l******g
发帖数: 1623 | 1 表达几个受制于plasmid的大小. 一个vector, 你可以随便装几个expression
cassettes. 工业界用这种方法生产蛋白, 都是每升以克计 |
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W*********n
发帖数: 775 | 2 2个样品：对照样品和处理样品；然后作三次生物重复。就有3个对照样品，3个处理样
品。每个样品做了LCMS/MS后，数据输入Scaffold 软件。然后用“quantitative
analysis” 中选择“Fisher's exact T-test”.得到大约100个蛋白p<0.05.
然后我的问题是：怎么把这100个蛋白分类输出“表达上升的蛋白”和“表达下降的蛋
白”两组？
觉得有的蛋白，在两组重视上升趋势，在第三组中是下降趋势，结果也是p<0/05.不知
道这个蛋白应该是上升还是下降？怎么区分？
谢谢！ |
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s******s
发帖数: 13035 | 4 不知道怎么增加表达，不过有时候加tag增加稳定性。
小鼠的不知道，普通细胞转点BAC，或者查查有没有高活性的突变knock in? |
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p******b
发帖数: 379 | 6 我个人的经验是， 不同的细胞表达GFP的快慢也不一样， 同样的病毒同时感染两种不
同的细胞， 有的细胞出GFP的时候快， 有的细胞慢， 比如MM231 GFP在感染十几个小
时之后就非常明显了， 然而有些细胞48小时才明显
同样的病毒用相同的滴度感染不同的细胞， 感染效率也不一样。
可能跟细胞的病毒受体多少有关， 病毒进入不同细胞的快慢和多少不一样
当然同样是lenti， 不同promoter， 感染的快慢和效率也不一样
感染的方法可能也有点影响， 江湖传说reverse infection（感染当天trypsin细胞，
同时把细胞，病毒和HB一起加到培养皿）比普通的先铺好细胞第二天感染效率高一点点
， |
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z********8
发帖数: 818 | 7
那就要重新构件质粒了，很麻烦啊,如果是这样，那些做adenovirus公司的岂不是会损
失一些生意？
有没有什么方法抑制adenovirus表达蛋白in hek293 cells？我的这个启动子是 CMV. |
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j****x
发帖数: 1704 | 8 我觉得我前面的帖子已经解释的很清楚了...好吧，即便是这个case里的N-terminal HA
Tag（-NLS）的表达载体，能查到的商用的或是自建的有很多都不去除后面那个Met，
我手头几种载体的manual中也没有特殊说明需要专门去除，只是强调in frame
insertion。
所以，套用你的话，这个Met你愿意删掉就删掉，nobody cares。而这种tip到底算不算
你所谓的“常识”，反正也没个标准，大可不必争了。如果你手边有哪个商用载体明确
指出推荐去除后面的Met，请分享，谢谢。我想说的是，三楼把没有去除Met这一点当成
是LZ出现问题的解释和解决方法，我觉得值得商榷，真正问题根源所在很可能并不在此
，原因我和LZ一位朋友已经解释了，如果你不同意，可以继续讨论。如果你不知道三楼
所说的“初级错误”是指什么，那么关于这一点我们这里也没什么好纠缠的了。
keep
I
he |
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x********e
发帖数: 35261 | 9 那leaky expression的concern就更重要了
hsp算比较强的promoter了，另外Janelia farm用的是一个果蝇的synthetic promoter,
要稍微弱些，但表达更忠实于enhancer的控制
在UAS element上放大信号我不认为是个明智的方法。
GFP。 |
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v*******e
发帖数: 11604 | 10
哎。这screening也太累人了。否则找个药，涂在头皮上，杀死P16表达细胞，分分钟让
白头发变黑头发。 |
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T*****e
发帖数: 247 | 11 假如你能找到该基因表达的调控序列，比如增强子，那么用这个增强子驱动随便一个什
么杀细胞的基因就可以了。
当然我说的是实验，不是治疗。 |
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C*********u
发帖数: 811 | 13 理论上可以用virus表达p16 promoter driven 的suicide gene |
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k****l
发帖数: 279 | 14 现在的项目要求在 100 个 mutant 里测 100 个基因的表达水平
qPCR太耗时，RNA-Seq的话 100个样品太贵，想问一下有没有规模介于两者之间的方法
谢谢大家！ |
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D***a
发帖数: 516 | 15 我用过别的lentiviral vector过表达GFP和其他蛋白，没有selection marker，但我能
得到细胞几乎100%阳性。我认为我做病毒的方法是没问题的。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 16 最简单的方法就是把那个基因接到一个肝脏特定表达的promoter后，然后直接把这个东
西转到卵细胞里去然后做成老鼠。
这个技术很简单，大部分学校的core facility 都可以做。 |
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R********n
发帖数: 519 | 17 我想通过一个联系，把算法中用到的向量用矩阵来表示。比如有一个向量v，希望表达成矩阵M，可以通过M包含V的所有信息。
问题是，一般的做法都是用M的特征向量来表示v的方向，M的特征值来表示v的norm，但是特征向量是可以乘-1还是，这样方向就变了，所以存在一个方向模糊的问题。
就是说分辨不出来v or -v
比如M = v*v'，这样通过M，我只能得到v or -v，但是不知道具体是哪一个
有什么方法可以把v的正负极性在矩阵中保留呢？谢谢~~~ |
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w*******7
发帖数: 412 | 18 等你match到这个program的时候这个话才可以用来支持你的论点。我的经验就是美国人
是非常非常狡猾的，当面说好听的我从来当风吹国，不用相信。他们说good, very
good就是说不是很差，要说excellent, phenomenal, outstanding, extraordinary啥
的才有可能是真说"good".
