h********n
发帖数: 4079 | 1 我有个Cre-induced tissue specific KO mouse model.
在mammary gland里, 有些细胞会表达Cre, 可能是epithelial cell. 有什么比较方便
的办法可以知道有多少细胞表达了Cre然后完成KO?
IHC for Cre and the KO gene?
or in situ hybridization for the KO gene?
谢谢. |
J******s
发帖数: 7538 | 2 FACS is better, if u have proper antibody against the gene u targeted off.
【在 h********n 的大作中提到】
: 我有个Cre-induced tissue specific KO mouse model.
: 在mammary gland里, 有些细胞会表达Cre, 可能是epithelial cell. 有什么比较方便
: 的办法可以知道有多少细胞表达了Cre然后完成KO?
: IHC for Cre and the KO gene?
: or in situ hybridization for the KO gene?
: 谢谢.
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D*a
发帖数: 6830 | 3 你需要多么精确啊？
我们都是作个pcr，做个western，就差不多了。不过我们挑的cre 都是有paper发表出
来的，不是首先用的，想必reviewer不会揪着不放。
cre不是都有promoter的么，为啥“可能”是epithelial cell？ |
m*****u
发帖数: 15526 | 4 use cre reporter mice. Such as YFP, LacZ. |
m*p
发帖数: 226 | 5 If you need a number, you can isolate the Cre-R26Y cells and then do a
realtime PCR. |
h********n
发帖数: 4079 | 6 我想知道的是epithelial cell里面有多少表达了Cre.
promoter提供specificity, 但不保证每个"这种"细胞都表达, 比如human surfactant
C promoter.
【在 D*a 的大作中提到】
: 你需要多么精确啊？
: 我们都是作个pcr，做个western，就差不多了。不过我们挑的cre 都是有paper发表出
: 来的，不是首先用的，想必reviewer不会揪着不放。
: cre不是都有promoter的么，为啥“可能”是epithelial cell？
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a*****g
发帖数: 543 | 7 做个lacZ的reporter breeding吧。
promoter的specificity 也不是百分之百的，做一个reporter strain的breeding能回答
不少问题。
surfactant
【在 h********n 的大作中提到】
: 我想知道的是epithelial cell里面有多少表达了Cre.
: promoter提供specificity, 但不保证每个"这种"细胞都表达, 比如human surfactant
: C promoter.
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i*****n
发帖数: 53 | 8 breed to reporter mice 才是正解。 比如有一种老鼠 在LacZ 之前有 floxed stop
codon. |
c****l
发帖数: 1086 | 9 real-time PCR, calculate the combined / uncombined loxP, then you get the
ratio. |
D*a
发帖数: 6830 | 10 那还是用 reporter mice 吧，一边是你的细胞有cre的细胞有lacZ或者xxFP，你还可以
做几个epithelial cell特异性的marker，double markers。
surfactant
【在 h********n 的大作中提到】
: 我想知道的是epithelial cell里面有多少表达了Cre.
: promoter提供specificity, 但不保证每个"这种"细胞都表达, 比如human surfactant
: C promoter.
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D*a
发帖数: 6830 | 11 或者antibody anti－Cre也可以试试，看见过有人发文章用这种方法做的。
reporter mice的一个问题是时间上会比真正的KO晚一点，因为从KO到蛋白分泌到足够
量的蛋白能够在显微镜下观察还是有段时间的
另外切片比cell sorting方便多了，你还可以看见KO pattern。 |
f********n
发帖数: 6465 | |
h********n
发帖数: 4079 | 13 谢谢.
【在 D*a 的大作中提到】
: 那还是用 reporter mice 吧，一边是你的细胞有cre的细胞有lacZ或者xxFP，你还可以
: 做几个epithelial cell特异性的marker，double markers。
:
: surfactant
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