V**F
发帖数: 164 | 1 想clone一段 23kb genomic region.
请推荐一个extra long PCR kit.
谢谢！ |
m*********7
发帖数: 111 | 2 Roche Expand Long Template PCR system. 但23kb太长了，利用酶切位点把多个PCR
fragment 连起来比较靠谱
【在 V**F 的大作中提到】
: 想clone一段 23kb genomic region.
: 请推荐一个extra long PCR kit.
: 谢谢！
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B***e
发帖数: 46 | |
C*******e
发帖数: 4348 | 4 同顶这个
不过23kb还是有点长
我用这个takara的p过12kb
【在 B***e 的大作中提到】
: Takara LA Taq
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S*****s
发帖数: 287 | 5 你可以买一个含有这段序列的 BAC，然后做 BAC retrieval 就可以。具体可以看看这
篇文章
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC169968/
这个方法克隆片段不会引入突变，而且得到的产物可以直接进入下一步实验，花的时间
也比 PCR 克隆短。
【在 V**F 的大作中提到】
: 想clone一段 23kb genomic region.
: 请推荐一个extra long PCR kit.
: 谢谢！
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C*******e
发帖数: 4348 | 6 前提是有的卖
然后还要有DY380这个strain
大多数人做的东西没的买吧
【在 S*****s 的大作中提到】
: 你可以买一个含有这段序列的 BAC，然后做 BAC retrieval 就可以。具体可以看看这
: 篇文章
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC169968/
: 这个方法克隆片段不会引入突变，而且得到的产物可以直接进入下一步实验，花的时间
: 也比 PCR 克隆短。
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S*****s
发帖数: 287 | 7 人和老鼠的 genomic DNA 基本上都能买到，在 genomic browser 上面就能直接搜到克
隆号，然后去 bac pac resource 买现成的 DNA。DY380 我没有用过，我用的是 SW102
，从 Copeland lab 要来的，花个邮费就行。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 前提是有的卖
: 然后还要有DY380这个strain
: 大多数人做的东西没的买吧
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C*******e
发帖数: 4348 | 8 我记得好几个贴子都是问的bacteria genomic DNA
话说做人和做老鼠的真的很幸福啊
很多东西都有现成的
SW102
【在 S*****s 的大作中提到】
: 人和老鼠的 genomic DNA 基本上都能买到，在 genomic browser 上面就能直接搜到克
: 隆号，然后去 bac pac resource 买现成的 DNA。DY380 我没有用过，我用的是 SW102
: ，从 Copeland lab 要来的，花个邮费就行。
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g***e
发帖数: 14217 | 9 用这个做到过19K的。
【在 B***e 的大作中提到】
: Takara LA Taq
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