另外你这短短几句话，就有至少3个语法和逻辑问题啊，这个面试官都没有指出吧。另
外就算这个表述的语法和逻辑都纠正了，你这个表达的style就不是常规的american的
表达方法。他们对你的concern是不会当面告诉你的，有点修养的美国人就是这样。
但就算我们有这样那样的问题，还是很多xdjm都match而且不少人去很好的program。说
到底你能给program 创造什么价值。好的program如果要一个IMG,committee都要讨论半
天的，即使你这个IMG确实比AMG强很多，PD要考虑他们的brand,要控制IMG的比例不能
dilute他们的prestige,这样以后会影响未来申请的AMG对这个program的rank.当你还在
圈子外的时候... 阅读全帖 |
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t**********y
发帖数: 374 | 19 问题是我希望， gene 表达水平低的可以scatter的范围大一些。 也就是说每一个gene
的可允许的variablity 是不一样的。 而这个variablity是以雄性样本为基准的。
所以我希望有一种方法可以model 雄性样本的variability, 寻找variance 和mean的关
系, 然后计算出threshhold.. |
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l******d
发帖数: 5255 | 20 7.为什么写作？
唧唧歪歪了这么多，都是在说如何处心积虑的讨好读者，累不累呀。写作到底为了什么
？为了作者自己，还是为了别人？
金庸说过写作是娱人娱己。
人都有表达自己的希望，同时也有自己的表达被人听到的希望。这是娱己。
人也有讨好别人的希望。就是被人认同的期望，让别人觉得你行，让人说你做得对做得
好（克林顿这样的民主党左派身上这个特质更为明显一些）。这是娱人。
写通俗作品是为了谁？写严肃作品又是为了谁？这是一个问题。 |
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l******d
发帖数: 5255 | 21 7.为什么写作？
唧唧歪歪了这么多，都是在说如何处心积虑的讨好读者，累不累呀。写作到底为了什么
？为了作者自己，还是为了别人？
金庸说过写作是娱人娱己。
人都有表达自己的希望，同时也有自己的表达被人听到的希望。这是娱己。
人也有讨好别人的希望。就是被人认同的期望，让别人觉得你行，让人说你做得对做得
好（克林顿这样的民主党左派身上这个特质更为明显一些）。这是娱人。
写通俗作品是为了谁？写严肃作品又是为了谁？这是一个问题。 |
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y***i
发帖数: 11639 | 22 http://www.kouyu100.com/z/index.html
"成立5年，一年研发，一年试点，三年全国扩张，每年产值100%增长的独一无二的奇
葩企业！"
"“唯一”这两个字的分量和含金量，你懂的。多项重要的唯一。。。。不说啥了 –
而且是毫无水分的唯一！"
然后下面是 “一哥资本大鳄”“华人管理钱最多的人之一”
妥妥的欺骗退休大妈退休金的spam email的风格啊。【而且“奇葩”这个词现在网络
上通常是贬义】
现在仔细看内容，还是有分量的。前两天，只看见浮夸的语气 :) 但你想表达这个分
量的语言，混一群骗子里真分不开 :D
我认为应该用更从容的表达方法。 |
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y***i
发帖数: 11639 | 23 http://www.kouyu100.com/z/index.html
"成立5年，一年研发，一年试点，三年全国扩张，每年产值100%增长的独一无二的奇
葩企业！"
"“唯一”这两个字的分量和含金量，你懂的。多项重要的唯一。。。。不说啥了 –
而且是毫无水分的唯一！"
然后下面是 “一哥资本大鳄”“华人管理钱最多的人之一”
妥妥的欺骗退休大妈退休金的spam email的风格啊。【而且“奇葩”这个词现在网络
上通常是贬义】
现在仔细看内容，还是有分量的。前两天，只看见浮夸的语气 :) 但你想表达这个分
