s*******e
发帖数: 1010 | 1 在你蛋白的C末端终止密码子之前加进两个限制性酶切位点，然后把你的补加的linker
和tag设计成引物。即使十六氨基酸加上十个His也就26×3=78个bp再加上两头的酶切位
点6×2=12和保护碱基四个，总共才不到100个碱基。设计两条长度60bp的引物在中间有
20bp的互补区域就正好能覆盖100个bp。放在一起退个火再延伸一个回合，把产物连到
你蛋白的C-末端就成了。
我觉得这个其实不是连多长的tail的问题，换tag可能更好。你可以连接一个GST或着
GFP到你蛋白的C末端，如果用GFP的话再把His连到GFP的C末端。这个融合蛋白如果能表
达就一定能亲和纯化。在两个蛋白之间加上一个蛋白酶切位点就有机会在纯化后切出你
的蛋白来。
另外，Hisx6已经不fashion了，要X8或者X10才能hold住场面！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 2 这几个学校都挺好的。而且档次拉得也挺开的。
建议补加这几个：
Wisconsin Madison ，Penn State，Ohio State（理由：学校大，名额多，进
去之后可选的实验室也多）
Georgetown 就算了，学校特小，水平一般，还特挑剔。
of |
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L*****t
发帖数: 56 | 3 Amp抗型的bla基因是分泌型beta内酰胺酶, Studier的文章里提到过菌液OD=0.2-0.3的
时候培养基里的Amp已经没有了，补加也会马上被消化掉，唯一的办法是把菌液离心后
用新培养基重旋，否则肯定会掉质粒。 |
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D**A
发帖数: 311 | 4 protease inhibitor 加够推荐的量就可以，多加浪费钱，效果还不一定好，可以加点
PMSF, benzamidine, EDTA之类的便宜inhibitor, 隔1-2小时补加一次就可。15%
glycerol.
先用液氮冷，然后快速解冻, 加冷的lysis buffer试试。
蛋白在室温下过夜会水解。
能想到的就这么多了。 |
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t*******o
发帖数: 516 | 5 我也是做结晶的。 你这种情况多半是溶液不对。所谓高盐是相对TEV酶切的。比如
500mM盐。 你得先保证你的蛋白稳定了才能谈其他的对不对。楼上说的加DTT估计也有
帮助。0.5mM TCEP还是弱了点。
再说了，谁说高一点的盐不能结晶的？最普通的做法就是，screening时，set up好
droplet后，密封前，在所有的well solution里补加等浓度的盐，比如500mM. |
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s******y
发帖数: 28562 | 6 好像就是因为一开始投的是Nature被拒了（属于那种假拒）,但是需要补加很多数据才
能重新投回去。但是后来被张一搅局，他就没有办法慢慢补数据了，只好把现有的数据
投到Nature Materials。其实这个也是一个非常牛的杂志。 |
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S**********e
发帖数: 1789 | 7 也还好吧，生意好的时候小费油补加底薪能过200刀。不好的时候也能过130。平均下来
160/天。管3顿饭，吃的也不错。中餐馆老板真心比教授强。春节给大家做一大桌子丰
盛的大餐，圣诞节加钱。
我们实验室连圣诞节也不吃饭。全年一分钱奖金也没有，加班也没有，这大家都知道的。
只是餐馆送餐听起来没有在大学做科研高大上，实际比博后赚得多。全职送餐老板管吃
管住，几乎没什么开销。 |
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r*******i
发帖数: 133 | 8 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区,原文如下 】
发信人: riliwanji (不锈钢架子), 信区: Chemistry
标 题: 溶液电导率计算求教。
发信站: The unknown SPACE (Sat May 24 12:57:40 2003) WWW-POST
化学已经丢了N多年了，现在需要测量和计算溶液的电导率。请各位指点。
5ml纯水，加入缓慢溶解的物质。30分钟后取出1ml溶液，测得电导率为a(S/cm)。
剩余的4ml溶液中补加1ml纯水，240分钟后此物质完全溶解，测得电导率为b(S/cm)。
现在我想计算如果此物质在5ml纯水中溶解270分钟（即完全溶解），
所测得的电导率应该等于多少（以a、b的数学式表达）？
非常感谢！//bow |
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a**t
发帖数: 157 | 9 补加一个事实，可能会吓人一跳：就是运10研制时，我国处在对外封闭的情况下，在“
708工程”中，确实还包括了一个为“运10”配套的发动机的研制。研制出了国产航空
发动机-涡扇八(代号:915发动机)，成为20世纪内我国发动机行业研制出的推力最大
的涡轮风扇发动机，也是迄今为止我国研制的最大发动机。
这型发动机的研制，有三个特点:
第一、发动机上所使用的高强度高温合金，全部在国内研制出来了。915使用的是清一
色的国产材料。（我国有的冶金学家，就是攻克了其中几项合金而当上了院士）。
第二、915发动机研制出来后通过了严格的地面试车。这种试车的难度，是传统的发动
机工作人员闻而色变，过去从未进行过的。
第三、915发动机装在波音707飞机上进行了成功的试飞。
1982上海市航空工业办公室批准装有国产涡扇8发动机的波音707飞机升空试飞。工
厂验证性试飞共进行13个试验项目，试飞的8个起落均在上海大场机场进行。飞行21小
时46分，地面开车11小时05分。测试结果均符合设计要求，实现了中国在大型商用涡扇
发动机上“零的突破”。
波音707飞机机组试飞员冯承直、张耀德在对涡扇8发动机试飞情况评 |
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h******u
发帖数: 602 | 11 congratulations and thanks for your information.
