x**y
发帖数: 46 | 1 请教有经验的大侠：
想在MEF细胞里，做转染。哪个试剂效率高啊？另外，用病毒转染，效率能有多少？ |
s******y
发帖数: 28562 | 2 一般方法里，我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好，能达到
２０％而且细胞不容易死。
效率比较高的还有另外几个，但是细胞死得很厉害，你要是无所谓的话明天我给你
找找看是哪个厂家的。
病毒转染一般能达到７０％以上 （要注意细胞浓度，最好在５０％～７５％
confluence)
【在 x**y 的大作中提到】
: 请教有经验的大侠：
: 想在MEF细胞里，做转染。哪个试剂效率高啊？另外，用病毒转染，效率能有多少？
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O******e
发帖数: 4845 | 3 20%是挺高的了，用Lipo。
【在 s******y 的大作中提到】
: 一般方法里，我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好，能达到
: ２０％而且细胞不容易死。
: 效率比较高的还有另外几个，但是细胞死得很厉害，你要是无所谓的话明天我给你
: 找找看是哪个厂家的。
: 病毒转染一般能达到７０％以上 （要注意细胞浓度，最好在５０％～７５％
: confluence)
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v*********d
发帖数: 382 | 4 要高效肯定是病毒，效率就看titer了，高titer下，90％ 没问题
要是50％－70％ 左右可以的话，可以试试lonza （Amaxa）或者invitrogen 的 neon
transfection system， 都是电＋化学的。 另外，MEF passage越多，效率越差
【在 x**y 的大作中提到】
: 请教有经验的大侠：
: 想在MEF细胞里，做转染。哪个试剂效率高啊？另外，用病毒转染，效率能有多少？
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C****b
发帖数: 90 | 5 We have a RNAi screener who spent around 3 months to optimize the MEF
transfection condition. Finally she got 70~80% transfection efficiency.
Summary
Reagent: DharmaFECT
Cell: 30% confluent MEF instead of 70~80% confluent
Good luck! |
x**y
发帖数: 46 | 6 非常感谢大家提供的建议。
【在 x**y 的大作中提到】
: 请教有经验的大侠：
: 想在MEF细胞里，做转染。哪个试剂效率高啊？另外，用病毒转染，效率能有多少？
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x**y
发帖数: 46 | 7 多谢。这个试剂DharmaFECT，毒性大不大？细胞转染后死亡率高不高？
【在 C****b 的大作中提到】
: We have a RNAi screener who spent around 3 months to optimize the MEF
: transfection condition. Finally she got 70~80% transfection efficiency.
: Summary
: Reagent: DharmaFECT
: Cell: 30% confluent MEF instead of 70~80% confluent
: Good luck!
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x**y
发帖数: 46 | 8 请教有经验的大侠：
想在MEF细胞里，做转染。哪个试剂效率高啊？另外，用病毒转染，效率能有多少？ |
s******y
发帖数: 28562 | 9 一般方法里，我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好，能达到
２０％而且细胞不容易死。
效率比较高的还有另外几个，但是细胞死得很厉害，你要是无所谓的话明天我给你
找找看是哪个厂家的。
病毒转染一般能达到７０％以上 （要注意细胞浓度，最好在５０％～７５％
confluence)
【在 x**y 的大作中提到】
: 请教有经验的大侠：
: 想在MEF细胞里，做转染。哪个试剂效率高啊？另外，用病毒转染，效率能有多少？
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O******e
发帖数: 4845 | 10 20%是挺高的了，用Lipo。
【在 s******y 的大作中提到】
: 一般方法里，我用过的是lipofectamine with Plus reagent 比较好，能达到
: ２０％而且细胞不容易死。
: 效率比较高的还有另外几个，但是细胞死得很厉害，你要是无所谓的话明天我给你
: 找找看是哪个厂家的。
: 病毒转染一般能达到７０％以上 （要注意细胞浓度，最好在５０％～７５％
: confluence)
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v*********d
发帖数: 382 | 11 要高效肯定是病毒，效率就看titer了，高titer下，90％ 没问题
要是50％－70％ 左右可以的话，可以试试lonza （Amaxa）或者invitrogen 的 neon
transfection system， 都是电＋化学的。 另外，MEF passage越多，效率越差
【在 x**y 的大作中提到】
: 请教有经验的大侠：
: 想在MEF细胞里，做转染。哪个试剂效率高啊？另外，用病毒转染，效率能有多少？
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C****b
发帖数: 90 | 12 We have a RNAi screener who spent around 3 months to optimize the MEF
transfection condition. Finally she got 70~80% transfection efficiency.
Summary
Reagent: DharmaFECT
Cell: 30% confluent MEF instead of 70~80% confluent
Good luck! |
x**y
发帖数: 46 | 13 非常感谢大家提供的建议。
【在 x**y 的大作中提到】
: 请教有经验的大侠：
: 想在MEF细胞里，做转染。哪个试剂效率高啊？另外，用病毒转染，效率能有多少？
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x**y
发帖数: 46 | 14 多谢。这个试剂DharmaFECT，毒性大不大？细胞转染后死亡率高不高？
【在 C****b 的大作中提到】
: We have a RNAi screener who spent around 3 months to optimize the MEF
: transfection condition. Finally she got 70~80% transfection efficiency.
: Summary
: Reagent: DharmaFECT
: Cell: 30% confluent MEF instead of 70~80% confluent
: Good luck!
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C****b
发帖数: 90 | 15
不大也不高。 你最好做些预试验。
【在 x**y 的大作中提到】
: 多谢。这个试剂DharmaFECT，毒性大不大？细胞转染后死亡率高不高？
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