m***o
发帖数: 272 | 1 用actin, GAPDH, TATA Binding protein(TBP), and 18s rRNA. Actin and tbp 显示
类似的降低，但是18s没变化。该选用那个来normalization呢？很多文章用18s，大家
用的时候是不是你的target gene 用1ulRT产物，而用18s的时候要稀释至少100倍呢，
不然Ct就在10，会不会因为量太高而显示不出该有的差异呢？作的是WT和knockout 老
鼠的liver，大家有没有什么好的建议？谢谢！
感觉选不好normalization， 做实验就好像有个定时炸弹在旁边一样不舒服。谢谢任何
建议！ |
k****o
发帖数: 589 | |
m***o
发帖数: 272 | 3 十分感谢！文章有些难，需要数学背景，打算再用文章里的UBC和rps18检测。如果都和
actin有类似的降低，说明那个样品就是低。用18SRNA总是觉得量太高，无法真正
normalization。而且18s是rRNA。 |
A******y
发帖数: 2041 | 4 What's your primer linearity range? If you don't know what I am talking
about go read up on RT-PCR and disregard all your results. Ct=10 is not
that bad, a lot of highly expressed protein are around there. |
n****0
发帖数: 696 | 5 一般不都是推荐ct在15-35么？
【在 A******y 的大作中提到】
: What's your primer linearity range? If you don't know what I am talking
: about go read up on RT-PCR and disregard all your results. Ct=10 is not
: that bad, a lot of highly expressed protein are around there.
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l***s
发帖数: 841 | 6 是的，不要低于15。
【在 n****0 的大作中提到】
: 一般不都是推荐ct在15-35么？
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s******y
发帖数: 28562 | 7 Ct 10 太高了，internal control 应该和你的目的基因在差不多的档次，否则
的话光是实验误差就把你的数据都掩盖住了（因为是对数关系）。而且一般来说Ct 12~
25 是比较可信的，超出这个范围之外的我们都不用的。
【在 m***o 的大作中提到】
: 用actin, GAPDH, TATA Binding protein(TBP), and 18s rRNA. Actin and tbp 显示
: 类似的降低，但是18s没变化。该选用那个来normalization呢？很多文章用18s，大家
: 用的时候是不是你的target gene 用1ulRT产物，而用18s的时候要稀释至少100倍呢，
: 不然Ct就在10，会不会因为量太高而显示不出该有的差异呢？作的是WT和knockout 老
: 鼠的liver，大家有没有什么好的建议？谢谢！
: 感觉选不好normalization， 做实验就好像有个定时炸弹在旁边一样不舒服。谢谢任何
: 建议！
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