P******m 发帖数: 21 | 1 用带HCV基因组的质粒转染huh7.5细胞,3或14天后收上清,病毒载量很高(1X10~8
copies/ml),但是用这些病毒感染huh7.5细胞(4小时或过夜后洗掉),3天后在上清
里几乎测不到病毒RNA。以前做过类似的实验,没有出现这种问题。请高人指点。 |
c******r 发帖数: 3778 | |
P******m 发帖数: 21 | 3 培养上清提取RNA, 然后real-time PCR测RNA copy |
c******r 发帖数: 3778 | 4 ok,你测的是virus copy,不是infectious unit。八成产生的virus都是死virus,所
以出问题。重来吧
【在 P******m 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 培养上清提取RNA, 然后real-time PCR测RNA copy
|
P******m 发帖数: 21 | 5 多谢。我测得不是infectious unit,荧光显微镜坏了。
其实我想问的就是问什么这些病毒能分泌到上清里,但是不具感染性?不完全包装?
因为之前是没问题的,这次出问题了。有什么因素会影响其感染性。重新生产病毒时需
要注意什么吗? |
V*f 发帖数: 171 | 6 Which strain/replicon of HCV did u use? I thought only JFH1 strain can
produce infectious particles, other replicons can not. |
c******r 发帖数: 3778 | 7 病毒浓度太高?
不知道。试验这东西没办法,就只能各种条件试。你过去做这个没问题是吧?看看有什
么条件改变了?
【在 P******m 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 多谢。我测得不是infectious unit,荧光显微镜坏了。 : 其实我想问的就是问什么这些病毒能分泌到上清里,但是不具感染性?不完全包装? : 因为之前是没问题的,这次出问题了。有什么因素会影响其感染性。重新生产病毒时需 : 要注意什么吗?
|
a*m 发帖数: 1217 | 8 第2轮感染的时候,有没有可能Huh7.5长的太满了或者传代次数太高?
【在 P******m 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 用带HCV基因组的质粒转染huh7.5细胞,3或14天后收上清,病毒载量很高(1X10~8 : copies/ml),但是用这些病毒感染huh7.5细胞(4小时或过夜后洗掉),3天后在上清 : 里几乎测不到病毒RNA。以前做过类似的实验,没有出现这种问题。请高人指点。
|
P******m 发帖数: 21 | 9 细胞养了一个多月,大概传了12次。已经在试新的细胞,希望能行。
感染的时候细胞95% confluence,因为要用别的东西刺激,不想因为细胞生长速度差别
造成假象。病毒感染也像转染一样对细胞密度敏感?
【在 a*m 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 第2轮感染的时候,有没有可能Huh7.5长的太满了或者传代次数太高?
|
a*m 发帖数: 1217 | 10 细胞太密了的话 JFH1感染效率会降低
【在 P******m 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 细胞养了一个多月,大概传了12次。已经在试新的细胞,希望能行。 : 感染的时候细胞95% confluence,因为要用别的东西刺激,不想因为细胞生长速度差别 : 造成假象。病毒感染也像转染一样对细胞密度敏感?
|