m***o
发帖数: 272 | 1 刚开始去一个lab，做PCR，最近发现阴性对照组经常有跟目的片段一样大小的条带。用
过不同primer，那个片段就跟我的目的片段一样变。如果是水污染了，但是有些管PCR
就什么都没有。因为做的是5和3’RACE，有时候第一次PCR阴性对照组很干净，在用这
个做nest PCR就有了。感觉如果cycle多用的话，阴性对照组就会出来条带。老板今天
专门强调这是技术问题，还是绝对的技术问题。郁闷的不行，唉，刚开始来这个lab，
感觉这个实验室挺脏，是不是环境不好，但是有些组就什么条带没有。但是阴性对照是
经常有，而且条带亮的快赶上阳性对照了。各位，可能是什么问题呢？谢谢任何建议！ |
m*********7
发帖数: 606 | 2 这个，真的不太想打击你，不过很有可能是你自己操作存在问题。
注意一下每次加样时不要有交叉污染，换tip自然不用多说了，实在不行你好好把
pipette清洗干净，每次使用前和使用后都用kimwipes沾上70%乙醇擦拭几遍。 |
m***o
发帖数: 272 | 3 看来老板没冤枉我吗？我是察了，但是如果就一轮PCR 看起来都还好，但是在继续nest
PCR 一轮就很容易出来了，明天我把试验台也察察看。为什么有些样品里面我怎么都
做不出条带，而这样阴性对照就容易出来。而且我现在都是先加阴性对照组的水，盖上
盖子，然后再做别的和阳性对照。我真不知道操作该怎么改进。或者我不该做阳性对照
组，可能都是它惹的。 |
s******s
发帖数: 13035 | 4 管子/tip/buffer/enzyme全都换新的，找个超净台做
nest
【在 m***o 的大作中提到】
: 看来老板没冤枉我吗？我是察了，但是如果就一轮PCR 看起来都还好，但是在继续nest
: PCR 一轮就很容易出来了，明天我把试验台也察察看。为什么有些样品里面我怎么都
: 做不出条带，而这样阴性对照就容易出来。而且我现在都是先加阴性对照组的水，盖上
: 盖子，然后再做别的和阳性对照。我真不知道操作该怎么改进。或者我不该做阳性对照
: 组，可能都是它惹的。
|
Z******5
发帖数: 435 | 5 首先，污染问题一定要解决。像楼上说的，把所有实验器具、试剂都擦擦或换新的。可
以考虑到超净台内做。
此外，最好不要做那么多的cycles，可以多设计几对nest PCR。 |
C*******e
发帖数: 4348 | 6 还有一个有帮助的
用带filter的tip
这样交叉污染少很多 |
