M****m
发帖数: 2142 | 1 发现很多地方说用filter sterilize，我就中途把autoclave停了，不知道还能否用呢
？颜色到还是透明没变色。我配的1mM，另外用HEPES根用Tris比哪个更好？我要分离
membrane protein。 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 HEPES 高温后分子会被水解破坏，对于有些特别严格要求分子式的场合
会有麻烦（比方说作为protein crosslinking buffer)
用来提蛋白的Buffer 嘛，只要pH不变，应该还是可以用的。
所以你最好测一下pH. 如果担心的话就倒了重新配
HEPES 的好处是pH对温度不敏感，Tris在室温和4度的pH 差的很多。
但是HEPES 容易被破坏。
【在 M****m 的大作中提到】
: 发现很多地方说用filter sterilize，我就中途把autoclave停了，不知道还能否用呢
: ？颜色到还是透明没变色。我配的1mM，另外用HEPES根用Tris比哪个更好？我要分离
: membrane protein。
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j****x
发帖数: 1704 | 3
HEPES高温水解之后pH会不变吗？即使不变，缓冲能力也丧失了吧？
【在 s******y 的大作中提到】
: HEPES 高温后分子会被水解破坏，对于有些特别严格要求分子式的场合
: 会有麻烦（比方说作为protein crosslinking buffer)
: 用来提蛋白的Buffer 嘛，只要pH不变，应该还是可以用的。
: 所以你最好测一下pH. 如果担心的话就倒了重新配
: HEPES 的好处是pH对温度不敏感，Tris在室温和4度的pH 差的很多。
: 但是HEPES 容易被破坏。
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M****m
发帖数: 2142 | 4 多谢，那还是重新配吧，就是调pH很麻烦，等了好久才调好 :-S
后面还真要做crosslinkng。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: HEPES 高温后分子会被水解破坏，对于有些特别严格要求分子式的场合
: 会有麻烦（比方说作为protein crosslinking buffer)
: 用来提蛋白的Buffer 嘛，只要pH不变，应该还是可以用的。
: 所以你最好测一下pH. 如果担心的话就倒了重新配
: HEPES 的好处是pH对温度不敏感，Tris在室温和4度的pH 差的很多。
: 但是HEPES 容易被破坏。
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s******y
发帖数: 28562 | 5 不会全部都水解掉的，还是会有大部分留下来的。如果是不重要的场合就无所谓了。
重要的场合当然不行
【在 j****x 的大作中提到】
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: HEPES高温水解之后pH会不变吗？即使不变，缓冲能力也丧失了吧？
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