h**********r
发帖数: 671 | 1 酵母做的少，e. coli做得多点。所以就有问题了。用的基本上是商业化的质粒，pESC-
leu.
问题是看不出来翻译起始位点ATG，而且多种版本的manual上面不提这个问题.不像E.
coli的pET系列,要么在NdeI要么在NcoI.
我是不是把带有ATG的ORF放在多克隆位点就行了？我亚克隆的片段自己有终止密码子，
在此之前也有tag,所以不需要载体的tag。而且载体的tag正好在C端。当然转录方向还
是要看的。
包子伺候！
多谢啊！ |
T****i
发帖数: 15191 | 2 好像pESC 系列没有kozak sequence。你要克隆其他物种的ORF，最好引物加 yeast
kozak consensus。
要是成了，你得发包子啊。
pESC-
【在 h**********r 的大作中提到】
: 酵母做的少，e. coli做得多点。所以就有问题了。用的基本上是商业化的质粒，pESC-
: leu.
: 问题是看不出来翻译起始位点ATG，而且多种版本的manual上面不提这个问题.不像E.
: coli的pET系列,要么在NdeI要么在NcoI.
: 我是不是把带有ATG的ORF放在多克隆位点就行了？我亚克隆的片段自己有终止密码子，
: 在此之前也有tag,所以不需要载体的tag。而且载体的tag正好在C端。当然转录方向还
: 是要看的。
: 包子伺候！
: 多谢啊！
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h**********r
发帖数: 671 | 3 多谢你的提醒！确实好像是没有kozak.
给你5个包子
你要是能贴个好用的kozak就更赞了
谢谢 |
T****i
发帖数: 15191 | 4 好像是AACAAC(ATG)。反正与mammal不一样。不过你最好google一下。我也许会记错。
【在 h**********r 的大作中提到】
: 多谢你的提醒！确实好像是没有kozak.
: 给你5个包子
: 你要是能贴个好用的kozak就更赞了
: 谢谢
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h**********r
发帖数: 671 | |
f**u
发帖数: 346 | 6 原核的SD序列和ATG间的距离很重要，所以经常ATG必须插在某个酶切位点。
真核的Kozak本身包含ATG，所以用什么酶切无所谓了。
另外真核通常认为Kozak不是必需的，但是加上不会有坏处。
还有就是我记得ATG后面的G据说很重要。
【在 h**********r 的大作中提到】
: 每个人不一样，这是最郁闷的地方。thanks!
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