一看过了 |
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J*J
发帖数: 201 | 16 congratulations!
我连看report的勇气都没有，LD帮我打开看的。
再打开信箱，我的两个学习伙伴都过了。还是推荐kaplan班，那一期的同学都过了。 |
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b**********9
发帖数: 10 | 17 再次感谢你， 很幸运和你一起复习了CS， LUCKY ME. 我其实也是没有勇气看成绩，
老公代劳了。我在那边哆嗦着。 |
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J*J
发帖数: 201 | 18 I feel lucky, too to be your partner. 一起考过了CS，考版的漫长道路上又多了个
好朋友。希望明年这个时候能一起开始PGY-1. |
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f****i
发帖数: 129 | 19 VICTOR的演讲细致，全面，生动，回答问题耐心，真的受益非浅。大部分要点其他的帖
子都很详细地说过了，我就自己感触深的几点列举一下：
1. 儿科对成绩要求相对不很高，值得成绩不太理想的同学考虑。
2. 一定要确定推荐信是positive的， 否则再大的牛也不要用。
3. CMG的推荐信也可以，只要是positive的。
4. PS, CV, LOR是重中之重，要精心准备。 可让公司修改。避免语法错误。
5. 如果有extenship, OB, CV， PS 要着重讲. PS 不要超过800字。
6. LOR 三封就够，四封更好。
7.如果interview 数不够， 可以补加申请。 一旦拿到interview, 所有的人站在同一
起跑线上。
8.interview 中要给人一个谦和，友善，positive, energetic的主体印象， 是对方
comfortable.
9.争取和面试官建立chemistry.
10. interview 中把握好“点”和“面”。
点：和面试官：要找闪光点， 使其impressed.打消面试管对你的顾虑。
面：和residents, 其他面试者：... 阅读全帖 |
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j*******6
发帖数: 259 | 20 今年成功match的同学，很真实地和我们分享了自己成功的经验，也有曾经失败的教
训，他们所做到的努力是我远远没有做到的，有些是条件所限，更多的是没有这样
的勇气，拼搏和策略，这也是我失败的原因。所受到的启发和鼓舞超过过去任何一
次的讲座，非常感谢Emma, daisy，xiaofeng, xiaofang等热心的组织，感谢19位今
年match上的同学，感谢Coffee 等最后助场！Emma的开场白说到心坎，强装的坚强
一下就失去了防线... 认真做了笔记，却发现远没有dolphinzr和spicyfish10强大，
写到都没法补加。我听课后觉得自己欠缺的剖析一下：
PS：重视过程，忽略对将来进临床有什么用；为什么自己是qualified.
