e********r
发帖数: 147 | 1 目前我们基本证明一个调控蛋白不调控下游基因的转录，不影响mRNA的稳定性，也不影
响蛋白的稳定性，基本确定是在翻译水平调控下游基因翻译蛋白的量。
这样的话，是不是影响翻译效率的因素都要考虑一遍（比如mRNA二级结构、ribosome
binding, 延伸、终止......）？这样检测的东西也太多了吧！在做更精细的生化分析
之前，一般有没有什么比较好的遗传或其它方法可以先试一下？至少做几个有建设性提
示的粗糙实验？
另外查了一下，以前检测ribosome binding要先提取ribosome亚基，然后用引物延伸一
类的方法来检测与mRNA的binding，现在还这么干吗？感觉还是太复杂了一些。
先行感谢兄弟们的建议！ |
s******y
发帖数: 28562 | 2 You can first use in vitro translation to test whether the translation
efficiency is affected by that protein, before you do any thing further
【在 e********r 的大作中提到】
: 目前我们基本证明一个调控蛋白不调控下游基因的转录，不影响mRNA的稳定性，也不影
: 响蛋白的稳定性，基本确定是在翻译水平调控下游基因翻译蛋白的量。
: 这样的话，是不是影响翻译效率的因素都要考虑一遍（比如mRNA二级结构、ribosome
: binding, 延伸、终止......）？这样检测的东西也太多了吧！在做更精细的生化分析
: 之前，一般有没有什么比较好的遗传或其它方法可以先试一下？至少做几个有建设性提
: 示的粗糙实验？
: 另外查了一下，以前检测ribosome binding要先提取ribosome亚基，然后用引物延伸一
: 类的方法来检测与mRNA的binding，现在还这么干吗？感觉还是太复杂了一些。
: 先行感谢兄弟们的建议！
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e********r
发帖数: 147 | 3 Many thanks. But I'm afraid that in vitro translation could not work in my
case because the regulatory protein seems control downstream genes
indirectly. |