量的语言，混一群骗子里真分不开 :D
我认为应该用更从容的表达方法。 |
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a***s
发帖数: 12296 | 24 2016年“两会”已于3月15日完美落幕，“依法治国”依旧是会议的热点话题，深化司法改革，实现“让人民群众在每一个司法案件中感受到公平正义”的目标，也被提出。为了深入贯彻依法治国、司法为民的精神，国内首部田园法治轻喜剧《小镇大法官》也将于3月21日登陆央视综合频道。该剧由中国国际电视总公司、最高人民法院影视中心、安徽广播电视台、广东广播电视台、北京华鼎创世影视文化传媒有限公司联合出品，李京担任总制片人，林永健、李健、李小萌、李依玲、郭广平、陈谨、赵熠洋、毛毅领衔主演，韩童生、范明、刘敏等倾力助阵，以轻松、温情的基调，讲述了以荷塘镇法庭庭长王德忠（林永健饰）为代表的基层法官，全心全意为村民解决民事诉讼的故事。
基层法官“依法治镇”
《小镇大法官》是一部剖析当下基层法庭、呈现基层法官的工作和情感的轻喜剧。剧中的荷塘镇虽然地方不大，事儿却不少，各种民事诉讼案件层出不穷，例如真假离婚案、老人赡养案、土地开发案等。虽然在解决这些案件时当事人会与法官产生不一致的意见，但这也从侧面反映出了镇民们意识到法律的重要性，选择依靠法律来解决生产生活中大大小小的矛盾和冲突。
王德忠作为荷塘法庭的老法官，有自己... 阅读全帖 |
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c*******1
发帖数: 240 | 25 古英语也有很多时态，case，mood之类的。
语言发展的趋势是从inflected发展到analytic
一个比较明显的例子是英语的比较级最高级。
比较短的词用曲折形式（变化词缀的方法） simple -> simpler
比较长的词加一个虚词more来表示 beautiful -> more beautiful
古英语只有er，est词尾变化一种表达方法。在莎士比亚时代之前的书里经常能看见
belovedest，beautifuler这种很奇怪的词。
到后来人就变懒了，用more，most的越来越多，用-er，-est词缀的越来越少。以至于
像more simple，more easy这种用法也逐渐出现了。虽然别扭但不能说完全错。这在八
百年前的英语里是不可想象的。
另外英语里本来没有将来时，进行时，完成时。I will go 和I want to go本来是差不
多的，will是一个现在时的动词，go应该变不定式，但后来人懒得变了。。I am going
，going是一个形容词，这跟I am happy在语法上没有任何区别。I have gone同理gone
也只是形容词。但后 |
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b*******8
发帖数: 37364 | 26 这跟科学研究是一致的
史丰收要不把计算方法公布让大家学习
永远就停留在神棍级别上
不会得到公众相信
如果智力有问题表达有问题，那只能吃哑巴亏了 |
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b*****d
发帖数: 61690 | 27 本报东京2月3日电(记者刘军国) 据日本时事通讯社报道，英国驻日本大使蒂姆·希
钦斯3日在东京出席“内外情势调查会”举行的演讲会时，针对日本政府的历史认识问
题表示，“纠正历史错误的最好方法就是承认所犯的错误，积极构筑更加美好的未来”。
蒂姆·希钦斯在当天的演讲中对日本与中韩两国关系恶化可能会给作为世界经济发
展原动力的东亚地区增加不稳定因素一事表达了担忧。他还表示，日本政府领导人在参
拜靖国神社问题上应谨慎行事。 |
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b****a
发帖数: 793 | 28 香港知名专栏作家屈颖妍因近年撰文针砭时弊，直斥反对派的“民主霸权”，近日屡遭
激进派的“灭声”威吓。激进派组织“调理农务兰花系”主席马健贤早前在社交媒体脸
书（facebook，fb）留言，恐吓要屈颖妍一家五口“灭门，鸡犬不留”。据大公网5月
