s********n
发帖数: 248 | 1 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
不一样？
多谢了先！ |
a*****g
发帖数: 543 | 2 应该还要加RANKL
LPS
macrophage
【在 s********n 的大作中提到】
: 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
: ,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
: cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
: 我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
: ，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
: 近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
: 。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
: 我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
: 大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
: 不一样？
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s****9
发帖数: 932 | 3 Are you sure?
I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells
differentiate into osteoclast.
【在 a*****g 的大作中提到】
: 应该还要加RANKL
:
: LPS
: macrophage
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a*****g
发帖数: 543 | 4 I think you are right。I was confused.
cells
【在 s****9 的大作中提到】
: Are you sure?
: I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells
: differentiate into osteoclast.
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s****u
发帖数: 483 | 5 MCSF 6,7天出来的只要是贴壁的都基本上是MCs而不是monocyte了，他不信你让他去做
CD14 staining.
LPS
macrophage
【在 s********n 的大作中提到】
: 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
: ,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
: cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
: 我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
: ，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
: 近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
: 。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
: 我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
: 大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
: 不一样？
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s********n
发帖数: 248 | 6 多谢指教！
【在 s****u 的大作中提到】
: MCSF 6,7天出来的只要是贴壁的都基本上是MCs而不是monocyte了，他不信你让他去做
: CD14 staining.
:
: LPS
: macrophage
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W****C
发帖数: 1937 | 7 我们也是用Ｌ－ＳＵＰ刺激分化的。因为Ｌ－ＳＵＰ成份比较复杂，所以一周后去掉Ｌ
－ＳＵＰ再养几天比较好。对某些实验应该可以降低ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ。 这应该
对细胞分化没啥影响的。 我们用的是ＤＭＥＭ＋ｇｌｕｔａｍｉｎｅ， 没加其他的
。 |
s********n
发帖数: 248 | 8 是一周以后starve 的时候用DMEM+L-Glutamine么？还加horse serum 和Na pyruvate，
non-essential amino acid么？
【在 W****C 的大作中提到】
: 我们也是用Ｌ－ＳＵＰ刺激分化的。因为Ｌ－ＳＵＰ成份比较复杂，所以一周后去掉Ｌ
: －ＳＵＰ再养几天比较好。对某些实验应该可以降低ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ。 这应该
: 对细胞分化没啥影响的。 我们用的是ＤＭＥＭ＋ｇｌｕｔａｍｉｎｅ， 没加其他的
: 。
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W****C
发帖数: 1937 | 9 如果需要ｓｔａｒｖｅ的话就不加ｓｅｒｕｍ， 如果不需要的话就加１０％的ｓｅｒ
ｕｍ（ＦＢＳ）
【在 s********n 的大作中提到】
: 是一周以后starve 的时候用DMEM+L-Glutamine么？还加horse serum 和Na pyruvate，
: non-essential amino acid么？
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w******h
发帖数: 47 | 10 我是参照CURRENT PROTOCOL in immuology 的方法做的，和你的protocol差不多，只不
过我用的是 M-CSF,培养7天后flow cyotmetry显示有超过98%的细胞是CD11B+F4/80+,所
以他们是MACROPHAGE,不是monocytes。 |
