z****i 发帖数: 35 | 1 做IP,说明书里说是放在1.5mLEP管里做,因为我们的蛋白量大体积多,大概有40mL,就
放到50mL离心管里做了,加完抗体、Beads,过夜后清洗,按说明书里说的2500rpm 5min
,结果Beads只有少量沉淀,大部分都悬浮,后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来
珠子,简直郁闷死了,清洗的过程中损失了好多珠子,哭。想问问大家是不是50mL离心
管的体积太大了,需要把转速升高到10000rpm才行? |
p****p 发帖数: 3360 | 2 1. 2500rpm不是硬指标,算离心力吧。
2. 同样的离心力,长的管子需要离心的时间长些。
5min
【在 z****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 做IP,说明书里说是放在1.5mLEP管里做,因为我们的蛋白量大体积多,大概有40mL,就 : 放到50mL离心管里做了,加完抗体、Beads,过夜后清洗,按说明书里说的2500rpm 5min : ,结果Beads只有少量沉淀,大部分都悬浮,后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来 : 珠子,简直郁闷死了,清洗的过程中损失了好多珠子,哭。想问问大家是不是50mL离心 : 管的体积太大了,需要把转速升高到10000rpm才行?
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a***e 发帖数: 1010 | 3 其实可能是减速过程中,溶液把 beads 重新冲起来。你把 50 ml 分成几个 15ml 就没
事了. |
s******y 发帖数: 28562 | 4 Why don't you use the convenient column?
I never bother to use centrifuge to spin down beads in big volumes.
It is always difficult to spin down the beads after binding with proteins.
5min
【在 z****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 做IP,说明书里说是放在1.5mLEP管里做,因为我们的蛋白量大体积多,大概有40mL,就 : 放到50mL离心管里做了,加完抗体、Beads,过夜后清洗,按说明书里说的2500rpm 5min : ,结果Beads只有少量沉淀,大部分都悬浮,后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来 : 珠子,简直郁闷死了,清洗的过程中损失了好多珠子,哭。想问问大家是不是50mL离心 : 管的体积太大了,需要把转速升高到10000rpm才行?
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s******r 发帖数: 2876 | 5 那就不开刹车减速试试。
其实可能是减速过程中,溶液把 beads 重新冲起来。你把 50 ml 分成几个 15ml 就没
事了.
【在 a***e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 其实可能是减速过程中,溶液把 beads 重新冲起来。你把 50 ml 分成几个 15ml 就没 : 事了.
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v*******a 发帖数: 759 | 6 more info about the column please!
proteins.
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Why don't you use the convenient column? : I never bother to use centrifuge to spin down beads in big volumes. : It is always difficult to spin down the beads after binding with proteins. : : 5min
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s******s 发帖数: 13035 | 7 rpm是够了,时间太短,延长到半个小时试试。
5min只够beads跑到ep管的管底,想象你50ml的管子有多长
5min
【在 z****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 做IP,说明书里说是放在1.5mLEP管里做,因为我们的蛋白量大体积多,大概有40mL,就 : 放到50mL离心管里做了,加完抗体、Beads,过夜后清洗,按说明书里说的2500rpm 5min : ,结果Beads只有少量沉淀,大部分都悬浮,后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来 : 珠子,简直郁闷死了,清洗的过程中损失了好多珠子,哭。想问问大家是不是50mL离心 : 管的体积太大了,需要把转速升高到10000rpm才行?
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s******s 发帖数: 13035 | 8 btw, 千万别升到10,000,估计管子会裂的。
没有protection,一半5k/6k可以试试,有适合管底
形状的protection,最高估计也就8k了。
5min
【在 z****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 做IP,说明书里说是放在1.5mLEP管里做,因为我们的蛋白量大体积多,大概有40mL,就 : 放到50mL离心管里做了,加完抗体、Beads,过夜后清洗,按说明书里说的2500rpm 5min : ,结果Beads只有少量沉淀,大部分都悬浮,后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来 : 珠子,简直郁闷死了,清洗的过程中损失了好多珠子,哭。想问问大家是不是50mL离心 : 管的体积太大了,需要把转速升高到10000rpm才行?
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s******y 发帖数: 28562 | 9 bio-rad
Poly-Prep Chromatography Columns #731-1550
【在 v*******a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : more info about the column please! : : proteins.
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r****r 发帖数: 379 | 10 又见柱子。。。。。。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : bio-rad : Poly-Prep Chromatography Columns #731-1550
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z****i 发帖数: 35 | |
R*****o 发帖数: 14902 | 12 you can use smaller centrifuge tubes at a higher G rate.
Or, try the Oak Ridge centrifuge tubes. They can be used up to 50,000 g.
5min
【在 z****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 做IP,说明书里说是放在1.5mLEP管里做,因为我们的蛋白量大体积多,大概有40mL,就 : 放到50mL离心管里做了,加完抗体、Beads,过夜后清洗,按说明书里说的2500rpm 5min : ,结果Beads只有少量沉淀,大部分都悬浮,后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来 : 珠子,简直郁闷死了,清洗的过程中损失了好多珠子,哭。想问问大家是不是50mL离心 : 管的体积太大了,需要把转速升高到10000rpm才行?
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