s****r
发帖数: 736 | 1 求教一个技术问题：
目的是在plasmid上一次引入三个site-directed mutation. 三个位点，间隔150bp, 800
bp, 和2K bp. 准备尝试用QuickChange Multiple Site-Directed Mutagenesis，但是
害怕间隔相差太大PCR会出错。也看了其他的一些方法，比如Andreas Seyfang &
Huaqian Jing的Multiple site-directed mutagenesis of more than 10 sites
simultaneously and in a single round （the schematic diagram was attached).
不过不确定accuracy和efficiency到底怎样。
不知道大家有什么好的建议？谢谢了先！ |
s******y
发帖数: 435 | 2 plasmid有多大，如果没超过8,9K的话，还是建议用Stratagene的那个QuickChange kit
，大不了就是做3次，顺利的话一周之内搞定。这篇paper提的方法倒是挺有意思，但是
不知道实际操作起来如何，以后如果有机会的话（比如碰到做大规模alanine screenin
g的时候）可以试试。
800
.
【在 s****r 的大作中提到】
: 求教一个技术问题：
: 目的是在plasmid上一次引入三个site-directed mutation. 三个位点，间隔150bp, 800
: bp, 和2K bp. 准备尝试用QuickChange Multiple Site-Directed Mutagenesis，但是
: 害怕间隔相差太大PCR会出错。也看了其他的一些方法，比如Andreas Seyfang &
: Huaqian Jing的Multiple site-directed mutagenesis of more than 10 sites
: simultaneously and in a single round （the schematic diagram was attached).
: 不过不确定accuracy和efficiency到底怎样。
: 不知道大家有什么好的建议？谢谢了先！
|
w******n
发帖数: 767 | 3 用高保真酶，整完了，测序确认，问题不大。
800
.
【在 s****r 的大作中提到】
: 求教一个技术问题：
: 目的是在plasmid上一次引入三个site-directed mutation. 三个位点，间隔150bp, 800
: bp, 和2K bp. 准备尝试用QuickChange Multiple Site-Directed Mutagenesis，但是
: 害怕间隔相差太大PCR会出错。也看了其他的一些方法，比如Andreas Seyfang &
: Huaqian Jing的Multiple site-directed mutagenesis of more than 10 sites
: simultaneously and in a single round （the schematic diagram was attached).
: 不过不确定accuracy和efficiency到底怎样。
: 不知道大家有什么好的建议？谢谢了先！
|
b******n
发帖数: 4225 | 4 这个方法看起来很有意思，只是如果有的mutation primer没有annealing到template
strand上，那不就没突变成功么？
10个位点啊，我不相信能有100%的正确性
多少会有一些少于10个位点突变成功的
800
.
【在 s****r 的大作中提到】
: 求教一个技术问题：
: 目的是在plasmid上一次引入三个site-directed mutation. 三个位点，间隔150bp, 800
: bp, 和2K bp. 准备尝试用QuickChange Multiple Site-Directed Mutagenesis，但是
: 害怕间隔相差太大PCR会出错。也看了其他的一些方法，比如Andreas Seyfang &
: Huaqian Jing的Multiple site-directed mutagenesis of more than 10 sites
: simultaneously and in a single round （the schematic diagram was attached).
: 不过不确定accuracy和efficiency到底怎样。
: 不知道大家有什么好的建议？谢谢了先！
|
i***l
发帖数: 1656 | 5 nod
plasmid有多大，如果没超过8,9K的话，还是建议用Stratagene的那个QuickChange kit
，大不了就是做3次，顺利的话一周之内搞定。
this is well established, and commercially QCed
kit
screenin
【在 s******y 的大作中提到】
: plasmid有多大，如果没超过8,9K的话，还是建议用Stratagene的那个QuickChange kit
: ，大不了就是做3次，顺利的话一周之内搞定。这篇paper提的方法倒是挺有意思，但是
: 不知道实际操作起来如何，以后如果有机会的话（比如碰到做大规模alanine screenin
: g的时候）可以试试。
:
: 800
: .
|
