s********n 发帖数: 248 | 1 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
,IFN beta, gamma等stimuli的反应区别,以及antigen presentation to CD4+ T
cell,nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF(L-Cell media)的media里养6-7天
,replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说,你这样养7天,得到的细胞其实更接
近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天,才能得到real macrophage
。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
我老板原来是做T cell的,也不太清楚这个问题。
大家谁做过Macrophage啊?是不是如这个老师说的?还是说不同实验目的,培养方法也
不一样?
多谢了先! |
a*****g 发帖数: 543 | 2 应该还要加RANKL
LPS
macrophage
【在 s********n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS : ,IFN beta, gamma等stimuli的反应区别,以及antigen presentation to CD4+ T : cell,nitro oxide production还有phagocytosis的区别。 : 我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF(L-Cell media)的media里养6-7天 : ,replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说,你这样养7天,得到的细胞其实更接 : 近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天,才能得到real macrophage : 。可是我在文献中查不到这种说法的依据。 : 我老板原来是做T cell的,也不太清楚这个问题。 : 大家谁做过Macrophage啊?是不是如这个老师说的?还是说不同实验目的,培养方法也 : 不一样?
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s****9 发帖数: 932 | 3 Are you sure?
I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells
differentiate into osteoclast.
【在 a*****g 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 应该还要加RANKL : : LPS : macrophage
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a*****g 发帖数: 543 | 4 I think you are right。I was confused.
cells
【在 s****9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Are you sure? : I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells : differentiate into osteoclast.
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s****u 发帖数: 483 | 5 MCSF 6,7天出来的只要是贴壁的都基本上是MCs而不是monocyte了,他不信你让他去做
CD14 staining.
LPS
macrophage
【在 s********n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS : ,IFN beta, gamma等stimuli的反应区别,以及antigen presentation to CD4+ T : cell,nitro oxide production还有phagocytosis的区别。 : 我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF(L-Cell media)的media里养6-7天 : ,replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说,你这样养7天,得到的细胞其实更接 : 近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天,才能得到real macrophage : 。可是我在文献中查不到这种说法的依据。 : 我老板原来是做T cell的,也不太清楚这个问题。 : 大家谁做过Macrophage啊?是不是如这个老师说的?还是说不同实验目的,培养方法也 : 不一样?
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s********n 发帖数: 248 | 6 多谢指教!
【在 s****u 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : MCSF 6,7天出来的只要是贴壁的都基本上是MCs而不是monocyte了,他不信你让他去做 : CD14 staining. : : LPS : macrophage
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W****C 发帖数: 1937 | 7 我们也是用L-SUP刺激分化的。因为L-SUP成份比较复杂,所以一周后去掉L
-SUP再养几天比较好。对某些实验应该可以降低background。 这应该
对细胞分化没啥影响的。 我们用的是DMEM+glutamine, 没加其他的
。 |
s********n 发帖数: 248 | 8 是一周以后starve 的时候用DMEM+L-Glutamine么?还加horse serum 和Na pyruvate,
non-essential amino acid么?
【在 W****C 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我们也是用L-SUP刺激分化的。因为L-SUP成份比较复杂,所以一周后去掉L : -SUP再养几天比较好。对某些实验应该可以降低background。 这应该 : 对细胞分化没啥影响的。 我们用的是DMEM+glutamine, 没加其他的 : 。
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W****C 发帖数: 1937 | 9 如果需要starve的话就不加serum, 如果不需要的话就加10%的ser
um(FBS)
【在 s********n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是一周以后starve 的时候用DMEM+L-Glutamine么?还加horse serum 和Na pyruvate, : non-essential amino acid么?
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w******h 发帖数: 47 | 10 我是参照CURRENT PROTOCOL in immuology 的方法做的,和你的protocol差不多,只不
过我用的是 M-CSF,培养7天后flow cyotmetry显示有超过98%的细胞是CD11B+F4/80+,所
以他们是MACROPHAGE,不是monocytes。 |