s********l
发帖数: 58 | 1 1，我的试验长达5天，zvad只加一次可以吗？还是要没两天加一次？ 它是
irreversible inhibitor，应该来说我可以把细胞悬浮在很少的培养液里，然后可以使
它的浓度达到很高，过两个小时再多加培养液，把细胞种到板子里，是吗？
2，我的试验160 um的浓度，凋亡比80 少，是不是意味着我还要再加到320um，甚至
640um？
多谢大家了。 | p*******e
发帖数: 3 | 2 不知道第一个问题
我觉的第二个看实验目的了吧 我一般都是50 或者100um 我觉得能有抑制就说明问题了
，不需加那么高吧 | s********l
发帖数: 58 | 3 我也不想加那么高，不过我们的point是这个凋亡部分是caspase independent，要证明
这一点，就要排除我们的zvad用量不足这个可能。
很麻烦啊！
【在 p*******e 的大作中提到】
: 不知道第一个问题
: 我觉的第二个看实验目的了吧 我一般都是50 或者100um 我觉得能有抑制就说明问题了
: ，不需加那么高吧
| b********i
发帖数: 73 | 4 It is quite interesting to hear about caspase-independent apoptosis (actually first time), are u sure it is
apoptosis instead of necrosis, or autophagic cell death? Back to your question, three major papers from last
yeay (Xiaodong Wang, Jiahuai Han, Ka-Ming Chan), 20-50 uM zVAD was used to block pan-caspases
activation. In my hand, 20uM is also enough in most of situations. I do not think you need more than 100
uM.
【在 s********l 的大作中提到】
: 我也不想加那么高，不过我们的point是这个凋亡部分是caspase independent，要证明
: 这一点，就要排除我们的zvad用量不足这个可能。
: 很麻烦啊！
| s********l
发帖数: 58 | 5 谢谢您的答复。我们也是第一次遇到，查pubmed才知道caspase-independent
apoptosis。ZVAD在每个细胞系的合适用量应该也是细胞特异性的吧。同事用20uM也说
效果很好。
怎么区别apoptosis from necrosis, or autophagic cell death? 感觉我说的
apoptosis是一种广义的说法，我也不确定是否真的是apoptosis。
actually first time), are u sure it is
question, three major papers from last
to block pan-caspases
not think you need more than 100
【在 b********i 的大作中提到】
: It is quite interesting to hear about caspase-independent apoptosis (actually first time), are u sure it is
: apoptosis instead of necrosis, or autophagic cell death? Back to your question, three major papers from last
: yeay (Xiaodong Wang, Jiahuai Han, Ka-Ming Chan), 20-50 uM zVAD was used to block pan-caspases
: activation. In my hand, 20uM is also enough in most of situations. I do not think you need more than 100
: uM.
| p*****6
发帖数: 200 | 6 caspase independant的apop是有的,要看的是不是caspase independant apop而不
是necro,要不看看DNA laddering?
【在 s********l 的大作中提到】
: 谢谢您的答复。我们也是第一次遇到，查pubmed才知道caspase-independent
: apoptosis。ZVAD在每个细胞系的合适用量应该也是细胞特异性的吧。同事用20uM也说
: 效果很好。
: 怎么区别apoptosis from necrosis, or autophagic cell death? 感觉我说的
: apoptosis是一种广义的说法，我也不确定是否真的是apoptosis。
:
: actually first time), are u sure it is
: question, three major papers from last
: to block pan-caspases
: not think you need more than 100
| p*****6
发帖数: 200 | 7 对了,ZVD我一般用25um,不过你还可以试试其它caspase inhibitor,比如QVD,据实验
室人说,对一些cell line, QVD比ZVD好用.
【在 s********l 的大作中提到】
: 谢谢您的答复。我们也是第一次遇到，查pubmed才知道caspase-independent
: apoptosis。ZVAD在每个细胞系的合适用量应该也是细胞特异性的吧。同事用20uM也说
: 效果很好。
: 怎么区别apoptosis from necrosis, or autophagic cell death? 感觉我说的
: apoptosis是一种广义的说法，我也不确定是否真的是apoptosis。
:
: actually first time), are u sure it is
: question, three major papers from last
: to block pan-caspases
: not think you need more than 100
| b********i
发帖数: 73 | 8 Really? Could you please describe what mediates apoptotic cell death except
for caspases?
【在 p*****6 的大作中提到】
: caspase independant的apop是有的,要看的是不是caspase independant apop而不
: 是necro,要不看看DNA laddering?
| p*******e
发帖数: 3 | | p*3
发帖数: 45 | 10 From what I heard, 20uM is supposed to inhibit caspase 8. Higher
concentrations (50-100uM) is assumed necessary to inhibit other caspases. |
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