m******5
发帖数: 1383 | 1 似乎如果上样量少的话，western blot中特异性强的band能被commasie blue染上，想
过去似乎是合理的，因为在有band的位置富集了抗体
不过从另一方面来说，是不是可以利用这一点使得band cutting以及之后的质谱变容易
呢？ |
s******y
发帖数: 28562 | 2 没有这回事。
首先是背景里会有blocking agent, 然后，抗体富集再多一般也不如总蛋白多。
我以前染的时候看见就是一个脏兮兮的背景里面一长条ladder
【在 m******5 的大作中提到】
: 似乎如果上样量少的话，western blot中特异性强的band能被commasie blue染上，想
: 过去似乎是合理的，因为在有band的位置富集了抗体
: 不过从另一方面来说，是不是可以利用这一点使得band cutting以及之后的质谱变容易
: 呢？
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n***w
发帖数: 2405 | 3 我们实验室那个tech大爷会最后将用了n次的膜用gelcode 染， |
y******8
发帖数: 1764 | 4 Only suitable for IP or pull-down. |
y*******n
发帖数: 10 | |
I*****y
发帖数: 6402 | 6 这个不行，你block membrane的时候，上面沾了很多milk or bsa proteins，背景太多了
【在 m******5 的大作中提到】
: 似乎如果上样量少的话，western blot中特异性强的band能被commasie blue染上，想
: 过去似乎是合理的，因为在有band的位置富集了抗体
: 不过从另一方面来说，是不是可以利用这一点使得band cutting以及之后的质谱变容易
: 呢？
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a*****x
发帖数: 901 | 7 但似乎拿Ponceau staining没有问题啊 |
s********n
发帖数: 2939 | 8 Ponceau S staining is usually after transferring but before 1st blocking.
【在 a*****x 的大作中提到】
: 但似乎拿Ponceau staining没有问题啊
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f*******e
发帖数: 354 | 9 yes, no specific bands if after
【在 s********n 的大作中提到】
: Ponceau S staining is usually after transferring but before 1st blocking.
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b*********8
发帖数: 44 | 10 转完膜后用Ponceau S 染膜会不会影响后续的杂交？
Y
【在 s********n 的大作中提到】
: Ponceau S staining is usually after transferring but before 1st blocking.
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s******y
发帖数: 28562 | 11 可以很容易洗掉的
【在 b*********8 的大作中提到】
: 转完膜后用Ponceau S 染膜会不会影响后续的杂交？
:
: Y
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c**********e
发帖数: 230 | 12 millipore有个non-protein的blocking reagent，可以让你western完了以后再用一般
的染胶的方法染膜，效果还可以
【在 m******5 的大作中提到】
: 似乎如果上样量少的话，western blot中特异性强的band能被commasie blue染上，想
: 过去似乎是合理的，因为在有band的位置富集了抗体
: 不过从另一方面来说，是不是可以利用这一点使得band cutting以及之后的质谱变容易
: 呢？
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i******k
发帖数: 4625 | 13 blot过后的PVDF膜再用Coomassie blue染是完全可以的。如果染液新鲜，1-2分钟就够
了，马上脱色2-3次，每次不超过5分钟。这样染出来，条带清晰，背景干净。如果染的
时间过长，那背景就很难洗掉，而且脱色时间长的话，蛋白条带也会逐渐掉色变浅
至于试图染出lysate中特异条带，而这个蛋白不是特别富集的话，没有用的，因为这和
直接染胶没有什么区别 |
g**a
发帖数: 953 | 14 是这样的
【在 i******k 的大作中提到】
: blot过后的PVDF膜再用Coomassie blue染是完全可以的。如果染液新鲜，1-2分钟就够
: 了，马上脱色2-3次，每次不超过5分钟。这样染出来，条带清晰，背景干净。如果染的
: 时间过长，那背景就很难洗掉，而且脱色时间长的话，蛋白条带也会逐渐掉色变浅
: 至于试图染出lysate中特异条带，而这个蛋白不是特别富集的话，没有用的，因为这和
: 直接染胶没有什么区别
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