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Biology版 - 该如何分开与insert大小相近的vector呢?
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请问一个gateway clone问题也问gateway vector: 有没有可以同时放shRNA和cDNA的
question about polyA clone能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector
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请大家推荐一个克隆的vector?关于质粒去磷处理,问个比较弱的问题
问个sequencing的初级问题请大家帮忙看看如何能够编辑一下这个vector的sequence,谢谢
相关话题的讨论汇总
话题: vector话题: sequence话题: xl话题: topo话题: 分开
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1 (共1页)
M****m
发帖数: 2142
1
酶切后我的gene 是3.3 vector是 3.4,该怎么跑胶才能把他俩分开我好回收我的片断
?我用的PcR-XL-TOPO,vector其他区域有没有可以被酶切的这样vector size变小就可
以回收我的片断了?或者跑0.5%的DNA gel跑远些 可行吗?
m**z
发帖数: 787
2
should increase gel concentration not decrease ba
vector usually has other restriction sites you can use for your purpose

【在 M****m 的大作中提到】
: 酶切后我的gene 是3.3 vector是 3.4,该怎么跑胶才能把他俩分开我好回收我的片断
: ?我用的PcR-XL-TOPO,vector其他区域有没有可以被酶切的这样vector size变小就可
: 以回收我的片断了?或者跑0.5%的DNA gel跑远些 可行吗?

y******8
发帖数: 1764
3
cut the vector into halves.
M****m
发帖数: 2142
4
3。5 kb呀,胶浓度大不是分不开大片段了么,要是小于200的好像浓度大对,哪里可以
找到酶切位点呢,网上只有MCS的那些 没有其他部位的sequence。。。

【在 m**z 的大作中提到】
: should increase gel concentration not decrease ba
: vector usually has other restriction sites you can use for your purpose

M****m
发帖数: 2142
5
用啥切?@@。。。。

【在 y******8 的大作中提到】
: cut the vector into halves.
c******r
发帖数: 3778
6
多数vector的p/k gene里面都有一个切点,你找找看

【在 M****m 的大作中提到】
: 用啥切?@@。。。。
y******8
发帖数: 1764
7
check the PcR-XL-TOPO vector sequence.

【在 M****m 的大作中提到】
: 用啥切?@@。。。。
M****m
发帖数: 2142
8
如何找呢?我google了没找到还。。。

【在 c******r 的大作中提到】
: 多数vector的p/k gene里面都有一个切点,你找找看
a****k
发帖数: 1130
9
是应该浓度大一点来分,前阵子也遇到同样的问题,Topo-XL和一个3kb多一点的基因,
我们postdoc试了0.6%左右的胶,结果根本分不开,反而后来我们用了1%还是稍微再高一
点的就分开了。另外,vector的sequence网上没有吗?

【在 M****m 的大作中提到】
: 3。5 kb呀,胶浓度大不是分不开大片段了么,要是小于200的好像浓度大对,哪里可以
: 找到酶切位点呢,网上只有MCS的那些 没有其他部位的sequence。。。

M****m
发帖数: 2142
10
哪里有呢?还没找到全长的,而且不知道这种conmercial的人家给不给你全场 ,,,

【在 y******8 的大作中提到】
: check the PcR-XL-TOPO vector sequence.
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请大家推荐一个克隆的vector?TA 克隆
问个sequencing的初级问题求推荐mac里面的读sequence和alignment的软件!
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a***e
发帖数: 1010
11

------------
0.6% ?


【在 a****k 的大作中提到】
: 是应该浓度大一点来分,前阵子也遇到同样的问题,Topo-XL和一个3kb多一点的基因,
: 我们postdoc试了0.6%左右的胶,结果根本分不开,反而后来我们用了1%还是稍微再高一
: 点的就分开了。另外,vector的sequence网上没有吗?

M****m
发帖数: 2142
12
啊,根我很类似呀,我用的1%也没分开,还有你前面说的6%是不是0.6%?@@
他们网站只有MCS。。。能再帮我问问么,郁闷死了,赫赫

【在 a****k 的大作中提到】
: 是应该浓度大一点来分,前阵子也遇到同样的问题,Topo-XL和一个3kb多一点的基因,
: 我们postdoc试了0.6%左右的胶,结果根本分不开,反而后来我们用了1%还是稍微再高一
: 点的就分开了。另外,vector的sequence网上没有吗?

y******8
发帖数: 1764
13
sequence
http://tools.invitrogen.com/content/sfs/vectors/pcrxltopo_seq.txt

