t********y
发帖数: 749 | 1 在membrane里面放某种transmembrane protein， 怎么知道放的是正的还是反的呢？
还是两种orientation 都有呢？
特别是PH sensitive channel
谢谢！ |
i***l
发帖数: 1656 | 2 都有
【在 t********y 的大作中提到】
: 在membrane里面放某种transmembrane protein， 怎么知道放的是正的还是反的呢？
: 还是两种orientation 都有呢？
: 特别是PH sensitive channel
: 谢谢！
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S*****s
发帖数: 287 | 3 能不能在 C 端或者 N 端带上一个 epitope tag？如果可以的话，不破细胞直接染细胞
表面蛋白，另一组样品破了细胞再染。两组一对照就知道这个蛋白是怎么表达的了。
【在 t********y 的大作中提到】
: 在membrane里面放某种transmembrane protein， 怎么知道放的是正的还是反的呢？
: 还是两种orientation 都有呢？
: 特别是PH sensitive channel
: 谢谢！
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i***l
发帖数: 1656 | 4 他肯定不是用活细胞
是ProteoLiposome重组
两种都有
【在 S*****s 的大作中提到】
: 能不能在 C 端或者 N 端带上一个 epitope tag？如果可以的话，不破细胞直接染细胞
: 表面蛋白，另一组样品破了细胞再染。两组一对照就知道这个蛋白是怎么表达的了。
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s*******e
发帖数: 1010 | |
t********y
发帖数: 749 | 6 若果都有的话怎么测电导率呢？
那测的数据岂不是很难准确？弄不好还cancel了？
【在 i***l 的大作中提到】
: 他肯定不是用活细胞
: 是ProteoLiposome重组
: 两种都有
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s*******e
发帖数: 1010 | 7 控制channel specific的离子浓度啊
【在 t********y 的大作中提到】
: 若果都有的话怎么测电导率呢？
: 那测的数据岂不是很难准确？弄不好还cancel了？
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t********y
发帖数: 749 | 8 可是这样的话， 再除以expression number或者某种方法得到的总channel 数，
再得到的single channel conductance 根本没办法和 single channel
electrophysiology 的实验比啊？
搞不好连一个数量级都不是的。。
是我理解错什么东西了吗？ 麻烦高人指点。。。越来越昏了。。。
【在 s*******e 的大作中提到】
: 控制channel specific的离子浓度啊
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i***l
发帖数: 1656 | 9 是不是+Lipid重组？
重组的话也不是所有蛋白都上去的，想知道数量，照电镜，数平均数，除以2，大概是
真的工作的Channel
【在 t********y 的大作中提到】
: 可是这样的话， 再除以expression number或者某种方法得到的总channel 数，
: 再得到的single channel conductance 根本没办法和 single channel
: electrophysiology 的实验比啊？
: 搞不好连一个数量级都不是的。。
: 是我理解错什么东西了吗？ 麻烦高人指点。。。越来越昏了。。。
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S*****s
发帖数: 287 | 10 我不知道 lz 做的是什么方向，表达的是什么蛋白，但是我并不赞同楼上各位说的离子
流动方向。lz 要表达的是 ion channel 还是 transporter？如果是 ion channel 的
话不管蛋白以什么方向跨膜，通道打开之后离子都可以往离子浓度底的那个方向流动。
只是 ligand binding domain 没有接触到 ligand 的那些通道处于关闭状态没有电子
通过而已，而且这个问题在 voltage gated ion channel 里面并不存在。如果是
transporter 的话离子流动是单向的，不过我印象里面这个动作需要能量驱动，应该也
不可能两个方向都有电流然后整体上 cancel 掉。 |
i***l
发帖数: 1656 | 11 nobody said cancel 掉 except for LZ
Gated channel or not, it depends..........
no details from LZ, no solution
yep for transporter or non-gated channel, solute gradient matters
【在 S*****s 的大作中提到】
: 我不知道 lz 做的是什么方向，表达的是什么蛋白，但是我并不赞同楼上各位说的离子
: 流动方向。lz 要表达的是 ion channel 还是 transporter？如果是 ion channel 的
: 话不管蛋白以什么方向跨膜，通道打开之后离子都可以往离子浓度底的那个方向流动。
: 只是 ligand binding domain 没有接触到 ligand 的那些通道处于关闭状态没有电子
: 通过而已，而且这个问题在 voltage gated ion channel 里面并不存在。如果是
: transporter 的话离子流动是单向的，不过我印象里面这个动作需要能量驱动，应该也
: 不可能两个方向都有电流然后整体上 cancel 掉。
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