t****p 发帖数: 1504 | 1 不知道本版有没有人有抗体纯化的经验。
血清过抗原柱,用PH2.5的Glycine洗脱,最浓的几管fraction沉淀出来了(管子有加1M
Tris buffer),形成浑浊液,无法重新溶解 (调PH,加盐都无效)。
溶解问题不解决没办法dialysis,抗体放4度时间长了估计也有问题。哪位知道trick赶
快指点一下,包子相谢! |
n******e 发帖数: 110 | 2 沉淀的不一定全是你要的抗体。测一下剩下溶液里抗体滴度先。要是还是很高的话,就
直接透析溶液,沉淀以后再说。不过我推荐用脱盐柱来换buffer,又快又好。
1M
【在 t****p 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 不知道本版有没有人有抗体纯化的经验。 : 血清过抗原柱,用PH2.5的Glycine洗脱,最浓的几管fraction沉淀出来了(管子有加1M : Tris buffer),形成浑浊液,无法重新溶解 (调PH,加盐都无效)。 : 溶解问题不解决没办法dialysis,抗体放4度时间长了估计也有问题。哪位知道trick赶 : 快指点一下,包子相谢!
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l*****r 发帖数: 131 | 3 楼上说得对,关键看你的抗体是不是在可溶部分。如果沉淀的是你的抗体,不妨试试2M
Arginin pH4.3,我试过洗脱效果比pH2.5要差点,但还行。另外还有个idea,如果BSA
在Glycine里不沉淀的话,加点BSA试试。如果这个办法可以能给我发个消息吗?祝好运。 |
t****p 发帖数: 1504 | 4 上清有目的抗体,但是浓度相当低。如果沉淀不溶解的话,我怎么知道它是否含有我的
抗体成分呢?
我现在把它离心了,上清透析,沉淀在等答案。
如果沉淀不溶,我纯化的抗体相当少啊!
2M
BSA
运。
【在 l*****r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 楼上说得对,关键看你的抗体是不是在可溶部分。如果沉淀的是你的抗体,不妨试试2M : Arginin pH4.3,我试过洗脱效果比pH2.5要差点,但还行。另外还有个idea,如果BSA : 在Glycine里不沉淀的话,加点BSA试试。如果这个办法可以能给我发个消息吗?祝好运。
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f******s 发帖数: 440 | 5 遇到过和LZ一样的问题
4个抗体,2个没问题,2个有沉淀,完全一样的操作。
沉淀后的上清部分抗体量很低,可以估计大部分在沉淀。
透析之后情况没有好转。无奈,全部过滤掉了......
希望LZ找到更好方法。
1M
【在 t****p 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 不知道本版有没有人有抗体纯化的经验。 : 血清过抗原柱,用PH2.5的Glycine洗脱,最浓的几管fraction沉淀出来了(管子有加1M : Tris buffer),形成浑浊液,无法重新溶解 (调PH,加盐都无效)。 : 溶解问题不解决没办法dialysis,抗体放4度时间长了估计也有问题。哪位知道trick赶 : 快指点一下,包子相谢!
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n******e 发帖数: 110 | 6 沉淀PBS洗后不知道能不能用DMSF溶解?有时候有机溶剂可能会有好的溶解效果,然后
稀释在其他溶液里。要注意的是,含DMSF的溶液不能透析,要用脱盐柱才行。
还有用来中和洗脱液的1M tris 不用很多。我见过的protocol一般建议1ml洗脱液加
100ulTris。这个实在太多了。我试过30ulTris仍然可以中和1ml洗脱液的。我想Tris太
多可能也是引起沉淀的一个原因。
建议而已,没有严格验证过。
【在 t****p 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 上清有目的抗体,但是浓度相当低。如果沉淀不溶解的话,我怎么知道它是否含有我的 : 抗体成分呢? : 我现在把它离心了,上清透析,沉淀在等答案。 : 如果沉淀不溶,我纯化的抗体相当少啊! : : 2M : BSA : 运。
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n******e 发帖数: 110 | 7
的抗体成分呢?
可以试试沉淀直接电泳。有时候沉淀会溶解在上样buffer里。
【在 t****p 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 上清有目的抗体,但是浓度相当低。如果沉淀不溶解的话,我怎么知道它是否含有我的 : 抗体成分呢? : 我现在把它离心了,上清透析,沉淀在等答案。 : 如果沉淀不溶,我纯化的抗体相当少啊! : : 2M : BSA : 运。
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