h********n
发帖数: 4079 | 1 我看通常tet-on/tet-off的系统都要两个plasmid, 一个表达rtTA, 一个是tet response element, 为啥不能在一个上搞定呢?
比如 promoter A-rtTA-IRES-TRE-gent of interest
各位高人能不能说说?
谢谢 | s******r
发帖数: 2876 | 2 能在一个vector上用，
比如open biosystem的TRIPZ，
但是你这个IRES-TRE似乎搞得太复杂。
我看通常tet-on/tet-off的系统都要两个plasmid, 一个表达rtTA, 一个是tet
response element, 为啥不能在一个上搞定呢?
比如 promoter A-rtTA-IRES-TRE-gent of interest
各位高人能不能说说?
谢谢
【在 h********n 的大作中提到】
: 我看通常tet-on/tet-off的系统都要两个plasmid, 一个表达rtTA, 一个是tet response element, 为啥不能在一个上搞定呢?
: 比如 promoter A-rtTA-IRES-TRE-gent of interest
: 各位高人能不能说说?
: 谢谢
| w*e
发帖数: 740 | 3 JAX 实验室已经有好多个老鼠是这么做出来的了。
优点很多了，缺点就是别的实验室想只用rtTA部分，而不想用TETO-后面的基因就比较
麻烦，因此分开设计方便以后排列组合不同的老鼠。
response element, 为啥不能在一个上搞定呢?
【在 h********n 的大作中提到】
: 我看通常tet-on/tet-off的系统都要两个plasmid, 一个表达rtTA, 一个是tet response element, 为啥不能在一个上搞定呢?
: 比如 promoter A-rtTA-IRES-TRE-gent of interest
: 各位高人能不能说说?
: 谢谢
| h********n
发帖数: 4079 | 4 谢谢.
IRES-TRE这个为啥太复杂呢? 我看很多人lentivirus上带两个基因的不都这么干吗? 不好意思, 我对virus表达没啥经验.
【在 s******r 的大作中提到】
: 能在一个vector上用，
: 比如open biosystem的TRIPZ，
: 但是你这个IRES-TRE似乎搞得太复杂。
:
: 我看通常tet-on/tet-off的系统都要两个plasmid, 一个表达rtTA, 一个是tet
: response element, 为啥不能在一个上搞定呢?
: 比如 promoter A-rtTA-IRES-TRE-gent of interest
: 各位高人能不能说说?
: 谢谢
| h********n
发帖数: 4079 | 5 原来如此, 谢谢.
【在 w*e 的大作中提到】
: JAX 实验室已经有好多个老鼠是这么做出来的了。
: 优点很多了，缺点就是别的实验室想只用rtTA部分，而不想用TETO-后面的基因就比较
: 麻烦，因此分开设计方便以后排列组合不同的老鼠。
:
: response element, 为啥不能在一个上搞定呢?
| w*e
发帖数: 740 | 6 估计楼上说你复杂是考虑到IRES的效率问题。
大部分IRES后面的基因只作为REPORTER GENE，例如GFP之类证明IRES之前的基因的确表
达了（至少mRNA水平上）。但IRES之后翻译的效率往往之后之前部分的1/3-1/4。所以
整个TRE就很难保证TRE的翻译水平了。
不好意思, 我对virus表达没啥经验.
【在 h********n 的大作中提到】
: 谢谢.
: IRES-TRE这个为啥太复杂呢? 我看很多人lentivirus上带两个基因的不都这么干吗? 不好意思, 我对virus表达没啥经验.
| h********n
发帖数: 4079 | 7 原来如此. 谢谢.
【在 w*e 的大作中提到】
: 估计楼上说你复杂是考虑到IRES的效率问题。
: 大部分IRES后面的基因只作为REPORTER GENE，例如GFP之类证明IRES之前的基因的确表
: 达了（至少mRNA水平上）。但IRES之后翻译的效率往往之后之前部分的1/3-1/4。所以
: 整个TRE就很难保证TRE的翻译水平了。
:
: 不好意思, 我对virus表达没啥经验.
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