h******u 发帖数: 602 | 1 是从HYBRIDOMA来的单抗。一直都是收集细胞培养的MEDIUM,直接用做免疫组化和
WESTERN。用几次后就扔掉。
现在想节约点,除了分装小体积,避免多次冻溶,是不是还可以加点proteinase
inhibitor? 别的招呢? |
s******y 发帖数: 28562 | 2 不要加protease inhibitor, 对于antibody 这种东西没有什么用。
使用过的抗体可以冷冻保存起来啊,一直可以反复使用好几次的。
【在 h******u 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是从HYBRIDOMA来的单抗。一直都是收集细胞培养的MEDIUM,直接用做免疫组化和 : WESTERN。用几次后就扔掉。 : 现在想节约点,除了分装小体积,避免多次冻溶,是不是还可以加点proteinase : inhibitor? 别的招呢?
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g********0 发帖数: 6201 | 3 抗体不怕反复冻融。
抗体的腐败反而是由于它的亲密战友-所谓工作液里起降背景的脱脂奶粉或BSA的快速腐败而
导致的。
我一向不认为脱脂奶粉或BSA能起多大的所谓降背景的作用。
我用抗体直接稀释在TBST或PBST里,含点triton就行了,我一抗里连叠氮钠都不加的。而如果有奶粉的话,加叠氮钠也没用,该臭就臭。
用完就冻起来,反复用几个月都没有问题。
总之,配抗体的buffer里除了抗体本身不要有其他蛋白,这样保质期就长了。 |
h******u 发帖数: 602 | 4 谢谢大家,长见识了,那就不加 inhibitor。
我是收集细胞培养液直接用,细胞培养液中有没有使抗体变坏的成分? |
g********0 发帖数: 6201 | 5 有啊,死细胞释放的蛋白,血清等等,培养基里有机物比较多,容易腐败。
【在 h******u 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 谢谢大家,长见识了,那就不加 inhibitor。 : 我是收集细胞培养液直接用,细胞培养液中有没有使抗体变坏的成分?
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