26日报道（记者冼国强），一句针对专栏作家屈颖妍“灭门”的恐吓，揭示香港言论自
由被反对派“民主霸权”垄断的悲哀事实。《大公报》记者调查发现，恐吓屈颖妍“灭
门”的始作俑者、激进“港独”组织“调理农务兰花系”，近日还不断鼓动仇警、辱警
、袭警甚至杀警。他们针对近日警方误拘智障男子事件借题发挥，在网上煽动从后用棍
偷袭执勤警员报复，更称如有成员身患绝症，“起码要杀几件差人”报复。警队中人坦
言对有关言论感到担忧，有法律界人士直指，“灭门论”或构成刑事恐吓及不诚实使用
电脑。
图：“兰花系”主席马健贤（左）在网台上散播仇警言论，煽动偷袭执勤警员网上图片
发生警方误拘智障人士事件后（观察者网注：5月2日，香港沙田美林邨遛狗翁被杀
案，警方一度错误拘捕30岁中度智障及自闭症男子，前晚深夜发稿表示抱歉），屈颖妍
在报章撰文支持警方，因而遭到铺天盖地的死亡恐... 阅读全帖 |
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h***x
发帖数: 250 | 29 这是方法之一:
本人是从可靠来源得知的. 当你在网上看到某人说什么以前也是同情甚至积极支持民主
的, 后来看到tg领导的也很好(或美日/民运领袖的真实面目), 改变了自己过去的观念
等等......拐一下弯, 但把自己的意思表达出来了, 你可以基本断定这人是五毛. 这是
五毛集中学习教授的经典套路之一 |
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l********7
发帖数: 1077 | 30 打我脸？目前没见过有实力打我脸的人。我摆事实讲道理，你们说我没有根据，我上传
资料，你们不看不学习，继续人身攻击。几个黄茶党，满地打滚，血口喷人。我还有正
经工作学习、还有必要跟一群鬣狗纠缠么。
我说了几遍，之所以被叫做阿拉伯字母，是因为欧洲人从阿拉伯人那接触到了先进的数
学，但是孤陋寡闻的欧洲人不知道这种数字表达方法最早起源印度。阿拉伯是实验物理
，光学、peer review,数学归法，etc 诞生地。欧洲的大量管弦乐器和乐理来自阿拉伯
和波斯，化学更牛逼了，各种烧瓶、试管、蒸馏都来自来自阿拉伯。医学，中世纪欧洲
还处在跳大绳阶段，众多手术方法、各种手术刀、钳、剪都是阿拉伯人弄出来的。欧洲
人跟在屁股后面一股脑学过来的。航海商业，驰骋地中海，印度洋，南中国海，海上丝
绸之路。海上丝绸之路的马车夫，包揽了国际贸易，将伊斯兰教传播到了远至印尼。是
啊，在你看来p都不是，自己照照镜子看自己算什么。
请温习我以前所发有关帖字 and educate yourself by google |
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f****y
发帖数: 737 | 31 请大家想一想，英语是谁发明的？英国人呗！
英国人认不认识汉语？不认识！
那么英国人在学英语单词的时候需不需要记住单词的汉语意思？不需要，英国人的英语
课本里根本就没有汉字，何谈记住单词的汉语意思？
那么既然英国人学英语不需要记住(甚至根本就见不到)单词的汉语意思，那么中国人学
英语为什么要去记住单词的汉语意思呢？这种做法大家不觉得奇怪吗？
然而由于中国人学英语时都在背单词的汉语意思，因此大家反而觉不出“背汉字”有什
么奇怪的了。
其实仔细想一想，这个行为真的很奇怪，奇怪的根源不在于行为本身，而在于中国人普
遍不会直接识别英语单词的意思，因而只好靠汉语符号来机械地帮助记忆英语单词的意
思，这样去学英语不仅多此一举，而且必然会陷入苦海无边的符号记忆灾难中。
其实英语单词和汉字一样，存在着很多的“偏旁部首”，知道了偏旁部首你就可以根据
它们直接来猜测单词的意思，虽不说百分之百猜准，但起码可以猜测个大概，至少在别
人告诉过你单词的意思后你可以恍然大悟地领会它，这样就可以大大增强你对英语单词
“见字识意”的能力，做到真正认识一个单词，而把它的汉语意思仅做为一般参考。
举几个例子来说吧：
比如单词... 阅读全帖 |
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k**n
发帖数: 6198 | 32 嗯，没问过。
在别的娃娃面前她会怎么说我不知道，但是如果是私底下，估计我闺女会说，什么是建
议？
俺答曰：suggestion...........