【在 M****m 的大作中提到】
: 哪里有呢?还没找到全长的,而且不知道这种conmercial的人家给不给你全场 ,,,
a****k
发帖数: 1130
14
嗯。。是打错了,0.6%
帮你查了一下,这个是vecter sequence的链接
http://tools.invitrogen.com/content/sfs/vectors/pcrxltopo_seq.txt

【在 M****m 的大作中提到】
: 啊,根我很类似呀,我用的1%也没分开,还有你前面说的6%是不是0.6%?@@
: 他们网站只有MCS。。。能再帮我问问么,郁闷死了,赫赫

M****m
发帖数: 2142
15
谢谢!我真笨哪 ,赫赫

【在 y******8 的大作中提到】
: sequence
: http://tools.invitrogen.com/content/sfs/vectors/pcrxltopo_seq.txt

a****k
发帖数: 1130
16
您老人家眼力真好啊。。

【在 a***e 的大作中提到】
:
: ------------
: 0.6% ?
:

M****m
发帖数: 2142
17
谢谢谢谢!都是好人回头发包子,赫赫

【在 a****k 的大作中提到】
: 嗯。。是打错了,0.6%
: 帮你查了一下,这个是vecter sequence的链接
: http://tools.invitrogen.com/content/sfs/vectors/pcrxltopo_seq.txt

c******r
发帖数: 3778
18
ft,你没有什么DNA分析酶切软件?看看有啥酶就好了嘛。
要是你实在没有好用的,就凑合试试这个:
http://tools.neb.com/NEBcutter2/index.php

【在 M****m 的大作中提到】
: 如何找呢?我google了没找到还。。。
T**********t
发帖数: 1604
19
commercial的vector也应该给全序列的,不给的话谁敢用。。。
M****m
发帖数: 2142
20
有软件没找到序列啦现在解决了~~~thanks~

【在 c******r 的大作中提到】
: ft,你没有什么DNA分析酶切软件?看看有啥酶就好了嘛。
: 要是你实在没有好用的,就凑合试试这个:
: http://tools.neb.com/NEBcutter2/index.php

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也问gateway vector: 有没有可以同时放shRNA和cDNA的关于质粒去磷处理,问个比较弱的问题
能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector请大家帮忙看看如何能够编辑一下这个vector的sequence,谢谢
老革命遇到了新问题:问个克隆基因的问题怎么有效的找到transposon insertion的位置?
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a***e
发帖数: 1010
21
等你开始在显微镜下挑一段时间突变体就知道眼力好是多么重要。 :)

【在 a****k 的大作中提到】
: 您老人家眼力真好啊。。
c******r
发帖数: 3778
22
正是commrecial的才有全序列。home made的多数都是手画一张图,哈哈哈
不过有时候commercial的序列藏得比较深,不好找哈

【在 T**********t 的大作中提到】
: commercial的vector也应该给全序列的,不给的话谁敢用。。。
a****k
发帖数: 1130
23
我原先在显微镜底下剖两个小时果蝇都觉得站起来之后看不清东西了。。
你们做虫子的screen每天要看多少小时的啊?

【在 a***e 的大作中提到】
: 等你开始在显微镜下挑一段时间突变体就知道眼力好是多么重要。 :)
c******r
发帖数: 3778
24
解决就好啦,哈哈

【在 M****m 的大作中提到】
: 有软件没找到序列啦现在解决了~~~thanks~
m**z
发帖数: 787
25
usually higher concentration gives you better resolution, but will run very
slowly

【在 M****m 的大作中提到】
: 3。5 kb呀,胶浓度大不是分不开大片段了么,要是小于200的好像浓度大对,哪里可以
: 找到酶切位点呢,网上只有MCS的那些 没有其他部位的sequence。。。

h******g
发帖数: 1521
26
把vector给chop了,再收insert,我上次也是一不小心没注意,搞得那么相近,最后筛
选可苦了我,老有污染,最后实在受不了了,就直接pcr产物进终极vector。
a****o
发帖数: 1786
27
There is usually Pvu II and Sca I site in the backbone of vectors. Many
vectors were from pBR322 or pUC19.
1 (共1页)
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请大家帮忙看看如何能够编辑一下这个vector的sequence,谢谢question about polyA clone
怎么有效的找到transposon insertion的位置?大家有什么好用的lentivirus expression vector推荐么?
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mammalian cells transfection 后 integration 的效率大概是多少?问个sequencing的初级问题
分子菜鸟请教一个质粒克隆的问题最近做一个克隆subcloning很郁闷!
【关于Gibson Assembly】问问大家?TA 克隆
有谁用过pET27b(+)这个vector?求推荐mac里面的读sequence和alignment的软件!
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