K**********e
发帖数: 188 | 1 350 mM KCl的buffer里的蛋白，加了loading buffer，就生成SDS－K沉淀了。怎么上样
跑SDS PAGE胶啊？加热倒是能
溶解沉淀，但是刚刚吸起来，马上又沉淀了，加到上样孔都是沉淀。
会影响跑胶吗？怎么办呢？（不能加水稀释，因为样品体积就是30ul了，再加loading
buffer，刚刚好） |
h*****9
发帖数: 4028 | |
b******n
发帖数: 4225 | 3 这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一
【在 h*****9 的大作中提到】
: 这个不太可能吧？强酸强碱盐不可能沉淀。
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K**********e
发帖数: 188 | 4 ？？为什么不可能？
就是含有氯化钾的buffer，遇到loading buffer里面的SDS，生成SDS钾，就沉淀了。
会不会影响跑胶？
【在 h*****9 的大作中提到】
: 这个不太可能吧？强酸强碱盐不可能沉淀。
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K**********e
发帖数: 188 | 5 那用KCl溶液溶解的蛋白怎么跑胶呢？
我必须用KCl做buffer的盐
【在 b******n 的大作中提到】
: 这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一
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h*****9
发帖数: 4028 | 6 哦，学习了。
【在 b******n 的大作中提到】
: 这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一
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b******n
发帖数: 4225 | 7 试试看aceton precipitation(或者methanol precipitation)然后重新用1x loading
buff溶解吧
【在 K**********e 的大作中提到】
: 那用KCl溶液溶解的蛋白怎么跑胶呢？
: 我必须用KCl做buffer的盐
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K**********e
发帖数: 188 | 8 用丙酮沉淀，会不会把盐也搞下来呢？
会损失多少？ |
h****n
发帖数: 92 | |
K**********e
发帖数: 188 | 10 一个样品就30ul
【在 h****n 的大作中提到】
: 透析除盐呢？
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T**********t
发帖数: 1604 | 11 用desalting column试试呢？
或者你把已经有沉淀的样品离心一下，取上清再加点SDS再跑胶。如果你之前加的
loading buffer里的SDS已经把K离子都沉淀下来了的话，应该后来加的SDS就不会沉淀了吧。
不过我不知道你的蛋白是不是也跟SDS一起沉淀了，还是先除盐比较保险。
【在 K**********e 的大作中提到】
: 一个样品就30ul
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a*******e
发帖数: 245 | 12 heat up the sample for 5min at 95c
then load immediately
loading
【在 K**********e 的大作中提到】
: 350 mM KCl的buffer里的蛋白，加了loading buffer，就生成SDS－K沉淀了。怎么上样
: 跑SDS PAGE胶啊？加热倒是能
: 溶解沉淀，但是刚刚吸起来，马上又沉淀了，加到上样孔都是沉淀。
: 会影响跑胶吗？怎么办呢？（不能加水稀释，因为样品体积就是30ul了，再加loading
: buffer，刚刚好）
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k*********a
发帖数: 49 | 13 /hand，我也是这招儿
【在 a*******e 的大作中提到】
: heat up the sample for 5min at 95c
: then load immediately
:
: loading
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k*********a
发帖数: 49 | 14 靠，衣服过期了
【在 k*********a 的大作中提到】
: /hand，我也是这招儿
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c******r
发帖数: 3778 | 15 这个SDS钾会沉淀蛋白吗？不是就SDS沉淀嘛？能不能沉淀了离心取上清跑胶？ |
e****s
发帖数: 1125 | 16 90% methanol precipitate
wash one more time,
then resuspend by sample buffer.
loading
【在 K**********e 的大作中提到】
: 350 mM KCl的buffer里的蛋白，加了loading buffer，就生成SDS－K沉淀了。怎么上样
: 跑SDS PAGE胶啊？加热倒是能
: 溶解沉淀，但是刚刚吸起来，马上又沉淀了，加到上样孔都是沉淀。
: 会影响跑胶吗？怎么办呢？（不能加水稀释，因为样品体积就是30ul了，再加loading
: buffer，刚刚好）
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