这样的对话已经不计其数了，也是我的一个难题，起码对我来说很难回答。
从孩子角度，所以我觉得静淌派是解决问题的投入最低产出最高的方法。
从大人角度，我相信一定有好的表达方法，不过对我来说可能也需要静淌 |
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Q*Q
发帖数: 869 | 33 咏春的交易方法，膜败一下
清仓
还是举例说明，这样简单：
比如资金十万，50％回撤那就是回到五万的时候，不论怎样，都清仓，重新审视市场和
修正自己的交易体系，或者根本就不修正交易体系，等待市场和自己的交易体系顺和。
或者资金十万，如果一下子赚到二十万，回到十万的时候清仓。我有时候完全不理会那
些，继续等到回到五万的时候，清仓。
如果最初十万进场看错 做错，一下子打回五万，休息一段后继续进场，又他娘的弄错
了，回到2.5万，清仓，继续休息；如此若干。。
但是最后一定要记住，初始资金十万，不断的看错，不断的休息，之后还不断的看错做
错，回撤极限是一定至少保留10％的资金，就是一万，绝对不允许再錯了，彻底休息。
至少三个月不能做单。
在这期间，基本面的东西是别再看了，因为前期的错误可能是自己对基本面的把握和逻
辑出现问题，什么都别研究了。剩余的资金已经不允许研究了。
天天没事就去看看月线，周线都少看。
熬几个月或者一年两年。
总有手风順的时候。
没事就看月线的结果就是突然某一天，你就知道自己过去的错误在哪里了，未来的机会
在哪里了。
那种感觉文字表达不出来。
一句话：平时就是需要多看，看的时... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 34 【 以下文字转载自 Piebridge 讨论区 】
发信人: YaTou22 (丫头长不大), 信区: Piebridge
标 题: 其实单身男女认识了解对方的方法有很多
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 8 17:44:06 2010, 美东)
最好最快的方式就是集体活动。
1。杀人
一圈下来，谁的逻辑思维能力怎么样，谁聪明，谁不聪明，谁表达能力怎么样，谁是大
忽悠，就知道了，杀人是最容易成为朋友的游戏，一晚上，杀下来就都认识了。
2。爬山
如果都是单身，可以看出来一个男人对女人的细心程度，他要是想和你发展，关心你呢
，那肯定会比较照顾你，他要是不照顾你，只是自己一个人往前走呢，那要不是他对你
没意思，要不是他就是不太会考虑别人的人。
3。滑冰
很happy的游戏，会滑的带着不会滑的，必须要牵手了，而且还不WS,然后不会的可以乘
机倒在GG怀里，或GG可以乘机报住女生。
4。旅游
大家一起越着出去旅游，很多时候出去时没在一起，回来后就在一起了，我身边有几个
例子。另外，旅游，需要长时间几个人在一起，需要team work 解决很多问题，可以看
出一个人的个性，性格什... 阅读全帖 |
|
h***a
发帖数: 1773 | 35 【 以下文字转载自 NewYork 讨论区 】
发信人: DollarRose (小玫瑰), 信区: NewYork
标 题: 其实单身男女认识了解对方的方法有很多
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 8 17:40:54 2010, 美东)
最好最快的方式就是集体活动。
1。杀人
一圈下来，谁的逻辑思维能力怎么样，谁聪明，谁不聪明，谁表达能力怎么样，谁是大
忽悠，就知道了，杀人是最容易成为朋友的游戏，一晚上，杀下来就都认识了。
2。爬山
如果都是单身，可以看出来一个男人对女人的细心程度，他要是想和你发展，关心你呢
，那肯定会比较照顾你，他要是不照顾你，只是自己一个人往前走呢，那要不是他对你
没意思，要不是他就是不太会考虑别人的人。
3。滑冰
很happy的游戏，会滑的带着不会滑的，必须要牵手了，而且还不WS,然后不会的可以乘
机倒在GG怀里，或GG可以乘机报住女生。
4。旅游
大家一起越着出去旅游，很多时候出去时没在一起，回来后就在一起了，我身边有几个
例子。另外，旅游，需要长时间几个人在一起，需要team work 解决很多问题，可以看
出一个人的个性，性格什么的。... 阅读全帖 |
|
y****m
发帖数: 714 | 36 赞
+U
据有人说去教堂，也可以提高听说能力，还能认识朋友
过公司经常也开些个英语培训班,能读懂一般的小故事.
就发一撂PAPER,做作业当然是优,一期下来自然升一级.一年后,上到ESL6了,看电视仍然
要看字幕.家里来个电话,仍然是心慌意乱.一个卖三明治的INTERVIEW,准备了一天加一
晚,二句就被人打发出来了.一急之下,看到一对以色列夫妇在星岛日报上的广告---是一
对一的教学呢.一狠心,交了550大洋,然后每周去二次上一对一的课.十节课后俺难过地
发现---那个老师--俺发现比ESL还差啊.后来去上成人高中.学有去上付费的学习班.一
来二去的二年多就过去了,这个署假回家,以前的朋友一? 鸪苑?每个人都热情地说,你的
英语现在挺好了吧?唉,那时候真的是非常惭愧,唉,似乎这三年是对谁都没个交代.
