f*******g
发帖数: 35 | 1 请教高手一个问题， 我从hybridoma cells 纯化抗体， 得到的抗体 跑胶， 除了重链
（55KD）和轻链 （25KD）外，还有一条 带，在轻链下面。 请问这可能是什么原因造
成的呢？
谢谢了！！！ |
j********8
发帖数: 21 | 2 marker跟俺用的一样 其余的不知道：）
帮顶 |
V********n
发帖数: 305 | 3 how u purified the ab, more details please |
f*******g
发帖数: 35 | 4 培养hybridoma cells, 收集上清, 用gamma-bind plus beads (protein G) 纯化 抗体
,然后concentrate elute. buffer change to PBS
谢谢! |
m*******r
发帖数: 7495 | 5 你的空（不产抗体细胞）control是什么？
【在 f*******g 的大作中提到】
: 请教高手一个问题， 我从hybridoma cells 纯化抗体， 得到的抗体 跑胶， 除了重链
: （55KD）和轻链 （25KD）外，还有一条 带，在轻链下面。 请问这可能是什么原因造
: 成的呢？
: 谢谢了！！！
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V********n
发帖数: 305 | 6 俺用的方法。也是用Protein G的办法，Buffer 用Pierce的Binding Buffer和Elution
Buffer。得到的Elution，直接用Millipore的Spin Column清洗加浓缩，选大一些的Cut
（比如５０KD），避免小片段污染。
看你的胶，有小片段（～２０ KD），可能是蛋白降解，也可能是小片段污染。另，高
分子处还有条带（～２００KD），可检查蛋白变性是否彻底。 |
f*******g
发帖数: 35 | 7 没有control, 抗体纯化, 用什么做negative control呢? 我ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆ
ｆｅｒ 用的ＰＢＳ， Ｅｌｕｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ 用的是 Ａｃｅｔｉｃ Ａ
ｃｉｄ，用ＮａＯＨ中和， 然后用 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ的Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ
清洗 浓缩， ｃｕｔ好像用的是３０ ＫＤ的，
浓缩的时候，很困难！ 需要半小时到一小时的样子，才能浓缩，而且有很多ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｓ， 不知道原因？
谢谢楼上的回复，小片段污染常见么？ |
c********o
发帖数: 135 | |
V********n
发帖数: 305 | 9 呵呵，RE这个。没注意LZ的培养条件，俺一般是从ascites开始提的。
【在 c********o 的大作中提到】
: 血清里的牛IgG?
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