C**********P
发帖数: 1004 | 1 激酶A在整个细胞周期中都位于位置B，无论是抗体染色还是GFP signal在位置C都没有
任何信号。但有人发现Phospho激酶A可以定位于位置C，并且在有些情况下特异性的定
位于C，而在B完全没有定位。大家觉得这可能是啥原因，简单的artifact还是存在什么
regulation在里面？ |
e****s
发帖数: 1125 | 2 这个应该是很普遍的？
很多蛋白在细胞中的位置都受到调控的。
一个可能就是蛋白的定位会被某些Binding partner改变；有时候被修饰，酶切后也会对分布带来影响。
【在 C**********P 的大作中提到】
: 激酶A在整个细胞周期中都位于位置B，无论是抗体染色还是GFP signal在位置C都没有
: 任何信号。但有人发现Phospho激酶A可以定位于位置C，并且在有些情况下特异性的定
: 位于C，而在B完全没有定位。大家觉得这可能是啥原因，简单的artifact还是存在什么
: regulation在里面？
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C**********P
发帖数: 1004 | 3 但普通抗体染色，或者GFP 在任何时候都看不到C位置的定位啊。如果是修饰，至少应
该能看到点吧。
会对分布带来影响。
【在 e****s 的大作中提到】
: 这个应该是很普遍的？
: 很多蛋白在细胞中的位置都受到调控的。
: 一个可能就是蛋白的定位会被某些Binding partner改变；有时候被修饰，酶切后也会对分布带来影响。
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d***y
发帖数: 195 | 4 也许非常简单，
可以用这个phospho的kinase的inhibitor处理细胞，然后看定位，
尽管这个未必特异且未必很简单，但最直观，
如果处理后是C，敢说100个review里有90个不会说任何废话的，
其余的10个可能建议你做个RNAi之类的，如此而已。
【在 C**********P 的大作中提到】
: 激酶A在整个细胞周期中都位于位置B，无论是抗体染色还是GFP signal在位置C都没有
: 任何信号。但有人发现Phospho激酶A可以定位于位置C，并且在有些情况下特异性的定
: 位于C，而在B完全没有定位。大家觉得这可能是啥原因，简单的artifact还是存在什么
: regulation在里面？
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e****s
发帖数: 1125 | 5 那你原帖中说的别人所谓特定条件下的定位结果是怎么获得的呢？？
你说的这个特定条件是什么条件？你说的这些免染有没有在这个条件下做过？
【在 C**********P 的大作中提到】
: 但普通抗体染色，或者GFP 在任何时候都看不到C位置的定位啊。如果是修饰，至少应
: 该能看到点吧。
:
: 会对分布带来影响。
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C**********P
发帖数: 1004 | 6 特定条件就是用磷酸化抗体染，能看到C定位，但用普通抗体染，只能看到B定位。
也就是说，如果磷酸化抗体染色结果是对的，那普通抗体或者GFP targeted的protein
都不具备定位到C这个位置的能力，只有磷酸化的可以。
但问题是该蛋白的pool里面肯定是有被磷酸化的部分的，但用普通抗体染却看不到，很
奇怪，所以我倾向于认为磷酸化抗体是非特异的。
【在 e****s 的大作中提到】
: 那你原帖中说的别人所谓特定条件下的定位结果是怎么获得的呢？？
: 你说的这个特定条件是什么条件？你说的这些免染有没有在这个条件下做过？
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b****r
发帖数: 17995 | 7 很有道理，学习了
protein
【在 C**********P 的大作中提到】
: 特定条件就是用磷酸化抗体染，能看到C定位，但用普通抗体染，只能看到B定位。
: 也就是说，如果磷酸化抗体染色结果是对的，那普通抗体或者GFP targeted的protein
: 都不具备定位到C这个位置的能力，只有磷酸化的可以。
: 但问题是该蛋白的pool里面肯定是有被磷酸化的部分的，但用普通抗体染却看不到，很
: 奇怪，所以我倾向于认为磷酸化抗体是非特异的。
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