懂啊.这次俺去上VOA的网,那里每天有新的文章,读得很清晰.对俺来说实在是练听力的
最好方法.一个星期,俺在看老友记的时候关掉了字幕,呵呵,竟然听懂了一半多,真是鼓
舞俺啦.每天晚上睡觉前俺听一篇文章,早上再来听然后听写.发现好多的常用的单词俺
的重音读错了.
很多了,但是怎么表达还不 |
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A******r
发帖数: 129 | 37 天天是我真两期最喜欢的小朋友，而且张亮的教育方式我很认同。张亮每次和天天说话
，总是以大哥哥的方式和天天说话，晓之以情，动之以理。而不是老是哄（软方法）或
者是训斥（硬方法）去教育小朋友。三羊很可爱，但是家庭教育确实没有到位，特别是
父亲性格太软，在三羊心目中没有什么尊严，导致上次还说出我打死你之类的话。
反而我觉得在两次大的冲突中，多多不但没有做到调节的作用，老是在旁边不分青红皂
白的煽风点火，一次是JOE和姐姐在菜市场吵架，在旁边训斥JOE，另外一次是这次，三
羊的矛盾
，完全偏在三羊。相反，贝尔都在冲突中表现得很好。
不过每个小孩都是天使，但是我真的很喜欢天天，很懂礼貌，也不失男孩子的顽皮。 |
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c********e
发帖数: 42175 | 38 【 以下文字转载自 Piebridge 讨论区 】
发信人: YaTou22 (丫头长不大), 信区: Piebridge
标 题: 其实单身男女认识了解对方的方法有很多
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 8 17:44:06 2010, 美东)
最好最快的方式就是集体活动。
1。杀人
一圈下来，谁的逻辑思维能力怎么样，谁聪明，谁不聪明，谁表达能力怎么样，谁是大
忽悠，就知道了，杀人是最容易成为朋友的游戏，一晚上，杀下来就都认识了。
2。爬山
如果都是单身，可以看出来一个男人对女人的细心程度，他要是想和你发展，关心你呢
，那肯定会比较照顾你，他要是不照顾你，只是自己一个人往前走呢，那要不是他对你
没意思，要不是他就是不太会考虑别人的人。
3。滑冰
很happy的游戏，会滑的带着不会滑的，必须要牵手了，而且还不WS,然后不会的可以乘
机倒在GG怀里，或GG可以乘机报住女生。
4。旅游
大家一起越着出去旅游，很多时候出去时没在一起，回来后就在一起了，我身边有几个
例子。另外，旅游，需要长时间几个人在一起，需要team work 解决很多问题，可以看
出一个人的个性，性格什... 阅读全帖 |
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l********d
发帖数: 150 | 39 【 以下文字转载自 Heart 讨论区 】
发信人: exceler (停电), 信区: Heart
标 题: 这是我见识过的最正确的对付小三的方法
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 16 04:45:24 2016, 美东)
正室对小三的恨已经到了无法用语言表达的地步，但是当街暴打小三或者骂小三，跟老
公闹离婚都不是最好的反击方式。只会让负心汉更加看不起而已，甚至觉得沾沾自喜，
看看我多有魅力啊，两个为了我撕逼大战呢。或者是他正想离婚呢，你一闹正好小三成
功转正，岂不是亲者痛仇者快。
我认识的一个女人对付小三是真的做的很棒。她开始是无意中发现老公的暧昧短信，老
公说只是开玩笑的，并没有什么。后来她是在商场亲眼看见的老公和小三在一起，小三
还亲密的挽着老公的胳膊。她径直走到他们面前，她老公顿时就跟被电击了似得，然后
她什么也没说就回家了。她老公之所以瞒着她不想跟她离婚是因为她20多岁的时候也是
美女，并且挺贤惠的，所以并没有到感情破裂的地步，只不过是男人的通病寻求刺激罢
了。她到家以后就把最漂亮的衣服都翻出来，化上妆，然后就拿着钱出门了。这就是事
实，她给自己花了很多钱... 阅读全帖 |
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Y*****2
发帖数: 38613 | 40 【 以下文字转载自 Piebridge 讨论区 】
发信人: YaTou22 (丫头长不大), 信区: Piebridge
标 题: 其实单身男女认识了解对方的方法有很多