CAF: 细节不够注意，面试时有疑义，比如title我写M.B，但有interviewer就说我
没有M.D怎么可申请，解释了没用，请教大家！
申请：多申，有目的，挖掘connection
LOR: 大牛最好，没有的话，推荐信用词要strong, 主动提供PS 和CV 让推荐人了解
你。
IV准备：1. 象对待考试一样，背得很熟，故事打动人，要润色... 阅读全帖 |
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M******l
发帖数: 305 | 21 来自主题: Pharmaceutical版 - 公司药店 1 老印好吹
2 老中不太按部就班，paperwork有时后来补加。 |
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h**r
发帖数: 8078 | 22 投诉人(ID):
hair
投诉对象及职务(限版主）:
chicago版主beanies
投诉标题:
beanies 乱删贴
投诉目标(更改处理决定/更改板规/弹劾板主...):
弹劾板主
投诉理由及证据:
2/3/2013 我在投诉版发表了题为《[投诉]弹劾芝加哥版版主beanies》的帖子。其中在
“投诉理由及证据”栏，我列出了5条弹劾证据并附chicago版原文链接。
2/4/2013 我发现beanies版主在版面清水合集，导致我首帖内的证据链接几乎全部失效
。于是我重新补加了合集后的新链接。
请站务查阅complain版第5328贴，链接
http://mitbbs.com/article1/Complain/31309247_3_0.html
今天2/7/2013，我发现，我修改后的证据链接再次失效，beanies把合集也删除了，导
致我的证据完全无效。
beanies利用职务之便，在站务暂未处理投诉的时间段，销毁chicago版面的证据，其行
为恶劣，不配承担公开版面版务。 |
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m*******r
发帖数: 7495 | 23 最近版面新面孔不断，我们版终于渐渐活了。可喜可贺~ 哈哈
庆祝，同时也针对版面常出现的网友提问，推出新期活动：【在瑞士(or海外)】
内容可以是以下任何一项：
1.你申请瑞士学校或工作的经历、经验，包括申请方法，办签证的经历等等
2.在瑞士对这个国家乃至整个欧洲的感受体验
3.海外生活的经历，尤其是一些特殊、意外的经历
4.解决困难的窍门以及生活经验，比如说，怎么在瑞士做出可口中餐，怎么在瑞士计划
好的旅游plan，怎么在瑞士理财，等等
5.其他任何跟瑞士相关的话题，请自由发挥
6.考虑到版上有喜欢瑞士版但不在瑞士的朋友，你们可以按1-5的方向写自己所在国家，
也就是说此活动不拘泥于瑞士一国。
要求：
1. 帖子标题注明【在瑞士】or【在xx国】
2. 每个帖子不少于100字或者3张以上图片
每个参与活动贴，奖励75伪币。上首页十大的，再补加100伪币奖励。
此次活动预算2000伪币，以奖金用完为截止日期。 |
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h*****t
发帖数: 6890 | 24 补一补加拿大野鹅，共15张。这是好几次拍的，所以片片的光线不一致。 |
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g*******1
发帖数: 6009 | 25 梁启超在26-27年间对共产党,国民党,北洋,和时局的评价
1) (1926年9月29日)：不反对研究系人物辅佐军阀孙传芳 (此时他的立场还是支持北洋
军阀)
"时局变化极剧，百里所处地位极困难，又极重要。他最得力的几个学生都在南边，蒋
介石三番四复拉拢他，而孙传芳又卑礼厚币要仗他做握鹅毛扇的人。孙、蒋间所以久不
决裂，都是由他斡旋。但蒋军侵入江西，逼人太甚(俄国人逼他如此)，孙为自卫，不得
不决裂。我们的熟人如丁在君、张君劢、刘厚生等都在孙幕，参与密勿，他们都主战，
百里亦不能独立异，现在他已经和孙同往前敌去了。老师打学生，岂非笑话(非寻常之
师弟)。
好在唐生智所当的是吴佩孚方面(京汉路上吴已经是问题外的人物)，孙军当面接触的是
蒋介石。这几天江西的战争关系真重大。若孙败以后(百里当然跟着毁了)，黄河以南便
全是赤俄势力。若孙胜蒋败，以后便看百里手腕如何。百里的计画是要把蒋、唐分开，
蒋败后谋孙、唐联和。果能办到此著，便将开一崭新局面。国事大有可为，能成与否不
能不付诸气数了。”
2)（1927年1月25日）次子梁思永曾致信梁启超询问为何支持孙传芳, 梁启超的家信：
"思永问我的朋... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 26 十六、悲壮的张璧之死及盛大的治丧活动
1948年2月29日，阴历正月20日，傍晚时分，张璧猝死在旧北平的第一监狱。张秀岩在
《我的回忆》中也说：“由于在民族灾难中，中国社会各阶级关系的错综复杂，后来我
们曾在党的指示下，几次做张璧的工作并且得到他的掩护。抗战胜利后他死在蒋介石的
