m**********d
发帖数: 137 | 1 用YFP标记了肿瘤细胞，orthopotically transplate到裸鼠腹腔内某器官，用
fluorescence imaging来测量肿瘤生长
想问问版上做过类似实验的前辈，这样的实验有什么技术上的困难，多谢 |
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s******y
发帖数: 28562 | 2 差不多吧，或者有时候我们要在裸鼠上种癌症细胞的时候。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 3 去查了一下。那个实验是就是做了很多这样的实验，就是做的可降解的模型支架，
体外让细胞长好了，然后缝到裸鼠背上，相当于移植。老曹当年做的是耳朵。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 4 我连裸鼠都还没有买呢：）目前还在准备细胞中。
你什么时候看了就跟我说一声吧。 |
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h********n
发帖数: 4079 | 8 其实主要问题是如果有一点没脱干净, 对imaging的影响挺大的. |
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m**********d
发帖数: 137 | 10 用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系，稳定表达某doxycycline-inducible shRNA。
在in vitro测试phenotype很稳定
现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内，等tumor长起来，再开始给doxycycline
以及相应的treatment。现在的问题是，doxy该怎么给，文献上很多都用doxycycline
drinking water，可我听说doxycycline可能会precipitate，很难控制老鼠喝进去的量
；还有人用doxycycline的食物，但似乎也不大好控制doxy的量。
不知是否有人用过oral gavage，似乎这样可以准确地定量doxy，隔天通过gavage给
doxy不知是否可行？
请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统，它的doxy-inducible knockdown
efficiency和leakiness不知道还不好
谢谢 |
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w********r
发帖数: 1431 | 11 裸鼠的话不是很难。正常老鼠比较费眼神。
无它，多练，就几根静脉，看哪个顺手就扎哪个。
建议开始的时候从尾巴末端开始扎，扎坏了还可以挪到上面继续扎。
可以弄个50ml的falcon tube，割的短一点，盖子或者底部钻个洞，把老鼠塞进管子，
把尾巴从洞里掏出来，这样老鼠不会乱动。
不建议麻醉，感觉麻醉之后血流速度变慢 |
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c*z
发帖数: 157 | 12 你是分子生物学的课题组还是药理药剂的？
如果前者的话，在细胞层面做好了，delivery搞不定就僵在那里了
不过可能后续工作老板都会找collaborator给你们做 |
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s****9
发帖数: 932 | 13 你至少应该简单介绍一下你的抗原，cytokine，receptor？这个receptor是activation
receptor？如果是，那么receptor有没有redundency？你的antibody是agonist还是
antagonist？
没有这些info，怎么能够预测pitfall？ |
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m*******r
发帖数: 202 | 14 好的。谢谢您的提醒。
我用的抗原是一个新克隆鉴定的肿瘤高表达蛋白，功能实验证明它的表达可以显著地促
进肿瘤的生长。免疫组化和荧光标记实验显示它定位在细胞膜上，并且有胞外区。是不
是受体我们还没有实验证明。是否redundency我们也不清楚。我们希望制备的单克隆抗
体是抑制阻断这个肿瘤高表达蛋白的功能的，以此达到抑制肿瘤生长的目的。
谢谢!!!
activation |
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s****9
发帖数: 932 | 15 谢谢你的包子，看在包子的面子上，多说几句。
如果让提问题，可以提很多，
首先，做单抗的抗原是不是N Terminal，或者细胞外的部分。如果不是，抗体识别的
epitope很可能不是细胞外的部分。如果我做这个实验，首先就是把单抗结合上颜色（
eg. Alex488），用FACS染一下，看看能不能特异结合细胞外的抗原。
如果这个抗体识别的是细胞内的抗原。经典的免疫学认为，抗体不能够neutralize细胞
内的东西（当然，前年有篇PNAS说可以）。
如果可以识别胞外抗原，而且抗原是肿瘤特异的，那么很有意思。首先，应该看一下，
这个抗体对于抗原的结合能不能影响蛋白的功能。比如，overexpress 这个抗原之后，
加抗体，in vitro culture对肿瘤细胞的生长有没有影响。如果有，可以猜想它是一个
受体，抗体甚至有可能是个agonist。这样的话，这个project会变的很有意思。如果是
negative result，说明也推翻不了太多问题。
接下来，你当然可以直接打tumor（最好是overexpression的tumor把window放大）到
BALB/c上，然后打抗体看有... 阅读全帖 |
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c*z
发帖数: 157 | 18 lz也不要太绝望，你的课题和 HER2受体的herceptine 是一个路子
你的mAb已经拿到了么？如果还没有的话，你都不知道这个mAb是否binding在
functional region....
