a*********7
发帖数: 342 | 1 已经在几个不同的载体里试过，看到的结果都差不多，就是在western上看到的band比
野生型稍高一些，怎么回事？ |
I*****y
发帖数: 6402 | 2 稍高一些? 稍高 by how much (percentage wise)?
【在 a*********7 的大作中提到】
: 已经在几个不同的载体里试过，看到的结果都差不多，就是在western上看到的band比
: 野生型稍高一些，怎么回事？
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s******y
发帖数: 28562 | 3 怎么这两天怎么多人问类似的问题？ ：）
最可能的其实就是蛋白结合SDS的能力给改变了，所以跑起来快慢有变化。
【在 a*********7 的大作中提到】
: 已经在几个不同的载体里试过，看到的结果都差不多，就是在western上看到的band比
: 野生型稍高一些，怎么回事？
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b******n
发帖数: 4225 | 4 会不会都是买来的胶，然后最近公司的胶出了问题？比如说SDS量不够
【在 s******y 的大作中提到】
: 怎么这两天怎么多人问类似的问题？ ：）
: 最可能的其实就是蛋白结合SDS的能力给改变了，所以跑起来快慢有变化。
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I*****y
发帖数: 6402 | 5 检查整个plasmid的sequencing results了？确信没有 fusion sequence by accident?
【在 a*********7 的大作中提到】
: 已经在几个不同的载体里试过，看到的结果都差不多，就是在western上看到的band比
: 野生型稍高一些，怎么回事？
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s******y
发帖数: 28562 | 6 应该不是。
胶里的SDS一般都是大大过量的。
要确认一下也很容易，把几个不同mutant 放在同一个胶里跑就知道了
【在 b******n 的大作中提到】
: 会不会都是买来的胶，然后最近公司的胶出了问题？比如说SDS量不够
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T**********t
发帖数: 1604 | 7 是啊，怎么就不做个质谱确认一下分子量先呢？现在质谱应该挺普及的了吧，一般学校
只要有core facility的都应该有。
【在 s******y 的大作中提到】
: 怎么这两天怎么多人问类似的问题？ ：）
: 最可能的其实就是蛋白结合SDS的能力给改变了，所以跑起来快慢有变化。
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s*********f
发帖数: 155 | 8 It could oligomerize after deletion so knowing it is bigger by how much is
important.
Mass spect seems a nice way to confirm you have the right protein size.
Some proteins run abnormally on SDS PAGE, that is, showing up at positions
significantly different from expected.
Is it possible to have different post-translational modification after the
deletion?
What is the protein? Why are you deleting these 5 aa? |
a*********7
发帖数: 342 | 9 谢谢大家的帮助，我还有一些信息：
大概就大１，２个KD, 从western blot 上看. 我觉的不可能是stop codon 的问题，因
为我已经试过不同的载体了，每个载体都出现一样的结果. 而且我 试过只delete最末
端２个aa, 结果在western blot 上看和野生型没区别。为什么多delete 3个就大了呢
，我个人觉的可能是deletion 导致结构变化，然后出现了不同的posttranslational
modification. 大家觉的有没有道理？ |
