n*****r 发帖数: 78 | 1 做Taqman realtime RT-PCR时间很长了,一直没问题,最近NTC和RT-突然出现扩增,CT
都在35左右。通过大量的NTC,RT-和RNA extraction negative control重复测试,初
步判断为随机污染。做了所有我能想到的,换成新的试剂,引物,探针,用UV或bleach
洗泡桌面,枪,盘子....等等,还是没解决问题。
哪位大侠有经验,帮我一把。谢谢。 |
w***e 发帖数: 269 | 2 那天我做RT的时候随便翻看别人留下来的protocol,说每几个月大概应该用个blank
plate做个RT-PCR,看看是不是机器里面被dye或者别的什么污染,我觉得你不妨一试。
有的实验室有专门的blank plate,没有的话好像可以用平时的plate或者tube加水。 |
n*****r 发帖数: 78 | 3 我把里面那个thermol block都洗过好几遍了,不过还真没做个空白版。我回头试一下。
【在 w***e 的大作中提到】 : 那天我做RT的时候随便翻看别人留下来的protocol,说每几个月大概应该用个blank : plate做个RT-PCR,看看是不是机器里面被dye或者别的什么污染,我觉得你不妨一试。 : 有的实验室有专门的blank plate,没有的话好像可以用平时的plate或者tube加水。
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k****l 发帖数: 279 | 4 the best way is to switch to another bench or even another lab
DNA could be in the air |
C*******e 发帖数: 4348 | 5 随机污染没什么办法吧
枪头有没有用带filter的?
用带filter的会好一点
另外已经Ct>35了
如果跟有模板的比较Ct相差了10以上
问题也不大吧 |
p******d 发帖数: 3737 | 6 我也觉得这个影响不大。
【在 C*******e 的大作中提到】 : 随机污染没什么办法吧 : 枪头有没有用带filter的? : 用带filter的会好一点 : 另外已经Ct>35了 : 如果跟有模板的比较Ct相差了10以上 : 问题也不大吧
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n*****r 发帖数: 78 | 7 我当然都用filter了,这都是common sense东西。我们是测病毒,结果要求是Positive
或 Negative。 虽然Ct的大小不是非常重要,但我们有许多阳性样品含的病毒量比较
低,Ct也会在35左右,这样NTC或RT-如果出现污染,那整个结果就只能当无效处理。
【在 C*******e 的大作中提到】 : 随机污染没什么办法吧 : 枪头有没有用带filter的? : 用带filter的会好一点 : 另外已经Ct>35了 : 如果跟有模板的比较Ct相差了10以上 : 问题也不大吧
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C*******e 发帖数: 4348 | 8 哦,这样子。那你用的是一整板的还是一条一条的?
如果是一条一条的,我一般先加样negative control,盖上
然后再加别的
Positive
【在 n*****r 的大作中提到】 : 我当然都用filter了,这都是common sense东西。我们是测病毒,结果要求是Positive : 或 Negative。 虽然Ct的大小不是非常重要,但我们有许多阳性样品含的病毒量比较 : 低,Ct也会在35左右,这样NTC或RT-如果出现污染,那整个结果就只能当无效处理。
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