拿therapeutic antibody不像养做western的抗体这么简单，只要specific binding就
可以，你这个不是夹住蛋白身上任何部分就可以交差的。。。任重而道远啊
你加了这个蛋白细胞长的开心，不等于block了它就可以抑制细胞生长，其他通路或许
可以取代它，直接跳过这个蛋白让细胞生长
你的蛋白是受体还是配体倒是问题不大，block哪个都行
还有谢谢lz包子 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 19 不谢 都考古未名买买提 Bio 版的最近旧贴 得到的启发 没那些帖 俺就是一个Cre
mice 科盲
比如
楼主可以 结合楼下的跟贴
和以下的贴主 交流下 ERT2-Cre Mice genotyping Tips...
发信人: supersunday (Linda), 信区: Biology
标 题: ERT2怎么genotyping?
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 15 18:54:44 2013, 美东)
我们最近引进了两种Cre小鼠，一种是持续表达的，一种是诱导的(ERT2-Cre)。请问
ERT2怎么genotyping?怎么设计primer？我找了plasmid,是pCAG-ERT2CreERT2，没有找
到ERT2 site。
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31772553.html |
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l**********1
发帖数: 5204 | 20 Conti:
plus
多去参CSHLab 的有关年会 至少要了解年度的忽悠的新窍门 (+ +) or at least (+
-) 以防止旧 tips 已经失效喽 (- -)
pls refer,
Cancer Biology & Therapeutics
April 23 - 27, 2013
Abstract Deadline: February 8, 2013
Organizers:
ignored
HTTP: //meetings.cshl.edu/meetings/2013/tumbio13.shtml |
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b********e
发帖数: 50 | 21 一直有做一个抗体服务公司的想法，但国内好像这样的公司太多了。抗体药是目前很热
的一个领域，老鼠抗体需要人源化后才能成药。如果直接制备人单抗，是最好的选择。
有公司好像有人抗体基因老鼠，拿到不容易。如果用SCID或裸鼠，然后把它们的血液系
统用人血取代，是不是就可以通过免疫制备人抗体了呢？如果做这样一个公司的话，是
不是可行呢？ |
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P******r
发帖数: 966 | 22 干细胞治疗在角膜受伤致盲已经得到了应用，在深度烧伤治疗上也已经上了临床。
日本一个group已经能够利用有限的人的表皮和真皮干细胞扩增然后在裸鼠上重组出毛
囊长出了毛发，那么这项技术离用于临床（毛囊移植治疗秃头）有多远？FDA不批干细
胞治疗的考虑在哪？这项技术的安全性如何通过实验证实？
很想听听大家都看法。 |
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J********3
发帖数: 3151 | 23 STAP细胞移植至裸鼠产生“畸胎瘤”的肿瘤生成实验等4张显微镜图片，作为证明STAP
细胞可变成各种细胞的数据的一部分，这些图片酷似小保方博士论文中由骨髓细胞变化
而成的细胞图片。.