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 8 17:44:06 2010, 美东)
最好最快的方式就是集体活动。
1。杀人
一圈下来，谁的逻辑思维能力怎么样，谁聪明，谁不聪明，谁表达能力怎么样，谁是大
忽悠，就知道了，杀人是最容易成为朋友的游戏，一晚上，杀下来就都认识了。
2。爬山
如果都是单身，可以看出来一个男人对女人的细心程度，他要是想和你发展，关心你呢
，那肯定会比较照顾你，他要是不照顾你，只是自己一个人往前走呢，那要不是他对你
没意思，要不是他就是不太会考虑别人的人。
3。滑冰
很happy的游戏，会滑的带着不会滑的，必须要牵手了，而且还不WS,然后不会的可以乘
机倒在GG怀里，或GG可以乘机报住女生。
4。旅游
大家一起越着出去旅游，很多时候出去时没在一起，回来后就在一起了，我身边有几个
例子。另外，旅游，需要长时间几个人在一起，需要team work 解决很多问题，可以看
出一个人的个性，性格什... 阅读全帖 |
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c****t
发帖数: 19049 | 41 我一直在构思，想写两个小说，一个是关于月球的，一个是关于火星的。然而，月球的
，已经被女科幻作家凌晨写掉了，那便是《月球背面》，一部我很喜欢的小说。火星的
，如今也被另一位女科幻作家写掉了，那便是郝景芳的《流浪玛厄斯》，而且是三部曲
。我读了第一部后，感觉非常的好，同时也很遗憾———就是，自己再要写的话，恐怕
是写不过她们二位的了。
景芳写的是2190年的火星。其时，火星早已有了人类殖民，并且已与地球发生了星
际大战。景芳写战争停息之后的火星，与地球的关系在一种微妙的修复中。火星人与地
球人的纠葛，也极其地复杂。
我很诧异的是，柔情万种的中国科幻女作家们，都在把视角投向壮美而恐怖的太空
，像迟卉，也写出了《卡德米安墓场》这样的太空歌剧。我不知道，她们是否大刘（刘
慈欣）的信徒。在《流浪玛厄斯》的封底，我看到大刘的推荐：“景芳所创造的世界是
绝无仅有的———温馨的阳光中沐浴着金属的质感，唯美典雅的意境中贯穿着对两个世
界深刻的思考，在宁静的理性中洋溢着理想主义的激情，带我们去八千万公里外经历另
一种奇妙的人生。从那个火星红色沙漠上晶莹剔透的世界归来后，你以后的梦境将从黑
白变成彩色———... 阅读全帖 |
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a*****y
发帖数: 33185 | 42 ☆─────────────────────────────────────☆
akju (金斗爸) 于 (Sun Dec 5 08:53:41 2010, 美东) 提到:
发信人: Yisu (yisnotme), 信区: board
标 题: [申请/竞选] Yisu申请Wisdom版版主
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Dec 5 00:13:51 2010, 美东)
是否已阅读：1）《站规》2）《版务操作简易手册》?:
已阅
[申请ID]:
Yisu
[申请版面]:
Wisdom（佛道儒）
[申请职务]:
版主
[版务经验]:
曾任原该版版副
[申请纲领/制版方案]:
申请纲领:
我希望在这个版上,初学的人能得到帮助和支持, 精进的人能交流理行, 去伪存真, 灌
水的人可以快乐灌水, 让分享成为乐趣. 烦恼的人可以找到智慧, 得到平静和祥和.
积极传播佛道儒的智慧, 给自己和每一个有缘的人. 学佛要先学做人, 希望这里不但是
个讨论真理的地方, 也是个实践修行的地方. 让尊敬, 谦下, 平常 和 正直能成为本版
的标志.
制版方案: 从我做起
[版规草... 阅读全帖 |
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a*****y
发帖数: 33185 | 43 ☆─────────────────────────────────────☆
akju (金斗爸) 于 (Sun Dec 5 08:53:41 2010, 美东) 提到:
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我希望在这个版上,初学的人能得到帮助和支持, 精进的人能交流理行, 去伪存真, 灌
水的人可以快乐灌水, 让分享成为乐趣. 烦恼的人可以找到智慧, 得到平静和祥和.
