f*******g 发帖数: 35 | 1 请教高手一个问题, 我从hybridoma cells 纯化抗体, 得到的抗体 跑胶, 除了重链
(55KD)和轻链 (25KD)外,还有一条 带,在轻链下面。 请问这可能是什么原因造
成的呢?
谢谢了!!! |
j********8 发帖数: 21 | 2 marker跟俺用的一样 其余的不知道:)
帮顶 |
V********n 发帖数: 305 | 3 how u purified the ab, more details please |
f*******g 发帖数: 35 | 4 培养hybridoma cells, 收集上清, 用gamma-bind plus beads (protein G) 纯化 抗体
,然后concentrate elute. buffer change to PBS
谢谢! |
m*******r 发帖数: 7495 | 5 你的空(不产抗体细胞)control是什么?
【在 f*******g 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请教高手一个问题, 我从hybridoma cells 纯化抗体, 得到的抗体 跑胶, 除了重链 : (55KD)和轻链 (25KD)外,还有一条 带,在轻链下面。 请问这可能是什么原因造 : 成的呢? : 谢谢了!!!
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V********n 发帖数: 305 | 6 俺用的方法。也是用Protein G的办法,Buffer 用Pierce的Binding Buffer和Elution
Buffer。得到的Elution,直接用Millipore的Spin Column清洗加浓缩,选大一些的Cut
(比如50KD),避免小片段污染。
看你的胶,有小片段(~20 KD),可能是蛋白降解,也可能是小片段污染。另,高
分子处还有条带(~200KD),可检查蛋白变性是否彻底。 |
f*******g 发帖数: 35 | 7 没有control, 抗体纯化, 用什么做negative control呢? 我binding buf
fer 用的PBS, Elution buffer 用的是 Acetic A
cid,用NaOH中和, 然后用 Millipore的Spin Column
清洗 浓缩, cut好像用的是30 KD的,
浓缩的时候,很困难! 需要半小时到一小时的样子,才能浓缩,而且有很多precipitates, 不知道原因?
谢谢楼上的回复,小片段污染常见么? |
c********o 发帖数: 135 | |
V********n 发帖数: 305 | 9 呵呵,RE这个。没注意LZ的培养条件,俺一般是从ascites开始提的。
【在 c********o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 血清里的牛IgG?
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