m******5
发帖数: 1383 | 1 请教一个关于knock in mice genotyping的问题：
我们刚拿到一个knock in mice，刚刚用插入片段的引物做genotyping确定了germline
transmission.
关于如何keep这个line,见过一种观点，是最好一直用long range pcr来keep colony，
维持一个完整的选择压力，也就是说如果一直用插入片段的小片段pcr，可能会导致意
外地保留了一些随机事件，在某一代出现飘变
但是long range pcr成本当然要比普通pcr高多了，光酶就贵了n倍——
另一些常见做法就是就选择一个特意的插入片段，甚至neo casette来genotyping
在大多数实验室似乎也work得很好
不知是否有有经验的同学来谈谈？ |
D*a
发帖数: 6830 | 2 有没有办法pcr 接入位点？pcr一个引物在基因组上，一个引物在外源序列上 |
m******5
发帖数: 1383 | 3 这样就构成long range PCR了， 长期下来价格不菲……
我就是想知道我是不是over think了
【在 D*a 的大作中提到】
: 有没有办法pcr 接入位点？pcr一个引物在基因组上，一个引物在外源序列上
|
s******r
发帖数: 2876 | 4 只PCR接头的部分，不算什么long range吧。
这样就构成long range PCR了， 长期下来价格不菲……
我就是想知道我是不是over think了
【在 m******5 的大作中提到】
: 这样就构成long range PCR了， 长期下来价格不菲……
: 我就是想知道我是不是over think了
|
m******5
发帖数: 1383 | 5 homology recombination 有6k长臂和4k短臂
从knock in specific sequence p到长臂外面或者短臂外面都构成Long range了
【在 s******r 的大作中提到】
: 只PCR接头的部分，不算什么long range吧。
:
: 这样就构成long range PCR了， 长期下来价格不菲……
: 我就是想知道我是不是over think了
|
s******r
发帖数: 2876 | 6 为什么非得P到臂的外面？
如果你一开始已经鉴定完毕，
后面只要P个接头就行了吧，
实在不放心，第一批老鼠冷冻一些胚胎。
homology recombination 有6k长臂和4k短臂
从knock in specific sequence p到长臂外面或者短臂外面都构成Long range了
【在 m******5 的大作中提到】
: homology recombination 有6k长臂和4k短臂
: 从knock in specific sequence p到长臂外面或者短臂外面都构成Long range了
|
a******8
发帖数: 56 | |
l*****e
发帖数: 424 | 8 马上要开始学习做老鼠了，很多东西都不知道
请问下面这段话什么意思？要keep一个mouse line不是靠breed的吗？为什么PCR可以维
持“完整的选择压力”？
，维持一个完整的选择压力，也就是说如果一直用插入片段的小片段pcr，可能会导致
意外地保留了一些随机事件，在某一代出现飘变
【在 m******5 的大作中提到】
: homology recombination 有6k长臂和4k短臂
: 从knock in specific sequence p到长臂外面或者短臂外面都构成Long range了
|
|
D*a
发帖数: 6830 | 9 其实我也没理解会飘到哪里。
飘了又怎么样？
【在 l*****e 的大作中提到】
: 马上要开始学习做老鼠了，很多东西都不知道
: 请问下面这段话什么意思？要keep一个mouse line不是靠breed的吗？为什么PCR可以维
: 持“完整的选择压力”？
:
: ，维持一个完整的选择压力，也就是说如果一直用插入片段的小片段pcr，可能会导致
: 意外地保留了一些随机事件，在某一代出现飘变
|
