W****C
发帖数: 1937 | 1 主要是怎么提高细胞的viability，分离过程（我用MACS去除其他细胞)有哪些trick？
激活的方法比较多， LPS, IgM, IL4, PMA...怎么激活最好？ |
s****9
发帖数: 932 | 2 Question is too broad. No one can answer your question.
？
【在 W****C 的大作中提到】
: 主要是怎么提高细胞的viability，分离过程（我用MACS去除其他细胞)有哪些trick？
: 激活的方法比较多， LPS, IgM, IL4, PMA...怎么激活最好？
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o**d
发帖数: 3080 | 3 个人经验：B cell在体外没有刺激的情况下死的很快，即使有血清也是一样。所以想提
高细胞存活率，动作快／实验连续是一个关键。一般杀老鼠，取脾，纯化B细胞，计数
，加刺激物中间是不停。
至于要激活，看你的实验目的了。 |
W****C
发帖数: 1937 | 4
谢谢楼上的。 肯定是加血清的啦， 而且要加超低IGG的血清。
应该是连续完成的， FACS鉴定可以同时做（用CD45R).
收细胞后是用来测药效的（cytotoxicity， CTG ASSAY).
刺激Bcell增殖的时候最好专一性好， 大概是因为LPS，PMA也刺激其他免疫细胞 （eg.
T)，我看别人基本都是跟IL4, IGM同时用的。
【在 o**d 的大作中提到】
: 个人经验：B cell在体外没有刺激的情况下死的很快，即使有血清也是一样。所以想提
: 高细胞存活率，动作快／实验连续是一个关键。一般杀老鼠，取脾，纯化B细胞，计数
: ，加刺激物中间是不停。
: 至于要激活，看你的实验目的了。
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s****9
发帖数: 932 | 5 用IgM 加anti-cd40刺激
eg.
【在 W****C 的大作中提到】
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: 谢谢楼上的。 肯定是加血清的啦， 而且要加超低IGG的血清。
: 应该是连续完成的， FACS鉴定可以同时做（用CD45R).
: 收细胞后是用来测药效的（cytotoxicity， CTG ASSAY).
: 刺激Bcell增殖的时候最好专一性好， 大概是因为LPS，PMA也刺激其他免疫细胞 （eg.
: T)，我看别人基本都是跟IL4, IGM同时用的。
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o**d
发帖数: 3080 | 6 我没有用过IL-4，但IgM是肯定可以的，如果能用cross－link的IgM效果会更好。
另外，CD40 or anti－CD ab 和BAFF（专一性很强）是常用的Bcell刺激物。
eg.
【在 W****C 的大作中提到】
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: 谢谢楼上的。 肯定是加血清的啦， 而且要加超低IGG的血清。
: 应该是连续完成的， FACS鉴定可以同时做（用CD45R).
: 收细胞后是用来测药效的（cytotoxicity， CTG ASSAY).
: 刺激Bcell增殖的时候最好专一性好， 大概是因为LPS，PMA也刺激其他免疫细胞 （eg.
: T)，我看别人基本都是跟IL4, IGM同时用的。
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