监狱中。”由此可见，猝死在监狱是定说。
当张璧的遗体从监狱送出，在阴历正月22日，张璧的亲属、各界朋友及北京社会名流两
千多人前去吊唁。
当时，还是19岁的学生白洪瑛代父亲白静明去送挽联。他在“我的记忆”中写到：
张璧逝世后，在宣武门外下斜街的一寺庙吊丧。办事时，庙内人很多，院内都满了。
挽联很多，也都挂满了。特别是李宗仁送的横幅挂在中间最显眼的位置。当时天气很冷。
我是代表我父亲白静明去送挽联，我那时正在北京四中读高中……
当我采访白洪瑛老人时，他说：“当时李宗仁亲自书写了四个字的挽联，由于年代久远
，至今已经忘记了这四个字的具体内容。但对李宗仁送挽联的事情记忆深刻，因那时李
宗仁在国民党政府中名声很大。”
我没有找到档案相关的记载，但至少，我们可以作为一个证据在此提出来。也请亲身出
席了那次吊唁的人，一起回... 阅读全帖 |
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S********t
发帖数: 18987 | 27 认准这块巨石就不会迷路,
没走到缆车站,那他们也是得往上走吧,
常补加得乐能好一点,盐分 |
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r**********9
发帖数: 19633 | 28 润涛阎
承蒙网友邀请，我写个短的评论。要不是网友电邮邀请，我从来没有看过《非你莫属》
这档节目。我看了这断视频才知道张绍刚是这个节目的主持人，但我看完后没有觉得有
什么大惊小怪的，也就没有想评论什么，直到越来越多的网友电邮邀请我评论一下，今
天算是交差。
我不了解张绍刚这个人，对他的人品或者水平不甚了了，只能就事论事。
我看后的第一感觉就是刘莉莉的错位。
首先我们必须从英语与汉语对照来谈。在英文里非常简单：Job search，中文的意思就
是“寻找工作”。而“职业”英文对应的是Career ，就是古代的战车，也就是等于“
路径”，也就是“职业生涯 ” 的意思。中文里“职业”这个词源于荀子，可见源远流
长。所以，一说“职业”，大家都明白它的含义。不论中文还是英文，没有差异。但中
文的“求职”二字的问题就大了。
关键是“求”字。中国人不可能说“寻职”，你要说“寻职”，听者一定认为是在说“
殉职”二字。英文里的Job Search 就是说的“寻职”，寻找的意思，而不是求的意思。
“求职”与“寻职”一字之差，但内容却反应了东西方文化的差异。
“求”隐含着“求人帮忙”、“求爷爷告奶奶... 阅读全帖 |
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M********e
发帖数: 2528 | 29 485 的情况是只要没有被批准，就可以补加配偶
485 |
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z********i
发帖数: 628 | 30 从国内带了一大包秀儿的早早孕试纸。已经做好了失败的准备，还买了50个排卵试纸。
呵呵，
刚刚再验了一下，第二条线明显加强。放心了很多。因为很担心可能需要早点验血，好
补加什么药的。
谢谢大家帮助！ |
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k*****e
发帖数: 22013 | 31 【 以下文字转载自 QueerNews 讨论区 】
发信人: kaleege (隆冬盖), 信区: QueerNews
标 题: 韩寒：说民主
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Oct 2 06:28:35 1927, 美东)
问：革命不一定是暴力革命，天鹅绒革命就是完美的典范。
回答：我不认为天鹅绒革命能够发生在中国。不谈当时的国际局势，也不说整个捷克的
人口只有北京的一半。相信天鹅绒革命其实就是选择相信了民众的素质，执政者的忍让
，文人的领袖，这三者的共力才能形成天鹅绒革命，我认为这三者在中国全部不存在。
你不能把一场完美的革命常挂在嘴边来反驳也许未来不完美的改革。我理解中国很多文
人和学者对天鹅绒革命的感情，他们甚至能够在脑海中将自己代入哈维尔的角色暗自感
动。但无论中国发生暴力革命或者非暴力革命，文人所处的地位和角色远远比他们想象
的要低得多，更别说能作为领袖了。而且国民素质越低，文人就越什么都不是。你也不
能用完美的民主，完美的自由，完美的人权从字面上解释应该什么样子的来逃避中国的
现实。改革和民主其实就是一场讨价还价的过程，你不能盼着执政者看了几本书忽然感
化把东... 阅读全帖 |
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f*****g
发帖数: 15860 | 32 rakeback象这种后来才补加入的，不给以前的积累，只算将来的。
所以一开始就搞定很重要，一年下来可能吓你一跳，2+2都说不少人rakeback+bonus比
真正赢的都多。 |
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