请教试验 - Biology版

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Biology版 - 请教试验

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相关话题的讨论汇总
话题: 试验话题: 细胞话题: pcr话题: 重复性话题: western

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j*****a
发帖数: 658

不知道为啥，我做得real-time PCR 比 western 重复性高太多了。想请教大家是不是
都这样。一般来说，real-time pcr能次次重复，一个数据三次就完成了。可是western
让我很frustrated啊。有时候根本不出好带，有时候有貌似差别，有时候差别又没有
了。我有很多疑问，在此请教班上高手，先谢谢了。
1。因为原代细胞的问题(从骨髓中培养），所以蛋白量不是很多，浓度比较低，一次
跑胶只能用5-10ug。是不是蛋白量低也会造成试验重复性低？
2. 还是因为蛋白浓度低，我用的是6x sds loading buffer, 这个会不会也造成试验重
复性低？相对1x loading buffer而言？
3. 这个问题和western无关，但是我也一直很疑惑。大家从组织中提取一种细胞的时候
，有没有细胞类型不单一的困扰？我是从骨髓中诱导破骨细胞，我感觉最后得到的不是
单一细胞型。总有一些stromal细胞。感觉这也会造成试验重复性的问题，但是real-
time pcr就没有问题，所以可能这并不是问题。
4. 我发现新鲜的抗体出来的带background很干净，如果

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