s******y
发帖数: 220 | 1 本人老鼠新手，菜鸟上路就要cross三个转基因。
起始条件是：三个蛋白，蛋白C KO，蛋白S overexpression, 蛋白R point mutation
Knock in.
我杂交了 male （C het，S overexpression） 和female （R homo）。
现在第二代开始得到我想要的 Cnull, S overexprssion, R homo.
但是我的这些老鼠的genetic background很不一样，我拿到的 breeder male就是很
mixed 的背景，据说主要是FVB/N, 那个breeder female好点，是C57BL/6, 所以这后代
也杂得很厉害。back cross回去，耗时间太久，请教老鼠达人们我不back cross 老鼠
，OK不？
如果是OK的，那我的control就要很严格的match了，现在需要的control 至少是wt，
Cnull S overexpression。 如果我从cross的后代里， 比如说第二代， 得到了这些
control （wt， Cnull S）， 我能不能单独把他们设定为control breeder，这样
genotpying量要少一些。 还是说我必须要从 Chet S overexpression， Rhet 的
breeding pair里面得到这些control呢？
我知道理论上后者可能是最好的，但是老鼠太多了，我单独设定control breeding
pair 可以减少好多genotyping，但是这样可行吗？
希望问清楚了，谢谢xdjm们长期以来的帮助，收益很多。
|
O******e
发帖数: 4845 | 2 比较纯的遗传背景是基本要求，建议你不要偷懒，先把这个事情搞定，不然你以后
的结果很难解释。
【在 s******y 的大作中提到】
: 本人老鼠新手，菜鸟上路就要cross三个转基因。
: 起始条件是：三个蛋白，蛋白C KO，蛋白S overexpression, 蛋白R point mutation
: Knock in.
: 我杂交了 male （C het，S overexpression） 和female （R homo）。
: 现在第二代开始得到我想要的 Cnull, S overexprssion, R homo.
: 但是我的这些老鼠的genetic background很不一样，我拿到的 breeder male就是很
: mixed 的背景，据说主要是FVB/N, 那个breeder female好点，是C57BL/6, 所以这后代
: 也杂得很厉害。back cross回去，耗时间太久，请教老鼠达人们我不back cross 老鼠
: ，OK不？
: 如果是OK的，那我的control就要很严格的match了，现在需要的control 至少是wt，
|
s******y
发帖数: 220 | 3 谢谢。
主要是那个公鼠比较杂，是个disease model， 给我的人自己好像都是用很mixed的老
鼠做的，杂交进去另一个基因是为了rescue这个病老鼠，现在杂出来的结果初步表明有
了新的基因病老鼠有救了，而且同一背景下的病老鼠还是要死。
如果我需要弄纯的话，需要back cross几代呢？
而且，像这样，male是个mixed（fvb/n为主）， female 是C57BL/6， 我要cross到哪
个strain呢/
我听说要弄纯的话，要两三年呢， 有没有快点的办法？
多谢。
【在 O******e 的大作中提到】
: 比较纯的遗传背景是基本要求，建议你不要偷懒，先把这个事情搞定，不然你以后
: 的结果很难解释。
|
h********n
发帖数: 4079 | 4 这个课题的目的是什么?
要我说, 只要比较组的老鼠genetic background相同就可以了. |
h********n
发帖数: 4079 | |
O******e
发帖数: 4845 | 6 ５代以上就基本可以接受了，所以一年内搞定。
往你disease model's background传。
【在 s******y 的大作中提到】
: 谢谢。
: 主要是那个公鼠比较杂，是个disease model， 给我的人自己好像都是用很mixed的老
: 鼠做的，杂交进去另一个基因是为了rescue这个病老鼠，现在杂出来的结果初步表明有
: 了新的基因病老鼠有救了，而且同一背景下的病老鼠还是要死。
: 如果我需要弄纯的话，需要back cross几代呢？
: 而且，像这样，male是个mixed（fvb/n为主）， female 是C57BL/6， 我要cross到哪
: 个strain呢/
: 我听说要弄纯的话，要两三年呢， 有没有快点的办法？
: 多谢。
|
s******y
发帖数: 220 | 7 但是给我model的印度姑娘说，她那个disease model就是杂的啊，她们这个model马上
就要发了，不知道会不会有问题，她建议我说控制好control就OK了，我还是想多问几
个人。。。
【在 O******e 的大作中提到】
: ５代以上就基本可以接受了，所以一年内搞定。
: 往你disease model's background传。
|
s******y
发帖数: 220 | 8 snoopy所见略同，
目的就是看新杂进去的那个基因能不能救heart failure的小鼠啊，
现在貌似是有戏。
不过那genetic background 乱七八糟的，老板也很concern，看到新老鼠活着他担心是
杂交的artifact，后来新背景下的病鼠挂了，才好点。
不过他也不懂老鼠。。。
【在 h********n 的大作中提到】
: 这个课题的目的是什么?
: 要我说, 只要比较组的老鼠genetic background相同就可以了.
|
s******y
发帖数: 220 | |
D*a
发帖数: 6830 | 10 你们这个领域如果大家都是杂的，你也就无所谓了。不过如果你的课题贯穿好几代的话
，既然无论如何要breeding，那么还是纯化一下背景比较好。
你既然已经有背景问题，control就更要用littermate的了。否则你更说不清楚是不是
artifact。 |