积极传播佛道儒的智慧, 给自己和每一个有缘的人. 学佛要先学做人, 希望这里不但是
个讨论真理的地方, 也是个实践修行的地方. 让尊敬, 谦下, 平常 和 正直能成为本版
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S**U
发帖数: 7025 | 44 《金刚经》说的修行，我的看法跟浪子与 Yisu 差不多。先参考《摩诃般若波罗蜜经》一段经文。
龙树菩萨造《大智度论》卷四十八·释四念处品第十九
〔经〕佛告须菩提∶「菩萨摩诃萨摩诃衍，所谓四念处。何等四？须菩提！菩萨摩诃萨，内身中循身观，亦无身觉，以不可得故。外身中、内外身中循身观，亦无身觉，以不可得故。勤精进一心，除世间贪忧。内受、内心、内法，外受、外心、外法，内外受、内外心、内外法，循法观，亦无法觉，以不可得故。勤精进一心，除世间贪忧。须菩提！菩萨摩诃萨，云何内身中循身观？须菩提！若菩萨摩诃萨，行时知行，住时知住
，坐时知坐，卧时知卧，如身所行，如是知。须菩提！菩萨摩诃萨如是内身中循身观，勤精进一心，除世间贪忧。
复次，须菩提！菩萨摩诃萨，若来若去，视瞻一心，屈伸俯仰，服僧伽梨，执持衣钵，饮食、卧息，坐立、睡觉、语默，入禅、出禅，亦常一心。如是，须菩提！菩萨摩诃萨行般若波罗蜜，内身中循身观，以不可得故。
复次，须菩提！菩萨摩诃萨内身中循身观时，一心念∶入息时知入息，出息时知出息；入息长时知入息长，出息长时知出息长；入息短时知入息短，出息短时知出息短。譬如镟师，若镟师弟子，绳长知长，绳... 阅读全帖 |
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a*******s
发帖数: 1539 | 45 发信人: Star (Nevermore), 信区: Black_Soil
标 题: 捐款方法-淘宝版
发信站: 紫丁香社区 (Wed Dec 7 11:46:58 2011), 站内
http://wanglongchuan.taobao.com/
龙川的事情牵动了很多人的心，也得到了大家热心的帮助。在此再次对大家表达最真诚
的感谢！
作为同一个学校或者听说这件事而汇款的人，可能仅仅能够捐款一次。但是这对龙川来
说远远不够的。希望我们作为龙川的同班同学，每个人在这几年哪怕每个月省出100元
，对他来说就是很大的帮助！我们现在都刚刚工作，很多人想拿但是没法一下子拿出很
多的钱。从一个帖子中我们得到灵感：一个在外地上学的大学生，为了省下每个月家里
汇生活费的手续费，直接在淘宝上开了一个店，里面商品就是“我的生活费”，然后他
的妈妈每个月都购买一次就可以啦！省下了手续费，而且对于很多人来说，省去了去银
行汇款的麻烦，通过支付宝购买打款也没有任何手续费。很多同学每个月在网上交手机
费或者买衣服的同时就可以来为龙川做一点点的贡献。
基于对龙川长期帮助的寻求性以及支付宝捐款途径的0手续费，暂... 阅读全帖 |
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c**a
发帖数: 94 | 46 以前没有用过昆虫细胞,现在需要从SF9 细胞里表达蛋白并纯化. 之前试着用
lipofectamine
tranfect细胞, 没有收集到多少蛋白. 请求有经验的高手给个protocol或者方法,用什
么transfection
reagent比较好. 怎么lyse和纯化蛋白. 谢谢了. |
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C*******e
发帖数: 4348 | 47 谢谢sunnyday，还特意去帮我查了产品
怎么说呢，这种centrifugal filter unit我很怀疑会很快就堵住了
尤其像lysate这种蛋白浓度很高的东西
我就是想知道有没有办法粗分一下
事实是这样的，GST-tag表达蛋白以后有一多半都是GST（25 kDa）
比较少的部分是GST-fusion protein （50 kDa）
纯化的时候GST绑在柱子上
得到的目的蛋白只有一点点（1 liter culture得到300 ul * 1 mg/ml）
这个好像是个常见问题
好像有的可以通过额外连一段linker来解决
我就是想在不重新做construct的情况下
如果有办法可以一开始粗分一下，然后再上柱子，就方便多了
所以想的是有没有什么原始的生化方法可以粗分的 |
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s******r
发帖数: 2876 | 48 能不能用硫酸铵沉淀？
重做constructs显然要容易得多。
谢谢sunnyday，还特意去帮我查了产品
怎么说呢，这种centrifugal filter unit我很怀疑会很快就堵住了
尤其像lysate这种蛋白浓度很高的东西
我就是想知道有没有办法粗分一下
事实是这样的，GST-tag表达蛋白以后有一多半都是GST（25 kDa）
比较少的部分是GST-fusion protein （50 kDa）
纯化的时候GST绑在柱子上
得到的目的蛋白只有一点点（1 liter culture得到300 ul * 1 mg/ml）
这个好像是个常见问题
好像有的可以通过额外连一段linker来解决
我就是想在不重新做construct的情况下
如果有办法可以一开始粗分一下，然后再上柱子，就方便多了
所以想的是有没有什么原始的生化方法可以粗分的 |
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