w**********o
发帖数: 128 | 1 想请教一个问题
wild type P53一般不稳定，用WB很难检测。我现在在一种病毒永生化的细胞（normal
cell）中用WB测到了P53，也就是说这是突变体的P53了？那么这个P53有意义吗或者说
这是P53吗？因为我用的抗体是普通P53 Ab，而突变体P53也就很难和他特异性的结合了
。此外，在这种我不知道他是怎么样突变的情况下，我怎么来设计引物做RT-PCR？
多谢各位了 |
r***e
发帖数: 2539 | 2 western应该没大问题，你用哪个抗体？只是某个特定的突变不能识别吧。而且你的情况
也不一定突变了，可能被stabilized。
normal
【在 w**********o 的大作中提到】
: 想请教一个问题
: wild type P53一般不稳定，用WB很难检测。我现在在一种病毒永生化的细胞（normal
: cell）中用WB测到了P53，也就是说这是突变体的P53了？那么这个P53有意义吗或者说
: 这是P53吗？因为我用的抗体是普通P53 Ab，而突变体P53也就很难和他特异性的结合了
: 。此外，在这种我不知道他是怎么样突变的情况下，我怎么来设计引物做RT-PCR？
: 多谢各位了
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w**********o
发帖数: 128 | 3 谢谢你的回复，你的意思是说我用regular p53 antibody检测出来的就是这个细胞系中
的本身的野生型的p53，而那些突变的在WB中没有体现出来了？（或者是说这种rugular
antibody,特异性没有那么强，所有的P53都反映出来了呢）
情况
【在 r***e 的大作中提到】
: western应该没大问题，你用哪个抗体？只是某个特定的突变不能识别吧。而且你的情况
: 也不一定突变了，可能被stabilized。
:
: normal
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m*****z
发帖数: 1451 | 4 你用的什么抗体？
normal
【在 w**********o 的大作中提到】
: 想请教一个问题
: wild type P53一般不稳定，用WB很难检测。我现在在一种病毒永生化的细胞（normal
: cell）中用WB测到了P53，也就是说这是突变体的P53了？那么这个P53有意义吗或者说
: 这是P53吗？因为我用的抗体是普通P53 Ab，而突变体P53也就很难和他特异性的结合了
: 。此外，在这种我不知道他是怎么样突变的情况下，我怎么来设计引物做RT-PCR？
: 多谢各位了
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t******y
发帖数: 716 | 5 楼主的生物学基础知识有待提高。p53被检测到很正常。抗体能够识别的目标序列长度
也就10个氨基酸左右，即使有突变，大部分情况也能被普通抗体识别。这种实验没有必
要做p53的RT-PCR。 |
o**i
发帖数: 1165 | 6 I am not an expert of cancer biology.
To my knowledge, wt p53 could exist in immortal cell lines, such as large T
transformed cells.
And I was taught, n years ago, that p53 could be induced by several factors,
such as DNA damage, viral infection and stress blablabla.
Your antibody probably cannot discriminate mutate from wt.
What assure you that p53 got mutated anyway? Am I missing something here.
说英文真XX累啊 老夫有待提高啊
normal
【在 w**********o 的大作中提到】
: 想请教一个问题
: wild type P53一般不稳定，用WB很难检测。我现在在一种病毒永生化的细胞（normal
: cell）中用WB测到了P53，也就是说这是突变体的P53了？那么这个P53有意义吗或者说
: 这是P53吗？因为我用的抗体是普通P53 Ab，而突变体P53也就很难和他特异性的结合了
: 。此外，在这种我不知道他是怎么样突变的情况下，我怎么来设计引物做RT-PCR？
: 多谢各位了
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w**********o
发帖数: 128 | 7 多谢指点。 不是生物出身，还在学习阶段，见笑了。
【在 t******y 的大作中提到】
: 楼主的生物学基础知识有待提高。p53被检测到很正常。抗体能够识别的目标序列长度
: 也就10个氨基酸左右，即使有突变，大部分情况也能被普通抗体识别。这种实验没有必
: 要做p53的RT-PCR。
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w**********o
发帖数: 128 | 8 学习了，多谢。 我没有证据来说他突变了，只是野生型的很难测的到，怀疑他是否突
变。不过您已经告诉我了immortalization could induce its expression. 多谢。
T
factors,
【在 o**i 的大作中提到】
: I am not an expert of cancer biology.
: To my knowledge, wt p53 could exist in immortal cell lines, such as large T
: transformed cells.
: And I was taught, n years ago, that p53 could be induced by several factors,
: such as DNA damage, viral infection and stress blablabla.
: Your antibody probably cannot discriminate mutate from wt.
: What assure you that p53 got mutated anyway? Am I missing something here.
: 说英文真XX累啊 老夫有待提高啊
:
: normal
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w**********o
发帖数: 128 | 9 多谢回复，问题解决了，我用 的是CST的。normal
【在 m*****z 的大作中提到】
: 你用的什么抗体？
:
: normal
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