f******9
发帖数: 39 | 1 刚刚开始接触qPCR，要比较某类基因在细胞做了不同处理后的表达是否有显著性变化。
请教各位qPCR大侠，怎么样界定qPCR中基因表达的变化（normlization之后）是否显著
？statistic analysis? 还是至少2－3fold的变化才有意义？ |
O******e
发帖数: 4845 | 2 多大变化才是significant，不同的人有不同的定义。但有几点应该明确：
１。实验已经包含了必要的controls;
２。Reproducible;
３。相应的细胞表型。
而且蛋白水平的变化永远是最直接有效没有争议的指标。
【在 f******9 的大作中提到】
: 刚刚开始接触qPCR，要比较某类基因在细胞做了不同处理后的表达是否有显著性变化。
: 请教各位qPCR大侠，怎么样界定qPCR中基因表达的变化（normlization之后）是否显著
: ？statistic analysis? 还是至少2－3fold的变化才有意义？
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s**f
发帖数: 365 | 3 t test就可以看变化了
【在 f******9 的大作中提到】
: 刚刚开始接触qPCR，要比较某类基因在细胞做了不同处理后的表达是否有显著性变化。
: 请教各位qPCR大侠，怎么样界定qPCR中基因表达的变化（normlization之后）是否显著
: ？statistic analysis? 还是至少2－3fold的变化才有意义？
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s******s
发帖数: 13035 | 4 说点有点关系的。上周五参加一个talk, affimetrix的人过来，
说他们可以看fix的细胞里面单个RNA，可以count，这个应该比qPCR强。
当然，现在还有dPCR啥的
【在 f******9 的大作中提到】
: 刚刚开始接触qPCR，要比较某类基因在细胞做了不同处理后的表达是否有显著性变化。
: 请教各位qPCR大侠，怎么样界定qPCR中基因表达的变化（normlization之后）是否显著
: ？statistic analysis? 还是至少2－3fold的变化才有意义？
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f******9
发帖数: 39 | 5 多谢各位的指教。
另一个问题，就是在normalization的时候，大家通常是选一个housekeeping Gene还是
多个（3个）housekeeping Gene的geometric mean来做的？
好像3个gene来normalization的方法更准确一点。 |
f*********r
发帖数: 1233 | 6 常用的内参基因无非是细胞骨架、能量代谢、蛋白合成相关的基因。我个人意见，选一
个跟你实验最无关、最不受影响、表达最稳定的。也就是最大众化、常规化、简单化的
方法。
【在 f******9 的大作中提到】
: 多谢各位的指教。
: 另一个问题，就是在normalization的时候，大家通常是选一个housekeeping Gene还是
: 多个（3个）housekeeping Gene的geometric mean来做的？
: 好像3个gene来normalization的方法更准确一点。
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