一
作是不是他我没有细查， 想当然了不好意思。shi的cell res确实是跟风。
我不认为文章的思路和做的顺序就是一致的。
可能是先发现了有hmc存在， 然后通过blast找可能包括这些function domain的蛋白，
然后再反过头来做function loss。
zhang yi那篇的后半部分是有问题的， 当时大家都在诧异，别人ko mouse都出来了，
他的knockdown怎么会让es分化的那么厉害。。
至于后面的。。
我们实验室也在做tets， 很早就观察到雌雄原核的现象了。。。。 因为种种原因最后
没做。。。 当时做hmc在肿瘤样本中的组化，有明显的预后差异。我做的是tet1在
somatic里的功能， 坑的要死。。 做了两年都不做了。想想胸闷啊。
随手写了点表达不清， 不好意思。
research |
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a*****3
发帖数: 565 | 44 我很久以前做过IHC，但也做得不多，那时我们都是用一抗加二抗做的，现在的老板
喜欢直接用荧光标记的一抗，不知道这样做出来效果和加二抗哪个好？我没做过直接
加荧光标记的一抗，所以也不清楚哪种效果好，老板说直接用荧光标记的一抗，不加
二抗能减少干扰，但我觉得二抗能放大信号，洗得干净的话不会有很深的背景，谁有
经验的给说说呀，我老板他自己也没什么IHC经验，他以前倒做过Flow Cytometry,那
都是直接用荧光标记的一抗，所以他就说要用荧光标记的一抗直接做。
另外再问一下，做组化是用OCT包埋好还是石蜡好呀？是小鼠脑组织。 |
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c***y
发帖数: 615 | 45 切的厚度是5um, xylene, enthanol之后, 探针杂交;结果发现很多paraffin还留在片子
上,可能的原因有哪些?多谢了 |
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t**********y
发帖数: 374 | 47 确实没换. 不过上星期还好好的.
看大家都是re-use xylene的, 我是新人, 不知道什么时候该换一下... |
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c***y
发帖数: 615 | 49 statlab 315+g adhesion corner slide |
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