若山就文指出：“在事关根基的重要之处有错误。看着图片，越來越不明白STAP細胞是
什麼了。”。 |
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P******r
发帖数: 966 | 24 据说黑色素瘤的细胞的恶性很大，在非裸鼠中也能成瘤。如果进入实验者体内的话有可
能可以逃过免疫系统的攻击。而一般其它肿瘤细胞系没有这个特性。这个说法是真的吗？
黑色素瘤细胞系如果在实验室培养需要注意什么？ |
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b***2
发帖数: 348 | 25 直接把我的跟帖从菌斑转过来：
我来和诗一首，聊以自嘲。
手持一把移液枪
生物男女干活忙
凝胶电源嗡嗡叫
皮西阿仪嘟嘟响
拉开橱子海拉舞
拧起笼儿裸鼠慌
内嵌射尔塞恩斯
廿一世纪最荣光 |
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a*******5
发帖数: 50 | 26 看见大家在讨论药物化合物筛选，我也说说我的看法，个人意见，仅供参考，呵呵。
其实药物化合物筛选绝对不是药物开发的限速步骤，HTS是效率很高的，相对于整个药
物开发来说，是既不费钱也不费力又不费时间的一步，所以这是主流，结构和计算机的
辅助设计一般也就是用来优化已知的化合物，或是小实验用来玩玩的。如果一个位点被
证明有商业价值，几年内，就会有各种的抑制剂。就像是vegf/vegfr， 这10几年来，
有不下十几种药物投入临床了。其实这反而证明了这30年生物发展的成果，设计一套细
胞水平的筛选系统，并不是难事。现在化合物筛选的问题是化合物库的问题。 很多有
效的药物其实是很难合成的，是从植物中提取的，像是紫杉醇taxol，这种化合物肯定
还有，但是现在的化合物库很难包括这种大分子。这种天然产物的筛选都是国家力量的
结果，是钱砸出来的，例如紫杉醇或是青蒿素。
其实最重要的问题，还是即使有抑制剂，没有动物实验或是人体试验，根本不知道这个
抑制剂有没有用，其实这也是现在生物研究的局限性。大部分抑制剂，在裸鼠上就已经
不行了，就靠p value 证明有效，到了人上就更没法说了。而且很难推测一个药同... 阅读全帖 |
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b*****n
发帖数: 1841 | 27 看别人的文章，同组肿瘤大小非常一致，但是在自己手里总是大小不一。
我们在肿瘤细胞注射的时候已经尽量保持一致了，比如位置，下针深浅等等，但是还是
大小不一，有的同组会差别几倍的重量。
不知道熟悉这个实验的朋友有什么经验传授一下。
谢谢！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 28 能一致就奇怪了。这个东西就是差异很大的，主要在于你打针的时候不是每次都能打进
同样多的细胞的。
不过，注意一下以下几个东西会有帮助：
1。抽细胞之前一定要重新晃一晃悬浮一下。
2。抽完细胞之后立刻注射，千万不要等，不然细胞就又沉下来了。注射的时候最好把
老鼠尽量接近和地面垂直角度（只能说尽量，不要让老鼠感到不舒服而挣扎的程度为止
），让你的针头走向也尽量接近和地面垂直的角度，这样大部分细胞才能打进去。 |
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D***a
发帖数: 516 | 29 另外一点经验：如果你的细胞一百万个就能成瘤，注射一千万。 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 30 细胞消化彻底一点
注射的时候找到体侧的皮褶进针，扎深点，慢慢拔针。这样不容易被挤出来，然后多打
一点
有些肿瘤细胞可以打的相当一致。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 32 能不能多解释一下这个？
如果注射一千万，会不会导致瘤子长得太快而看不出实验组和对照组的差别？ |
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D***a
发帖数: 516 | 33 没什么科学依据，就是个人经验。如果细胞注射的少，肿瘤要一个月才长大，大小肯定
不均匀。长得越快的大小越均匀。 |
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A******y
发帖数: 2041 | 34 This is how I do it. You inject cells with or without matrix gel. You want
