X******n
发帖数: 24 | 1 是不是我的lysis buffer不对（我用的RIPA）,还是说要sonicate lysate? 帮指点一下
，谢谢阿! |
a******8
发帖数: 56 | 2 more details please. what cell line? what antibody? any positive ctrl? |
X******n
发帖数: 24 | 3 Reh细胞，用的santa cruz p53 FL393, 往细胞里加polyIC,或TNFalpha,作positive
control.
我还想做老鼠的spleen sample,有没有好用的抗鼠抗体推荐一个？
【在 a******8 的大作中提到】
: more details please. what cell line? what antibody? any positive ctrl?
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r***e
发帖数: 2539 | 4 你这个FL393能用，要强一点可以试试vector lab 的一个多抗CM-5，死贵。
另外你有什么文献说TNFa能活化p53，麻烦告诉我一声。
【在 X******n 的大作中提到】
: Reh细胞，用的santa cruz p53 FL393, 往细胞里加polyIC,或TNFalpha,作positive
: control.
: 我还想做老鼠的spleen sample,有没有好用的抗鼠抗体推荐一个？
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p*3
发帖数: 45 | 5 :(
我做western挺容易出来的。。。
just kidding
we use this antibody for mouse p53
http://www.labome.com/product/EMD-Millipore/OP29.html
Good Luck
【在 X******n 的大作中提到】
: 是不是我的lysis buffer不对（我用的RIPA）,还是说要sonicate lysate? 帮指点一下
: ，谢谢阿!
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d******u
发帖数: 178 | 6 在非stressed状态下做p53的IB一般来说比较困难。CM5一般用在mouse p53上，按我的
经验应该能看到physiological level的p53，但会比较弱。
这个Reh是leukemia cell line吧，可能本来p53就缺失，有相关信息么？
经典的positive control，要不就是用0.2ug/ml Doxorubixin处理细胞6小时，或者5Gy
IR照射p53 wild-type细胞，然后提蛋白做IB。 |
X******n
发帖数: 24 | |
b*******H
发帖数: 830 | 8 也跟细胞有关系吧。象HELA细胞已经被抑制得很低了。但也能做出来。 |
