s*********y 发帖数: 387 | 1 处理了大概30个质粒,还有30-50个需要大提,
处理的30个中,主要是pCDNA和peGFP的质粒,插入大概3k 到 8k的基因片段
部分比较好,150ml菌,能有1000ng per ul浓度,有1ml体积
部分比较的诡异,浓度只有30 ng per ul,在1ml的体积中。
但是测序的 时候 都是 对的!!!!而且浓度低的 mini prep没有任何的问题
浓度在200 ng per ul,体积在 50ul |
S******e 发帖数: 393 | 2 你说的浓度低的都是插入的大片段质粒吧,
如果是,那就算常见,我常碰到。 |
s*********y 发帖数: 387 | 3 do you have a way to get high quantity of plasmid instead?
【在 S******e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你说的浓度低的都是插入的大片段质粒吧, : 如果是,那就算常见,我常碰到。
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s******s 发帖数: 13035 | 4 本身长的少办法也不多。土方是摇10倍体积,对数期加低浓度氯霉素
【在 s*********y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : do you have a way to get high quantity of plasmid instead?
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S******e 发帖数: 393 | 5 4楼说的是一个方法,不过我没试过,
根据我的经验有几点你或许试试,
1 用新transformed 的克隆,2 加大体积,3 菌不要长老了,宁可稀一点,
4 可稍降低一下培养温度
【在 s*********y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : do you have a way to get high quantity of plasmid instead?
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t*****z 发帖数: 1598 | 6 大量培养之前要先活化,这步省掉了,很可能产量低。培养这几步照说明书严格操作试
试。(single colony, start culture 8h, mass culture 12-16h) |
s*********y 发帖数: 387 | 7 thanks. We did exactly follow the manufacture instructions...
【在 t*****z 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 大量培养之前要先活化,这步省掉了,很可能产量低。培养这几步照说明书严格操作试 : 试。(single colony, start culture 8h, mass culture 12-16h)
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b****r 发帖数: 17995 | 8 请问所谓活化,是说先摇小体积?
【在 t*****z 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 大量培养之前要先活化,这步省掉了,很可能产量低。培养这几步照说明书严格操作试 : 试。(single colony, start culture 8h, mass culture 12-16h)
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t*****z 发帖数: 1598 | 9 是的,特别是对于冷冻的菌株,先划板,然后小体积,然后大体积。
【在 b****r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请问所谓活化,是说先摇小体积?
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t*****z 发帖数: 1598 | 10 我也遇到过,某个常见的4kb左右的小质粒,大抽出来,总共100ul,浓度是150ng/ul。
抽了两次都是这样。看看质粒本身没什么特别的,不知道怎么回事。我觉得这事情和质
粒大小关系不大。你的也才大了一些些而已啊。 |
a****d 发帖数: 1919 | 11 for the 2-propanol precipitation step, I put the DNA/propanal mix at -20
overnight, then follow the rest procedure. By doing this, you get get good
yield. |