to make sure the xenograft establishes itself and start treatment at around
100mm3 (entering log growth phase). That's how you establish the baseline
value and day 0 for each mouse. The experiment can be staggered for mice
within the same group. I just love when people tell me that they started
treatment right after cell injection without establishing the tumor baseline
because I can just reject the paper based on ba... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 35 你们给的时间太短了吧？
我们一般都要等三个星期之后肿瘤才长得比较明显，然后三到五星期之内才给药处理。
第2 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 36 一般两周内不量。
三四周以后的肿瘤才是真的活肿瘤。
到30-50mm3以后再给药
第2 |
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b*****n
发帖数: 1841 | 38 期望达人继续解惑。此问题已经困扰我很久了，损失很多时间和金钱。
谢谢！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 39
我们一般用雄鼠。但是其实无所谓，除非你们要做和性别有关的癌症。
这个差别无所谓，只要你consistent 的选用一个即可。注意老鼠买回来之后要等一个
星期让他们熟悉环境才能做试验。
我们一般用dPBS （不是PBS)
一般是后背部。除非你有什么特别要求，
将皮拉起来。直接进针容易扎到肉。 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 40 右侧，把老鼠抓住向大拇指方向稍微弯一下，体侧就会出现一条皮褶
针头顺着戳进去稍微向上挑一下就行了。
这个地方的好处是皮肤比较松弛不会被挤出来，缺点是如果打的太靠下肿瘤长大后可能
会影响爬行。 |
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b*********1
发帖数: 1054 | 43 现在都认T and B double knockout的裸鼠，然后用这种老鼠嫁接病人肿瘤。普通的裸
鼠病人肿瘤嫁接很难成活。可是这种老鼠很贵，另外病人样品也不好获得。
cancer |
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b*****n
发帖数: 1841 | 44 最近有一个很好的想法想要做，但是要求携带目的DNA的病毒能够很好地感染组织，试
过非常多的方法，都无法看到有效的感染。
我试过lentivirus (滴度在10^6)，不同种类的AAV（滴度在10^11）；试过用强免疫抑
制剂处理小鼠；试过用裸鼠来操作病毒感染，效果均很差（只有<10%细胞被感染。）。
病毒需要维持目的基因表达在一两个月左右即可。这个病毒体内感染组织的效率很低使
我的课题无法进行。版上若有熟悉这个领域的版友指点一二，定会感激不尽（散尽伪币
，尽管知道大家都不用了）。
期待在版友的指导下走过这个瓶颈，谢谢谢谢！ |
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s*********y
发帖数: 579 | 45 好得很。
2016中国生命科学领域十大进展公布，仇子龙上榜。春雨哥都没有上榜！！！
上海神经科学研究所仇子龙研究员等通过构建携带人类自闭症基因MECP2的转基因猴模
型及对MECP2转基因猴进行分子遗传学与行为学分析，发现MECP2转基因猴表现出类人类
自闭症的刻板行为与社交障碍等行为。此研究首次建立了携带人类自闭症基因的非人灵
长类动物模型，为深入研究自闭症的病理与探索可能的治疗干预方法提供了重要基础。
在该研究中，研究人员通过精巢异种移植，将幼年食蟹猴的精巢移植到裸鼠的背部，实
现了食蟹猴精巢提早成熟，并利用移植精巢组织内生成的精子成功获得了健康的F1代
MECP2转基因食蟹猴后代。该工作加速了食蟹猴的精子生成速度，缩短了食蟹猴的繁殖
