x**y 发帖数: 46 | 1 请教有经验的大侠:
想在MEF细胞里,做转染。哪个试剂效率高啊?另外,用病毒转染,效率能有多少? |
s******y 发帖数: 28562 | 2 一般方法里,我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好,能达到
20%而且细胞不容易死。
效率比较高的还有另外几个,但是细胞死得很厉害,你要是无所谓的话明天我给你
找找看是哪个厂家的。
病毒转染一般能达到70%以上 (要注意细胞浓度,最好在50%~75%
confluence)
【在 x**y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请教有经验的大侠: : 想在MEF细胞里,做转染。哪个试剂效率高啊?另外,用病毒转染,效率能有多少?
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O******e 发帖数: 4845 | 3 20%是挺高的了,用Lipo。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 一般方法里,我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好,能达到 : 20%而且细胞不容易死。 : 效率比较高的还有另外几个,但是细胞死得很厉害,你要是无所谓的话明天我给你 : 找找看是哪个厂家的。 : 病毒转染一般能达到70%以上 (要注意细胞浓度,最好在50%~75% : confluence)
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v*********d 发帖数: 382 | 4 要高效肯定是病毒,效率就看titer了,高titer下,90% 没问题
要是50%-70% 左右可以的话,可以试试lonza (Amaxa)或者invitrogen 的 neon
transfection system, 都是电+化学的。 另外,MEF passage越多,效率越差
【在 x**y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请教有经验的大侠: : 想在MEF细胞里,做转染。哪个试剂效率高啊?另外,用病毒转染,效率能有多少?
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C****b 发帖数: 90 | 5 We have a RNAi screener who spent around 3 months to optimize the MEF
transfection condition. Finally she got 70~80% transfection efficiency.
Summary
Reagent: DharmaFECT
Cell: 30% confluent MEF instead of 70~80% confluent
Good luck! |
x**y 发帖数: 46 | 6 非常感谢大家提供的建议。
【在 x**y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请教有经验的大侠: : 想在MEF细胞里,做转染。哪个试剂效率高啊?另外,用病毒转染,效率能有多少?
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x**y 发帖数: 46 | 7 多谢。这个试剂DharmaFECT,毒性大不大?细胞转染后死亡率高不高?
【在 C****b 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : We have a RNAi screener who spent around 3 months to optimize the MEF : transfection condition. Finally she got 70~80% transfection efficiency. : Summary : Reagent: DharmaFECT : Cell: 30% confluent MEF instead of 70~80% confluent : Good luck!
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x**y 发帖数: 46 | 8 请教有经验的大侠:
想在MEF细胞里,做转染。哪个试剂效率高啊?另外,用病毒转染,效率能有多少? |
s******y 发帖数: 28562 | 9 一般方法里,我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好,能达到
20%而且细胞不容易死。
效率比较高的还有另外几个,但是细胞死得很厉害,你要是无所谓的话明天我给你
找找看是哪个厂家的。
病毒转染一般能达到70%以上 (要注意细胞浓度,最好在50%~75%
confluence)
【在 x**y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请教有经验的大侠: : 想在MEF细胞里,做转染。哪个试剂效率高啊?另外,用病毒转染,效率能有多少?
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O******e 发帖数: 4845 | 10 20%是挺高的了,用Lipo。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 一般方法里,我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好,能达到 : 20%而且细胞不容易死。 : 效率比较高的还有另外几个,但是细胞死得很厉害,你要是无所谓的话明天我给你 : 找找看是哪个厂家的。 : 病毒转染一般能达到70%以上 (要注意细胞浓度,最好在50%~75% : confluence)
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v*********d 发帖数: 382 | 11 要高效肯定是病毒,效率就看titer了,高titer下,90% 没问题
要是50%-70% 左右可以的话,可以试试lonza (Amaxa)或者invitrogen 的 neon
transfection system, 都是电+化学的。 另外,MEF passage越多,效率越差
【在 x**y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请教有经验的大侠: : 想在MEF细胞里,做转染。哪个试剂效率高啊?另外,用病毒转染,效率能有多少?
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C****b 发帖数: 90 | 12 We have a RNAi screener who spent around 3 months to optimize the MEF
transfection condition. Finally she got 70~80% transfection efficiency.
Summary
Reagent: DharmaFECT
Cell: 30% confluent MEF instead of 70~80% confluent
Good luck! |
x**y 发帖数: 46 | 13 非常感谢大家提供的建议。
【在 x**y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请教有经验的大侠: : 想在MEF细胞里,做转染。哪个试剂效率高啊?另外,用病毒转染,效率能有多少?
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x**y 发帖数: 46 | 14 多谢。这个试剂DharmaFECT,毒性大不大?细胞转染后死亡率高不高?
【在 C****b 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : We have a RNAi screener who spent around 3 months to optimize the MEF : transfection condition. Finally she got 70~80% transfection efficiency. : Summary : Reagent: DharmaFECT : Cell: 30% confluent MEF instead of 70~80% confluent : Good luck!
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C****b 发帖数: 90 | 15
不大也不高。 你最好做些预试验。
【在 x**y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 多谢。这个试剂DharmaFECT,毒性大不大?细胞转染后死亡率高不高?
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