s*********y
发帖数: 387 | 1 处理了大概30个质粒，还有30-50个需要大提，
处理的30个中，主要是pCDNA和peGFP的质粒，插入大概3k 到 8k的基因片段
部分比较好，150ml菌，能有1000ng per ul浓度，有1ml体积
部分比较的诡异，浓度只有30 ng per ul，在1ml的体积中。
但是测序的 时候 都是 对的！！！！而且浓度低的 mini prep没有任何的问题
浓度在200 ng per ul，体积在 50ul |
S******e
发帖数: 393 | 2 你说的浓度低的都是插入的大片段质粒吧，
如果是，那就算常见，我常碰到。 |
s*********y
发帖数: 387 | 3 do you have a way to get high quantity of plasmid instead?
【在 S******e 的大作中提到】
: 你说的浓度低的都是插入的大片段质粒吧，
: 如果是，那就算常见，我常碰到。
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s******s
发帖数: 13035 | 4 本身长的少办法也不多。土方是摇10倍体积，对数期加低浓度氯霉素
【在 s*********y 的大作中提到】
: do you have a way to get high quantity of plasmid instead?
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S******e
发帖数: 393 | 5 4楼说的是一个方法，不过我没试过，
根据我的经验有几点你或许试试，
1 用新transformed 的克隆，2 加大体积，3 菌不要长老了，宁可稀一点，
4 可稍降低一下培养温度
【在 s*********y 的大作中提到】
: do you have a way to get high quantity of plasmid instead?
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t*****z
发帖数: 1598 | 6 大量培养之前要先活化，这步省掉了，很可能产量低。培养这几步照说明书严格操作试
试。（single colony, start culture 8h, mass culture 12-16h） |
s*********y
发帖数: 387 | 7 thanks. We did exactly follow the manufacture instructions...
【在 t*****z 的大作中提到】
: 大量培养之前要先活化，这步省掉了，很可能产量低。培养这几步照说明书严格操作试
: 试。（single colony, start culture 8h, mass culture 12-16h）
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b****r
发帖数: 17995 | 8 请问所谓活化，是说先摇小体积？
【在 t*****z 的大作中提到】
: 大量培养之前要先活化，这步省掉了，很可能产量低。培养这几步照说明书严格操作试
: 试。（single colony, start culture 8h, mass culture 12-16h）
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t*****z
发帖数: 1598 | 9 是的，特别是对于冷冻的菌株，先划板，然后小体积，然后大体积。
【在 b****r 的大作中提到】
: 请问所谓活化，是说先摇小体积？
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t*****z
发帖数: 1598 | 10 我也遇到过，某个常见的4kb左右的小质粒，大抽出来，总共100ul，浓度是150ng/ul。
抽了两次都是这样。看看质粒本身没什么特别的，不知道怎么回事。我觉得这事情和质
粒大小关系不大。你的也才大了一些些而已啊。 |
a****d
发帖数: 1919 | 11 for the 2-propanol precipitation step, I put the DNA/propanal mix at -20
overnight, then follow the rest procedure. By doing this, you get get good
yield. |