周期，对于推动非人灵长类动物模型的应用具有重大意义。该研究成果发表于《自然》
（Nature， 2016，530：98–102）杂志上。 |
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n*********n
发帖数: 1534 | 46 Pauling是大嘴？Pauling为了证明Vc是有效的，篡改数据，服用大量Vc的裸鼠不仅
没有比对照组的存活率高，甚至得肿瘤的更高，这个难道还说他有credit吗？
Pauling这张大嘴是有名的，他这话是扯。
就事论事呗，Pauling 说这话，有点扯， 但不妨碍他的成绩。 科学结论
有错误，科学界能自我纠正。
中医界有人清理门户么， 能够清理门户么？ 整个根本上是无法证伪的体系，
评啥他错你对呢？ |
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a*i
发帖数: 1652 | 47 文章太长，没全看，看到质疑点：
“他列出四大疑点：一，他作为“核心人员”，对“人耳鼠”的产生细节一无所知；
二，曹谊林早在1997年就发表过相关论文，但回国参展之前，并无重复制作“人耳鼠”
；三，在展览期间，商庆新必须每晚用注射器抽出渗液，才能让裸鼠皮肤与支架贴合，
显现人耳形状，这种反应程度超出了预期；四，在交还“人耳鼠”时，他向曹谊林转达
了上海市科委的意见——将材料取出，证实是真的耳郭软骨，作为实验成果长期保留，
但不久那只“人耳鼠”“就离奇死亡”，“人耳”也就无从寻觅了。”
我觉得这些疑点非常合理，如果我是曹，这是一个很好的机会来向大众（学术界或老百
姓）阐述自己的研究成果：进展与不足。老实说，没有这个质疑，我都不知道曹为何人
。应该谢谢这些质疑，给了他一个介绍其研究成果的良机，远胜任何级别的大会报告。
一个踏实工作的研究者，比如我吧，是非常欢迎质疑的，反倒是很害怕别人盲目的相信
，或有任何夸大的理解。有些老美如果对他们稍有质疑，就像被踩了尾巴，是我非常非
常不能理解的事。 |
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s******o
发帖数: 7 | 48 副教授享受浙江大学教师（副教授）待遇。应聘者需在肿瘤学和体外、体内（裸鼠动物
模型）研究药物抗癌性能方面有良好的教育背景和较丰富的研究经验，并有良好的独立
研究能力和英文科技论文的写作能力，有肿瘤干细胞研究经验或激光共聚焦显微镜应用
、操作及维护者优先。有意应聘者请将详细简历和三位推荐人的联系方式 e-mail发送
到s****[email protected]。 |
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s******o
发帖数: 7 | 49 副教授享受浙江大学教师（副教授）待遇。应聘者需在肿瘤学和体外、体内（裸鼠动物
模型）研究药物抗癌性能方面有良好的教育背景和较丰富的研究经验，并有良好的独立
研究能力和英文科技论文的写作能力，有肿瘤干细胞研究经验或激光共聚焦显微镜应用
、操作及维护者优先。有意应聘者请将详细简历和三位推荐人的联系方式 e-mail发送
到s****[email protected]。 |
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e*e
发帖数: 116 | 50 “人体配件商店”并非天方夜谭
【多维新闻社27日电】再过10年、20年，或更短一些时间，标有“人体配件商店”名
称的专卖店将会在一定规模的医疗机构里出现。到时医生会介绍病人及其家属到这种
“人体配件商店”里，定制由病人自体细胞培养而成的组织或器官，然后经医生手术
替换下损伤或病变了的组织或器官。
据迈博网报导，这种“人体配件商店”并非天方夜谭，1995年上海第二医科大学附属
第九人民医院整形外科曹谊林教授在美国哈佛大学医学院组织工程学实验室做博士后
，在世界上第一个于裸鼠背上复制了一只惟妙惟肖的“人耳”，就是一个最能说明问
题的实例。
然而，这种“人体配件商店”之所以还迟迟未能开张，从组织工程学来说，主要是由
于复制人的组织或器官所需的“种子细胞”和“生物材料”的研究进展明显滞后。由
曹谊林教授担任首席科学家，领衔“组织工程的基本科学问题”这一国家重点基础研
究发展项目，就是为解决以“种子细胞”和“生物材料”为突破口的世界前沿研究课
题。说得具体些，就是要建立人胚胎干细胞，再将这些细胞诱导成复制人的组织或器
官所需要的成软骨干细胞、成骨干细胞、成纤维干细胞和成神经干细胞等，这样便解
决 |
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