K**********e 发帖数: 188 | 1 350 mM KCl的buffer里的蛋白,加了loading buffer,就生成SDS-K沉淀了。怎么上样
跑SDS PAGE胶啊?加热倒是能
溶解沉淀,但是刚刚吸起来,马上又沉淀了,加到上样孔都是沉淀。
会影响跑胶吗?怎么办呢?(不能加水稀释,因为样品体积就是30ul了,再加loading
buffer,刚刚好) |
h*****9 发帖数: 4028 | |
b******n 发帖数: 4225 | 3 这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一
【在 h*****9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 这个不太可能吧?强酸强碱盐不可能沉淀。
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K**********e 发帖数: 188 | 4 ??为什么不可能?
就是含有氯化钾的buffer,遇到loading buffer里面的SDS,生成SDS钾,就沉淀了。
会不会影响跑胶?
【在 h*****9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 这个不太可能吧?强酸强碱盐不可能沉淀。
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K**********e 发帖数: 188 | 5 那用KCl溶液溶解的蛋白怎么跑胶呢?
我必须用KCl做buffer的盐
【在 b******n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一
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h*****9 发帖数: 4028 | 6 哦,学习了。
【在 b******n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一
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b******n 发帖数: 4225 | 7 试试看aceton precipitation(或者methanol precipitation)然后重新用1x loading
buff溶解吧
【在 K**********e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 那用KCl溶液溶解的蛋白怎么跑胶呢? : 我必须用KCl做buffer的盐
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K**********e 发帖数: 188 | 8 用丙酮沉淀,会不会把盐也搞下来呢?
会损失多少? |
h****n 发帖数: 92 | |
K**********e 发帖数: 188 | 10 一个样品就30ul
【在 h****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 透析除盐呢?
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T**********t 发帖数: 1604 | 11 用desalting column试试呢?
或者你把已经有沉淀的样品离心一下,取上清再加点SDS再跑胶。如果你之前加的
loading buffer里的SDS已经把K离子都沉淀下来了的话,应该后来加的SDS就不会沉淀了吧。
不过我不知道你的蛋白是不是也跟SDS一起沉淀了,还是先除盐比较保险。
【在 K**********e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 一个样品就30ul
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a*******e 发帖数: 245 | 12 heat up the sample for 5min at 95c
then load immediately
loading
【在 K**********e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 350 mM KCl的buffer里的蛋白,加了loading buffer,就生成SDS-K沉淀了。怎么上样 : 跑SDS PAGE胶啊?加热倒是能 : 溶解沉淀,但是刚刚吸起来,马上又沉淀了,加到上样孔都是沉淀。 : 会影响跑胶吗?怎么办呢?(不能加水稀释,因为样品体积就是30ul了,再加loading : buffer,刚刚好)
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k*********a 发帖数: 49 | 13 /hand,我也是这招儿
【在 a*******e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : heat up the sample for 5min at 95c : then load immediately : : loading
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k*********a 发帖数: 49 | 14 靠,衣服过期了
【在 k*********a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : /hand,我也是这招儿
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c******r 发帖数: 3778 | 15 这个SDS钾会沉淀蛋白吗?不是就SDS沉淀嘛?能不能沉淀了离心取上清跑胶? |
e****s 发帖数: 1125 | 16 90% methanol precipitate
wash one more time,
then resuspend by sample buffer.
loading
【在 K**********e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 350 mM KCl的buffer里的蛋白,加了loading buffer,就生成SDS-K沉淀了。怎么上样 : 跑SDS PAGE胶啊?加热倒是能 : 溶解沉淀,但是刚刚吸起来,马上又沉淀了,加到上样孔都是沉淀。 : 会影响跑胶吗?怎么办呢?(不能加水稀释,因为样品体积就是30ul了,再加loading : buffer,刚刚好)
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