z****i
发帖数: 35 | 1 做IP，说明书里说是放在1.5mLEP管里做，因为我们的蛋白量大体积多，大概有40mL,就
放到50mL离心管里做了，加完抗体、Beads,过夜后清洗，按说明书里说的2500rpm 5min
,结果Beads只有少量沉淀，大部分都悬浮，后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来
珠子，简直郁闷死了，清洗的过程中损失了好多珠子，哭。想问问大家是不是50mL离心
管的体积太大了，需要把转速升高到10000rpm才行？ |
p****p
发帖数: 3360 | 2 1. 2500rpm不是硬指标，算离心力吧。
2. 同样的离心力，长的管子需要离心的时间长些。
5min
【在 z****i 的大作中提到】
: 做IP，说明书里说是放在1.5mLEP管里做，因为我们的蛋白量大体积多，大概有40mL,就
: 放到50mL离心管里做了，加完抗体、Beads,过夜后清洗，按说明书里说的2500rpm 5min
: ,结果Beads只有少量沉淀，大部分都悬浮，后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来
: 珠子，简直郁闷死了，清洗的过程中损失了好多珠子，哭。想问问大家是不是50mL离心
: 管的体积太大了，需要把转速升高到10000rpm才行？
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a***e
发帖数: 1010 | 3 其实可能是减速过程中，溶液把 beads 重新冲起来。你把 50 ml 分成几个 15ml 就没
事了. |
s******y
发帖数: 28562 | 4 Why don't you use the convenient column?
I never bother to use centrifuge to spin down beads in big volumes.
It is always difficult to spin down the beads after binding with proteins.
5min
【在 z****i 的大作中提到】
: 做IP，说明书里说是放在1.5mLEP管里做，因为我们的蛋白量大体积多，大概有40mL,就
: 放到50mL离心管里做了，加完抗体、Beads,过夜后清洗，按说明书里说的2500rpm 5min
: ,结果Beads只有少量沉淀，大部分都悬浮，后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来
: 珠子，简直郁闷死了，清洗的过程中损失了好多珠子，哭。想问问大家是不是50mL离心
: 管的体积太大了，需要把转速升高到10000rpm才行？
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s******r
发帖数: 2876 | 5 那就不开刹车减速试试。
其实可能是减速过程中，溶液把 beads 重新冲起来。你把 50 ml 分成几个 15ml 就没
事了.
【在 a***e 的大作中提到】
: 其实可能是减速过程中，溶液把 beads 重新冲起来。你把 50 ml 分成几个 15ml 就没
: 事了.
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v*******a
发帖数: 759 | 6 more info about the column please!
proteins.
【在 s******y 的大作中提到】
: Why don't you use the convenient column?
: I never bother to use centrifuge to spin down beads in big volumes.
: It is always difficult to spin down the beads after binding with proteins.
:
: 5min
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s******s
发帖数: 13035 | 7 rpm是够了，时间太短，延长到半个小时试试。
5min只够beads跑到ep管的管底，想象你50ml的管子有多长
5min
【在 z****i 的大作中提到】
: 做IP，说明书里说是放在1.5mLEP管里做，因为我们的蛋白量大体积多，大概有40mL,就
: 放到50mL离心管里做了，加完抗体、Beads,过夜后清洗，按说明书里说的2500rpm 5min
: ,结果Beads只有少量沉淀，大部分都悬浮，后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来
: 珠子，简直郁闷死了，清洗的过程中损失了好多珠子，哭。想问问大家是不是50mL离心
: 管的体积太大了，需要把转速升高到10000rpm才行？
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s******s
发帖数: 13035 | 8 btw, 千万别升到10,000，估计管子会裂的。
没有protection，一半5k/6k可以试试，有适合管底
形状的protection，最高估计也就8k了。
5min
【在 z****i 的大作中提到】
: 做IP，说明书里说是放在1.5mLEP管里做，因为我们的蛋白量大体积多，大概有40mL,就
: 放到50mL离心管里做了，加完抗体、Beads,过夜后清洗，按说明书里说的2500rpm 5min
: ,结果Beads只有少量沉淀，大部分都悬浮，后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来
: 珠子，简直郁闷死了，清洗的过程中损失了好多珠子，哭。想问问大家是不是50mL离心
: 管的体积太大了，需要把转速升高到10000rpm才行？
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s******y
发帖数: 28562 | 9 bio-rad
Poly-Prep Chromatography Columns #731-1550
【在 v*******a 的大作中提到】
: more info about the column please!
:
: proteins.
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r****r
发帖数: 379 | 10 又见柱子。。。。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: bio-rad
: Poly-Prep Chromatography Columns #731-1550
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z****i
发帖数: 35 | |
R*****o
发帖数: 14902 | 12 you can use smaller centrifuge tubes at a higher G rate.
Or, try the Oak Ridge centrifuge tubes. They can be used up to 50,000 g.
5min
【在 z****i 的大作中提到】
: 做IP，说明书里说是放在1.5mLEP管里做，因为我们的蛋白量大体积多，大概有40mL,就
: 放到50mL离心管里做了，加完抗体、Beads,过夜后清洗，按说明书里说的2500rpm 5min
: ,结果Beads只有少量沉淀，大部分都悬浮，后来升高到4500rpm 5min也还是沉淀不下来
: 珠子，简直郁闷死了，清洗的过程中损失了好多珠子，哭。想问问大家是不是50mL离心
: 管的体积太大了，需要把转速升高到10000rpm才行？
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