W**S
发帖数: 275 | 1 今天悲摧了，generate了一批LENTIVIRUS，结果PURO SELECT之后CELL都死了，这次着
急，没做MIDI PREP，直接用MINIPREP的PLASMID做的TRANSFECTION, PLASMID的质量不
是太好，浓度很低，260/230不太好，同一批用MIDIPREP GENERATE的VIRUS没问题。请
问LENTIVIRUS不WORK会是因为PLASMID的质量不好吗？以前也用MINIPREP的PLASMID做过
，没问题。多谢！ |
s******s
发帖数: 13035 | 2 yes. 要用质量很好的plasmid
【在 W**S 的大作中提到】
: 今天悲摧了，generate了一批LENTIVIRUS，结果PURO SELECT之后CELL都死了，这次着
: 急，没做MIDI PREP，直接用MINIPREP的PLASMID做的TRANSFECTION, PLASMID的质量不
: 是太好，浓度很低，260/230不太好，同一批用MIDIPREP GENERATE的VIRUS没问题。请
: 问LENTIVIRUS不WORK会是因为PLASMID的质量不好吗？以前也用MINIPREP的PLASMID做过
: ，没问题。多谢！
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C*****h
发帖数: 926 | 3 titer会低一两个数量级，但是不会是零。
你的问题是，根本没有virus，所以，应该是别的原因。
【在 W**S 的大作中提到】
: 今天悲摧了，generate了一批LENTIVIRUS，结果PURO SELECT之后CELL都死了，这次着
: 急，没做MIDI PREP，直接用MINIPREP的PLASMID做的TRANSFECTION, PLASMID的质量不
: 是太好，浓度很低，260/230不太好，同一批用MIDIPREP GENERATE的VIRUS没问题。请
: 问LENTIVIRUS不WORK会是因为PLASMID的质量不好吗？以前也用MINIPREP的PLASMID做过
: ，没问题。多谢！
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W**S
发帖数: 275 | 4 多谢！看来要做个MIDIPREP，这次MINIPREP的完全不WORK,CELL死光光了。
【在 s******s 的大作中提到】
: yes. 要用质量很好的plasmid
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j****x
发帖数: 1704 | 5 质粒浓度很低，纯度很差的话，差出N个数量级一点不奇怪，如果内毒素再高一点，不
出毒也很正常
【在 C*****h 的大作中提到】
: titer会低一两个数量级，但是不会是零。
: 你的问题是，根本没有virus，所以，应该是别的原因。
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C*****h
发帖数: 926 | 6 miniprep的DNA质量，再怎么也不会太差。
我的经验是，我用miniprep做的virus，比midiprep的要高。
我现在一直就是用miniprep的DNA，做virus，没有出现过问题。
【在 j****x 的大作中提到】
: 质粒浓度很低，纯度很差的话，差出N个数量级一点不奇怪，如果内毒素再高一点，不
: 出毒也很正常
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W**S
发帖数: 275 | 7 我也是奇怪在这呢，就算TITER低也不至于一点没有。PLASMID用RE DIGESTION CHECK了
，有INSERT, 是PLKO-TET-ON LENTIVIRUS SHRNA construct, 用STBL2转的，不至于丢
了PURO啊。
【在 C*****h 的大作中提到】
: titer会低一两个数量级，但是不会是零。
: 你的问题是，根本没有virus，所以，应该是别的原因。
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W**S
发帖数: 275 | 8 我以前也用MINIPREP，没问题。这辈子做LENTIVIRUS都没出过问题，今天不知道咋了。
对了，LAB MANAGER图便宜，最近ORDER的是NECLEOBOND的MINIPREP KIT，以前都用
QIAGEN的，这次用这个KIT提完，感觉ELUTE不像TE的感觉，像有DETERGENT是的，一弹
有很多BUBBLE，后来问LAB人，他们用这KIT都做OPTIONAL的AW BUFFER WASH，我没做。
不知道是不是这个原因。
【在 C*****h 的大作中提到】
: miniprep的DNA质量，再怎么也不会太差。
: 我的经验是，我用miniprep做的virus，比midiprep的要高。
: 我现在一直就是用miniprep的DNA，做virus，没有出现过问题。
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j****x
发帖数: 1704 | 9 这个难说，mini的KIT质量是良莠不齐，我曾经用过一个之后连GFP转染都有问题的。
按LZ的说法，抽提的质粒浓度低质量差的话，本身就说明不正常。
【在 C*****h 的大作中提到】
: miniprep的DNA质量，再怎么也不会太差。
: 我的经验是，我用miniprep做的virus，比midiprep的要高。
: 我现在一直就是用miniprep的DNA，做virus，没有出现过问题。
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C*****h
发帖数: 926 | 10 把elute下来的DNA，用酒精沉淀一下就行了。
【在 W**S 的大作中提到】
: 我以前也用MINIPREP，没问题。这辈子做LENTIVIRUS都没出过问题，今天不知道咋了。
: 对了，LAB MANAGER图便宜，最近ORDER的是NECLEOBOND的MINIPREP KIT，以前都用
: QIAGEN的，这次用这个KIT提完，感觉ELUTE不像TE的感觉，像有DETERGENT是的，一弹
: 有很多BUBBLE，后来问LAB人，他们用这KIT都做OPTIONAL的AW BUFFER WASH，我没做。
: 不知道是不是这个原因。
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s******s
发帖数: 13035 | 11 我们实验室的标准是,midi或者maxi，如果用mini, 必须是qiacube做出来的
【在 j****x 的大作中提到】
: 这个难说，mini的KIT质量是良莠不齐，我曾经用过一个之后连GFP转染都有问题的。
: 按LZ的说法，抽提的质粒浓度低质量差的话，本身就说明不正常。
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