还是一些Co-IP问题 - Biology版

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Biology版 - 还是一些Co-IP问题

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M****m
发帖数: 2142

我的目的是identify interantion partners and send for sequencing，这样对蛋白
量的要求就比较大不像western似的一点就够了。大家一般elution的时候都是多少ul?
还有我用的FLAG的beads，protocol建议3种，我选了low acidic的buffer，这样不管什
么在beads上都一起给洗脱下来了，不过我有control还好可以区分哪些unspecific的
binding，我用了100 ul elution buffer，那这样的话量太大没办法跑胶，浓缩可以有
几种方法，一是用centricon binding protein然后加少量的buffer elute，二是
lyophilization，基本上就是减少水的含量，这样盐浓度大幅度提高，不知道好不好，
还有就是我先都加dye煮了，然后再vaccum dry减少水分以降低volume便于跑胶，哪种
方法更可行一些？

e****s
发帖数: 1125

你的蛋白样品用90% methanol precipitate，然后用合适体积的Sample buffer复溶就
好了。
我感觉能用Sepcific elute比其他方法都好，应该用Flag peptide Elute最好。

【在 M****m 的大作中提到】

: 我的目的是identify interantion partners and send for sequencing，这样对蛋白
: 量的要求就比较大不像western似的一点就够了。大家一般elution的时候都是多少ul?
: 还有我用的FLAG的beads，protocol建议3种，我选了low acidic的buffer，这样不管什
: 么在beads上都一起给洗脱下来了，不过我有control还好可以区分哪些unspecific的
: binding，我用了100 ul elution buffer，那这样的话量太大没办法跑胶，浓缩可以有
: 几种方法，一是用centricon binding protein然后加少量的buffer elute，二是
: lyophilization，基本上就是减少水的含量，这样盐浓度大幅度提高，不知道好不好，
: 还有就是我先都加dye煮了，然后再vaccum dry减少水分以降低volume便于跑胶，哪种
: 方法更可行一些？

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