t*******k
发帖数: 87 | 1 困扰很久了，想请教做ubiquitin的大牛：
把纯化的ubiquitin单体SDS电泳，考染一条带没问题，但用ubiquitin抗体做western，
总有一条大小为diubiquitin的条带出现，关键是这个条带在后续的pulldown实验中被
富集，不知道ubiquitin是不是能够自动聚集成多体啊，可能是非共价连接吗？谢谢 |
t*******k
发帖数: 87 | 2 或者，有没有人看到文献提到ubiquitin经过100C加热会dimerize呢？
抱歉，问题太专业了，和本版气氛不太和谐， 呵呵 |
O******e
发帖数: 4845 | 3 How did you purify your oligomeric ubiquitin? No contamination of dimers or
higher forms?
【在 t*******k 的大作中提到】
: 困扰很久了，想请教做ubiquitin的大牛：
: 把纯化的ubiquitin单体SDS电泳，考染一条带没问题，但用ubiquitin抗体做western，
: 总有一条大小为diubiquitin的条带出现，关键是这个条带在后续的pulldown实验中被
: 富集，不知道ubiquitin是不是能够自动聚集成多体啊，可能是非共价连接吗？谢谢
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t*******k
发帖数: 87 | 4 我用了不同来源的ＵB，包括公司买的野生型和突变体，结果是一样的。公司的人说和
加热有关，不知道谁遇到过类似情况？ |
m******h
发帖数: 32 | 5
＃＃不是大牛，但是跑过这个胶，呵呵，＃＃
＃＃我用12％的胶也没有带，后来换到15％就看见了。＃＃
但用ubiquitin抗体做western，
被富集，
＃＃关键是看你用什么来pulldown吧？＃＃
不知道ubiquitin是不是能够自动聚集成多体啊，
＃＃应该不会吧，没有酶催化的话。＃＃
可能是非共价连接吗？谢谢
【在 t*******k 的大作中提到】
: 困扰很久了，想请教做ubiquitin的大牛：
: 把纯化的ubiquitin单体SDS电泳，考染一条带没问题，但用ubiquitin抗体做western，
: 总有一条大小为diubiquitin的条带出现，关键是这个条带在后续的pulldown实验中被
: 富集，不知道ubiquitin是不是能够自动聚集成多体啊，可能是非共价连接吗？谢谢
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g*****y
发帖数: 6325 | 6 有可能和加热有关。有的蛋白不能加热，加热就aggregate. 我以前做得蛋白从来不加
热。
【在 t*******k 的大作中提到】
: 我用了不同来源的ＵB，包括公司买的野生型和突变体，结果是一样的。公司的人说和
: 加热有关，不知道谁遇到过类似情况？
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t*******k
发帖数: 87 | 7 我和公司的人联系了一下，很可能就是这个原因。
【在 g*****y 的大作中提到】
: 有可能和加热有关。有的蛋白不能加热，加热就aggregate. 我以前做得蛋白从来不加
: 热。
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