S*****s
发帖数: 287 | 1 我比较土，这个技术 Nature，PNAS 上都发了一堆文章了我才从 Sigma 的 rep 那里听
说。查一查文章觉得蛮吸引人，所以过来八一八。版上有没有牛人正在用这个技术？好
不好做？看起来试剂什么的都是 Sigma 垄断，做起来费用高不高？我目前正在用 BAC
做一个 transgenic mouse line，将来打算做 knock-in mouse。如果我不做 gene-
targetting 而改用 zfn 来做 knock-in，能不能降低技术难度？谢谢各位指教！ |
a********k
发帖数: 2273 | 2 zfn是给那些没有KO的模式生物用的，主要产生移码突变，不能用来做KI。
做起来和普通的KO一样贵，没啥优势。
BAC
【在 S*****s 的大作中提到】
: 我比较土，这个技术 Nature，PNAS 上都发了一堆文章了我才从 Sigma 的 rep 那里听
: 说。查一查文章觉得蛮吸引人，所以过来八一八。版上有没有牛人正在用这个技术？好
: 不好做？看起来试剂什么的都是 Sigma 垄断，做起来费用高不高？我目前正在用 BAC
: 做一个 transgenic mouse line，将来打算做 knock-in mouse。如果我不做 gene-
: targetting 而改用 zfn 来做 knock-in，能不能降低技术难度？谢谢各位指教！
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j*b
发帖数: 341 | 3 同问，有没有用这个办法做human ESC.？？？？？
老鼠的同源重组效率已经很高了，没必要用zinc。
BAC
【在 S*****s 的大作中提到】
: 我比较土，这个技术 Nature，PNAS 上都发了一堆文章了我才从 Sigma 的 rep 那里听
: 说。查一查文章觉得蛮吸引人，所以过来八一八。版上有没有牛人正在用这个技术？好
: 不好做？看起来试剂什么的都是 Sigma 垄断，做起来费用高不高？我目前正在用 BAC
: 做一个 transgenic mouse line，将来打算做 knock-in mouse。如果我不做 gene-
: targetting 而改用 zfn 来做 knock-in，能不能降低技术难度？谢谢各位指教！
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g******1
发帖数: 244 | 4 Is this targeted mutagenesis or random? |
s******r
发帖数: 2876 | 5 Jaenish lab好像有人做过。
同问，有没有用这个办法做human ESC.？？？？？
老鼠的同源重组效率已经很高了，没必要用zinc。
BAC
【在 j*b 的大作中提到】
: 同问，有没有用这个办法做human ESC.？？？？？
: 老鼠的同源重组效率已经很高了，没必要用zinc。
:
: BAC
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a***e
发帖数: 1010 | 6 It is targeted.
However, there is also a concern of specificity and the available zinc
nucleases are also not unlimited.
【在 g******1 的大作中提到】
: Is this targeted mutagenesis or random?
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j*b
发帖数: 341 | 7 Efficient targeting of expressed and silent genes in human ESCs and iPSCs
using zinc-finger nucleases"
Nature Biotechnology, August 13, 2009
【在 a********k 的大作中提到】
: zfn是给那些没有KO的模式生物用的，主要产生移码突变，不能用来做KI。
: 做起来和普通的KO一样贵，没啥优势。
:
: BAC
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j*b
发帖数: 341 | 8 据说很难搞。
【在 s******r 的大作中提到】
: Jaenish lab好像有人做过。
:
: 同问，有没有用这个办法做human ESC.？？？？？
: 老鼠的同源重组效率已经很高了，没必要用zinc。
: BAC
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x**w
发帖数: 112 | 9 很多做鱼的试验室在弄
最近技术又有点新的进展，6月开会的时候两个哥们（不同实验室的）宣布可以在2个月
内拿到
具体是在E.coli里面用single hybrydization 先筛一次OPEN pool library的库找
fingers, 然后用Melt Analysis 来比较高效率地筛鱼。。。
隔壁实验室弄了快一年，貌似还没拿到，不过估计没有用这个新的东东。。。 |
a****o
发帖数: 1786 | 10 看看两伙人在NatureMethods上打架就知道没宣传的那么神奇。Unexpected failure
rates for modular assembly of engineered zinc fingers. |
S*****s
发帖数: 287 | 11 谢谢楼上各位。我正在看这方面的文章，特别是七楼 jcb 老兄列出来的那篇，越看越
觉得不错。我做的蛋白目前没有 endogenous cell line，而我研究的方向也包括 mRNA
intron splicing。现在我都是用引入了 CMV promoter 的 BAC DNA 做 transfection
。看看这些文章我倒是想买点这个 ZFN 然后把 HEK293T 细胞的基因组改一改，改造出
一个可以 endogenous cell line 来。明天和 sigma 的 rep 继续谈谈。 |
A******y
发帖数: 2041 | 12 Sigma's technology is from Sangamo biosciences where it acquired the license
of the technology from Scripps. The technology has been in development for
over 10 years and Sagamo has over 10k of sequence specific ZFN. Academic
labs are playing catch up, and I bet Sigma can do in two months where
academic lab will take years (because Sangamo already did it but all
propitiatory). |
S*****s
发帖数: 287 | 13 万念俱灰了。看了 Sigma Rep 给我的报价，这个 ZFN 也太贵了。他们设计好的要一万
两千五，我自己设计的要两万五，摆明了要凑五十到一百个二百五才能开始做实验，还
不算实验开始之后培养细胞和确认克隆的花费。这个技术太华而不实了。现在就算我做
一个 KO 或者 KI 老鼠也用不了两万五啊。
Knockout ZFNs
Ready to Use, Validated ZFNs designed to knockout a gene in human cells.
Currently there are 100 ZFNs in this category.
$12,500
4-week lead time
For a list validated ZFNs, please click on the following weblink:
http://www.sigmaaldrich.com/life-science/functional-genomics-and-rnai/functional-genomics-products.html?TablePage=102033370
Cu |
S*****s
发帖数: 287 | 14 万念俱灰了。看了 Sigma Rep 给我的报价，这个 ZFN 也太贵了。他们设计好的要一万
两千五，我自己设计的要两万五，摆明了要凑五十到一百个二百五才能开始做实验，还
不算实验开始之后培养细胞和确认克隆的花费。这个技术太华而不实了。现在就算我做
一个 KO 或者 KI 老鼠也用不了两万五啊。
Knockout ZFNs
Ready to Use, Validated ZFNs designed to knockout a gene in human cells.
Currently there are 100 ZFNs in this category.
$12,500
4-week lead time
For a list validated ZFNs, please click on the following weblink:
http://www.sigmaaldrich.com/life-science/functional-genomics-and-rnai/functional-genomics-products.html?TablePage=102033370
Cu |
