d**********2
发帖数: 103 | 1 小弟想向各位大虾问一下caspase 3/7 的问题：）
用得是promega 的 Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay kit
小弟想 用不同GFP融合蛋白转染293T 细胞然后用这个KIT监测Caspase-3/7 的活性 但
是结果很奇怪
用Staurosporine(10uM, 5H)诱导细胞凋亡所产生的信号比GFP空载转染的细胞的信号还
低。。。
所以想问问到底是什么问题。。。 |
S**********e
发帖数: 1789 | 2 死过头了。时间搞短点。
【在 d**********2 的大作中提到】
: 小弟想向各位大虾问一下caspase 3/7 的问题：）
: 用得是promega 的 Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay kit
: 小弟想 用不同GFP融合蛋白转染293T 细胞然后用这个KIT监测Caspase-3/7 的活性 但
: 是结果很奇怪
: 用Staurosporine(10uM, 5H)诱导细胞凋亡所产生的信号比GFP空载转染的细胞的信号还
: 低。。。
: 所以想问问到底是什么问题。。。
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d**********2
发帖数: 103 | 3 谢谢大虾～请问你指是GFP transfect的细胞死过头还是STS处理的细胞死过头了？STS
那个我是按protocol的。。。 |
S**********e
发帖数: 1789 | 4 STS处理的细胞死过头了。这个公司的kit很奇怪，细胞死得稍微多一点，实验组的信号
就会低于对照组。很多人都遇到过类似问题。可以试试降低浓度，缩短时间。或者换个
公司的kit.
STS
【在 d**********2 的大作中提到】
: 谢谢大虾～请问你指是GFP transfect的细胞死过头还是STS处理的细胞死过头了？STS
: 那个我是按protocol的。。。
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s*********s
发帖数: 110 | 5 235425 Caspase-3 Substrate II, Fluorogenic
calbiochem
另外可以做western confirm, 比较好的caspase 3 antibody用cell siganling的9662
【在 d**********2 的大作中提到】
: 小弟想向各位大虾问一下caspase 3/7 的问题：）
: 用得是promega 的 Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay kit
: 小弟想 用不同GFP融合蛋白转染293T 细胞然后用这个KIT监测Caspase-3/7 的活性 但
: 是结果很奇怪
: 用Staurosporine(10uM, 5H)诱导细胞凋亡所产生的信号比GFP空载转染的细胞的信号还
: 低。。。
: 所以想问问到底是什么问题。。。
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d**********2
发帖数: 103 | 6 感谢各位大虾啊！！！！深深感谢～我这就去试一下！ |
d**********2
发帖数: 103 | 7 daxia`~is it true that the DVED-Rhodamin 110 is more sensitive than DVED-AMC
as promega`s ad says? Thanks a million~!!!!!! |
s*********s
发帖数: 110 | 8 不是daxia
我推荐的是做我们lab routinely使用的
其他的没试过
western with caspase 3 or PARP is another way to confirm.
Good luck
AMC
【在 d**********2 的大作中提到】
: daxia`~is it true that the DVED-Rhodamin 110 is more sensitive than DVED-AMC
: as promega`s ad says? Thanks a million~!!!!!!
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d**********2
发帖数: 103 | 9 i tried shortening the time of STS treatment but still didnt work...so I
wonder whether it is the cell line problem.....so what kind of cell line do
you use?springgrass Thanks alot!! |
